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热休克蛋白gp96功能及其应用研究进展
1
作者 桂明明 于武华 +3 位作者 冯露 郭三保 宋美玲 黄胜和 《中国医药科学》 2025年第12期18-21,59,共5页
热休克蛋白gp96属于HSP90家族,在遗传进化中高度保守,其亚细胞主要定位于内质网中,首要的功能是作为分子伴侣,协助目的蛋白折叠、伸展、组装和转运。gp96在免疫系统中也起着重要作用,在天然免疫方面,gp96与非抗原递呈细胞表面Toll样受体... 热休克蛋白gp96属于HSP90家族,在遗传进化中高度保守,其亚细胞主要定位于内质网中,首要的功能是作为分子伴侣,协助目的蛋白折叠、伸展、组装和转运。gp96在免疫系统中也起着重要作用,在天然免疫方面,gp96与非抗原递呈细胞表面Toll样受体(TLR)等相互作用,刺激产生各种细胞因子以激活免疫;在获得性免疫方面,gp96与抗原肽复合物结合,将抗原肽呈递给主要组织相容性复合体Ⅰ类(MHC-Ⅰ),引发机体产生抗原特异性T细胞免疫应答,从而清除抗原。近年研究发现许多疾病的发生发展与gp96异常表达密切相关;gp96在免疫佐剂和肿瘤免疫等方面也被发现具有广泛的应用前景。本文从热休克蛋白gp96的基本结构特征出发,围绕其功能和疾病方面的关系展开综述,旨在为热休克蛋白gp96在疾病的预防和治疗应用研究提供新的思路。 展开更多
关键词 热休克蛋白gp96 分子伴侣 免疫佐剂 肿瘤免疫
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毕赤酵母表达gp96-scFv抗体及生物活性测定 被引量：2
2
作者 桂明明 武慧英 +6 位作者 孙璐 徐亚星 赵报 李鑫 李长菲 王希东 孟颂东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期595-604,共10页
旨在利用毕赤酵母分泌表达gp96-scFv抗体,纯化后得到能特异性结合gp96抗原的小分子抗体片段(scFv)。根据gp96-scFv抗体基因序列,合成gp96-scFv抗体基因序列,将gp96-scFv抗体序列克隆到毕赤酵母表达质粒pPICZα-A,线性化的重组表达载体... 旨在利用毕赤酵母分泌表达gp96-scFv抗体,纯化后得到能特异性结合gp96抗原的小分子抗体片段(scFv)。根据gp96-scFv抗体基因序列,合成gp96-scFv抗体基因序列,将gp96-scFv抗体序列克隆到毕赤酵母表达质粒pPICZα-A,线性化的重组表达载体电转化到毕赤酵母X33,甲醇诱导目的蛋白表达,通过亲和层析法纯化目的蛋白,并以SDS-PAGE和Western blotting进行鉴定。通过Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS方法对gp96-scFv抗体的生物活性进行了检测。结果成功地构建了分泌表达抗gp96蛋白scFv抗体的毕赤酵母菌,每升毕赤酵母菌培养上清经纯化可获约50 mg gp96-scFv抗体,所获抗体其分子量大约为15 kDa,具有与gp96抗原特异性结合的活性。本研究通过毕赤酵母菌成功表达了gp96-scFv抗体,生物活性Western blotting、Immunofluorescence、ELISA、FACS分析表明该抗体能特异性结合gp96。 展开更多
关键词 gp96-scFv抗体 毕赤酵母 gp96 分泌表达 亲和力 特异性
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热休克蛋白gp96在恶性肿瘤中的研究进展 被引量：2
3
作者 钱丽媛 李长菲 +1 位作者 罗云敬 孟颂东 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2021年第9期993-1005,共13页
热休克蛋白90B1又称为糖蛋白96(gp96).gp96属于热休克蛋白90家族,是一种高度保守且普遍存在的糖蛋白.作为一种内质网蛋白,gp96在维持内质网稳态、内质网应激、钙稳态等方面起着重要的调控作用,这些调控网络在肿瘤的发生发展过程中起着... 热休克蛋白90B1又称为糖蛋白96(gp96).gp96属于热休克蛋白90家族,是一种高度保守且普遍存在的糖蛋白.作为一种内质网蛋白,gp96在维持内质网稳态、内质网应激、钙稳态等方面起着重要的调控作用,这些调控网络在肿瘤的发生发展过程中起着重要的作用.gp96作为分子伴侣在稳定和激活客户蛋白等方面有众多报道,其中包括HER2、整合素和Toll样受体等多个客户蛋白.大量研究表明,gp96在肝癌、乳腺癌、胃癌等不同类型的肿瘤中高表达,并在肿瘤的生长、侵袭和转移等方面起着重要的作用.本文从gp96的基本结构和功能及其在肿瘤发生发展中的作用等方面进行综述,并着重阐述细胞膜gp96相关的研究进展.最后,重点介绍基于胞膜gp96结构所设计的选择性小分子抑制剂、抗体和多肽等药物在肿瘤靶向治疗中的潜在应用. 展开更多
关键词 热休克蛋白gp96 分子伴侣 胞膜gp96 肿瘤 靶向治疗
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热休克蛋白HSP70和gp96增强乙肝DNA疫苗的细胞和体液免疫应答 被引量：9
4
作者 王彦中 王赛锋 +3 位作者 张小俊 李杨 赵世宇 孟颂东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期790-798,共9页
旨在以乙肝病毒（HBV）的主要结构蛋白-表面蛋白（HBsAg）和核心蛋白（HBcAg）作为抗原设计DNA疫苗,研究热休克蛋白HSP70和gp96作为新型免疫佐剂增强疫苗的细胞免疫和体液免疫水平。利用酶联免疫斑点实验、流式细胞内因子染色、3H-TdR... 旨在以乙肝病毒（HBV）的主要结构蛋白-表面蛋白（HBsAg）和核心蛋白（HBcAg）作为抗原设计DNA疫苗,研究热休克蛋白HSP70和gp96作为新型免疫佐剂增强疫苗的细胞免疫和体液免疫水平。利用酶联免疫斑点实验、流式细胞内因子染色、3H-TdR实验、酶联免疫吸附实验技术分析,结果显示HSP70和gp96可使疫苗的细胞免疫水平提高1~6倍,提高体液免疫水平20%~60%。研究结果为设计以HSP70和gp96作为免疫佐剂的新型乙肝治疗性疫苗提供了依据。 展开更多
关键词 乙肝治疗性疫苗 HSP70 gp96 佐剂
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gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在肺癌组织芯片中的表达及意义 被引量：5
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作者 郑海燕 李赟 +2 位作者 王兴芬 张向莲 王新允 《中国肺癌杂志》 CAS 2010年第8期790-794,共5页
背景与目的近年来研究显示gp96在机体发挥抗肿瘤的特异性细胞毒免疫应答中发挥重要作用。本研究旨在探讨热休克蛋白gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在不同进展阶段肺癌中的表达及生物学意义。方法应用免疫组化Envision法及组织芯片技术检... 背景与目的近年来研究显示gp96在机体发挥抗肿瘤的特异性细胞毒免疫应答中发挥重要作用。本研究旨在探讨热休克蛋白gp96与免疫相关基因CTLA-4、CD8在不同进展阶段肺癌中的表达及生物学意义。方法应用免疫组化Envision法及组织芯片技术检测89例原发肺癌、12例癌前病变、10例正常肺组织及12例淋巴结转移性肺癌中gp96、CTLA-4、CD8的表达,并分析其与肺癌临床病理指标的关系。结果①原发性肺癌组gp96的阳性率高于正常组与癌前病变组(P<0.05)。原发性肺癌组和癌前病变组CTLA-4的阳性率均高于正常组(P<0.05)。CD8在原发性肺癌组的阳性率高于正常组(P<0.05)。CD8阳性淋巴细胞高表达组gp96阳性率低于低表达组(P<0.05)。②gp96表达与患者的性别、分化程度和临床分期有关(P<0.05),而与年龄、肉眼类型、组织学分型和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。CTLA-4表达与年龄、分化程度有关(P<0.05),而与性别、肉眼类型、组织学分型、临床分期和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。CD8表达与临床分期有关(P<0.05),而与性别、年龄、肉眼类型、组织学分型、分化程度和有无淋巴结转移无关(P>0.05)。在鳞癌和小细胞癌中,gp96、CTLA-4的表达阳性率均高于CD8的表达(P<0.05)。③Gp96与CTLA-4表达呈正相关(P<0.05),与CD8表达呈负相关(P<0.05),CD8与CTLA-4表达呈负相关(P<0.05)。结论在肺癌中gp96的表达与CTLA-4、CD8密切相关,提示三者在肺癌的发生发展中起重要作用,可作为评估患者病情和估计预后的参考指标。 展开更多
关键词 肺肿瘤 组织芯片 gp96 CTLA-4 CD8 免疫组织化学
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热休克蛋白gp96肽复合物诱导的抗肿瘤免疫 被引量：5
6
作者 张天一 牛纪晓 +2 位作者 林琳 黄晓春 顾君一 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第1期17-20,共4页
目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白 (HSP)gp96 肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制。方法: 从肿瘤细胞中制备HSPgp96 肽复合物, 观察其免疫诱导作用。用不同剂量及不同来源的gp96 肽复合物免疫 6... 目的: 用不同种类肿瘤提取的热休克蛋白 (HSP)gp96 肽复合物纯化后免疫动物,观察其诱导抗肿瘤免疫的效应,并初步探讨其机制。方法: 从肿瘤细胞中制备HSPgp96 肽复合物, 观察其免疫诱导作用。用不同剂量及不同来源的gp96 肽复合物免疫 6组小鼠后, 用H22癌细胞攻击, 观察各组小鼠的肿瘤发生率、瘤重及瘤组织的形态学变化并与对照组相比较。观察gp96 肽复合物对小鼠腹腔巨噬细胞分泌一氧化氮 (NO)和杀瘤活性的影响。结果: 获得的纯化HSPgp96 肽复合物的Mr为 96 000。gp96 肽复合物的免疫效果与其剂量有关, 以 18μg/只的效果最明显。交叉免疫实验证明, 免疫小鼠能抵抗同种肿瘤细胞的攻击, 而对异种肿瘤细胞的则无免疫保护作用。gp96 肽复合物可刺激小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO同时杀瘤活性增高。结论: 从肿瘤细胞中分离纯化的HSPgp96 肽复合物免疫小鼠后, 可获得特异性的抗肿瘤作用; 其对肿瘤细胞的杀伤作用与gp96 肽复合物能增强小鼠腹腔巨噬细胞分泌NO增多有关。 展开更多
关键词 gp96-肽复合物 抗肿瘤免疫 巨噬细胞 一氧化氮
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热激蛋白gp96免疫学功能及在主动免疫治疗肿瘤和传染病中的应用 被引量：5
7
作者 徐亚星 王赛锋 +1 位作者 张小俊 孟颂东 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期261-266,共6页
热激蛋白gp96可特异性结合来源于肿瘤和病毒的抗原肽,与抗原呈递细胞表面CD91等受体作用进入胞内,并在内质网中将结合的抗原通过抗原呈递链呈递给MHCI类分子,激活特异性T细胞。同时,与细胞表面Toll样受体(TLR)TLR2、TLR4等相互作用,激... 热激蛋白gp96可特异性结合来源于肿瘤和病毒的抗原肽,与抗原呈递细胞表面CD91等受体作用进入胞内,并在内质网中将结合的抗原通过抗原呈递链呈递给MHCI类分子,激活特异性T细胞。同时,与细胞表面Toll样受体(TLR)TLR2、TLR4等相互作用,激活天然免疫。近期研究发现调节性T细胞(Treg)对gp96免疫功能有显著抑制作用,随着对影响gp96免疫功能的免疫抑制机制的深入了解,以及利用汉逊酵母表达有免疫活性的全长gp96蛋白体系的建立,gp96将在治疗肿瘤及传染性疾病中发挥更大的作用。 展开更多
关键词 gp96 T细胞 调节性T细胞 肿瘤 传染病
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负载gp96多肽复合物的树突状细胞抗耐药卵巢癌细胞株作用的实验研究 被引量：6
8
作者 杨淑莉 金月梅 +1 位作者 付莉 崔满华 《中国妇幼保健》 CAS 北大核心 2008年第33期4759-4762,共4页
目的:探讨以卵巢癌细胞(SKOV3)热休克蛋白gp96多肽复合物作为抗原,刺激树突状细胞增强其抗原呈递功能,增加对卵巢癌细胞和耐药卵巢癌细胞在体外的杀伤作用,为临床卵巢癌的辅助免疫治疗提供实验依据。方法:从卵巢癌细胞中提纯出gp96多肽... 目的:探讨以卵巢癌细胞(SKOV3)热休克蛋白gp96多肽复合物作为抗原,刺激树突状细胞增强其抗原呈递功能,增加对卵巢癌细胞和耐药卵巢癌细胞在体外的杀伤作用,为临床卵巢癌的辅助免疫治疗提供实验依据。方法:从卵巢癌细胞中提纯出gp96多肽复合物,并对其进行鉴定;与脐血诱导培养的树突细胞(DC)结合,制备gp96-DC复合物;将DC和负载抗原的DC分别加入脐血有核细胞和人外周血T淋巴细胞中,研究二者对卵巢癌细胞和耐药卵巢癌细胞的体外CTL效应。结果:提取后的蛋白质经WesternBlot鉴定,表明该蛋白为热休克蛋白gp96;两种DC对脐血有核细胞和人外周血T淋巴细胞均有明显的活化作用,但gp96-DC对卵巢癌细胞和耐药卵巢癌细胞有更强的杀伤活性。结论:卵巢癌细胞提取的热休克蛋白gp96刺激的树突状细胞疫苗在体外对卵巢癌细胞和耐药卵巢癌细胞具有明显的杀伤功能,作为一种辅助治疗手段为卵巢癌患者的治疗带来希望。 展开更多
关键词 树突状细胞 热休克蛋白gp96-肽复合物 免疫治疗 卵巢癌
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热休克蛋白gp96-肽复合物的提取及纯化 被引量：3
9
作者 张天一 牛纪晓 +2 位作者 周欣阳 林琳 顾君一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期690-693,共4页
目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharos... 目的:建立从H22肝癌细胞中提取、纯化热休克蛋白gp96肽复合物的方法。方法:①制备H22肝癌细胞蛋白:将H22肝癌细胞裂解、离心、过滤及透析后获得。②gp96肽复合物的纯化:上述可溶性H22肝癌细胞蛋白经分级硫酸铵盐析后,依次用ConASepharose亲和层析、SephadexG25更换缓冲液及DEAESephacel离子交换层析分离纯化。③gp96肽复合物的鉴定和浓度测定:所得蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳和Westernblot进行蛋白分子量及性质鉴定,Lowry法测定蛋白浓度。结果:分离、纯化得到的蛋白经SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳、银染鉴定为单一带,分子量为96kD;Westernblot结果证实为HSPgp96。每20ml压积H22细胞最终获得1mg的HSPgp96。结论:使用本分离纯化方法可获得高纯度HSPgp96肽复合物。 展开更多
关键词 HSP gp96-肽复合物 纯化 H22肝癌 小鼠
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肝癌基因谱动态表达及HSPgp96异常的临床价值 被引量：5
10
作者 吴信华 姚登福 +3 位作者 苏小琴 黄华 邱历伟 吴玮 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期76-80,共5页
目的:探讨肝细胞癌变过程中基因表达谱的动态变化,观察热休克蛋白(HSP)gp96表达及其在肝癌早期诊断及判断预后方面的临床价值.方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌发生,观察肝病理组织学(HE染色)改变,用全基因组芯片分... 目的:探讨肝细胞癌变过程中基因表达谱的动态变化,观察热休克蛋白(HSP)gp96表达及其在肝癌早期诊断及判断预后方面的临床价值.方法:以2-乙酰氨基芴(2-FAA,0.05%)喂饲SD大鼠诱发肝癌发生,观察肝病理组织学(HE染色)改变,用全基因组芯片分析肝基因表达谱的动态变化,以巢式逆转录酶链反应扩增gp96基因片段.结果:SD大鼠在喂饲2-FAA后,肝细胞在诱癌早期发生颗粒样变性,中期出现不典型增生,后期见大量癌巢结节.肝癌发生过程中大鼠肝基因表达谱明显改变,与对照大鼠比较,癌变大鼠gp96上调3倍;诱癌变过程中,肝组织gp96 mRNA表达明显增加,变性组,癌前组和癌变组的肝组织中gp96基因表达均明显高于正常对照组(90.9%,100%,100%vs 16.67%,P<0.05).结论:肝细胞癌变过程中基因表达谱明显改变,其中gp96 mRNA呈过度表达,其分析有利于肝癌的诊断和预后判断. 展开更多
关键词 肝细胞癌 热休克蛋白gp96 基因芯片 巢式逆转录酶链反应
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gp96多肽复合物介导的细胞毒性T淋巴细胞对食管腺癌细胞的免疫杀伤作用 被引量：4
11
作者 马丽萍 潘秀英 +2 位作者 李娜 刘玉京 陈晓欣 《北京大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期525-528,共4页
目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;... 目的 :研究肿瘤细胞来源的gp96多肽复合物介导的对同一类型肿瘤的免疫治疗作用。方法 :提取纯化食管腺癌细胞系SEG 1裸鼠成瘤组织的gp96蛋白多肽复合物 ,与外周血单个核细胞 (PBMNC)诱导培养的树突状细胞(DC)结合 ,制备gp96 DC疫苗 ;台盼蓝拒染法测定淋巴细胞增殖率 ;ELISA方法检测细胞毒性T淋巴细胞 (CTL)培养上清液的γ干扰素 (IFN γ)含量 ,MTT法检测CTL对靶细胞SEG 1的杀伤率。结果 :5 5g瘤组织提取纯化gp96蛋白12 0 μg ;单独DC、单独gp96及gp96 DC均能刺激淋巴细胞增殖 ,产生CTL ,释放IFN γ ,对靶细胞SEG 1均显示一定的杀伤作用 ,以gp96 DC的作用最明显 ,在效靶比 4 0∶1时 ,杀伤率为 6 8%。单独DC诱导的CTL对SEG 1、K5 6 2的杀伤作用与非抗原刺激的淋巴细胞比较 ,统计学差异无显著性。结论 :肿瘤来源的热休克蛋白gp96可使DC具有更强的刺激T淋巴细胞增殖的能力 ,所产生的CTL对靶肿瘤细胞有明显的特异杀伤作用。 展开更多
关键词 热休克蛋白gp96 杀伤作用 CTL 细胞毒性T淋巴细胞 DC 食管腺癌 介导 提取纯化 多肽 复合物
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热休克蛋白gp96对巨噬细胞功能的影响 被引量：2
12
作者 张天一 王华 +3 位作者 周欣阳 施海燕 林琳 顾君一 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第2期153-158,共6页
背景与目的:热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)gp96在抗原递呈和肿瘤特异性免疫治疗中具有重要作用,但其对巨噬细胞的作用机制尚待深入研究。本研究旨在探讨HSPgp96对小鼠腹腔巨噬细胞(peritonealelicitedmacrophages,PEMφ)功能的影响... 背景与目的:热休克蛋白(heatshockprotein,HSP)gp96在抗原递呈和肿瘤特异性免疫治疗中具有重要作用,但其对巨噬细胞的作用机制尚待深入研究。本研究旨在探讨HSPgp96对小鼠腹腔巨噬细胞(peritonealelicitedmacrophages,PEMφ)功能的影响。方法:应用激光扫描共聚焦显微术,结合特异性荧光探针Fluo3-AM、DAF-FM-DA和H2DCF-DA,检测在HSPgp96作用下,腹腔巨噬细胞内钙离子(Ca2+)、一氧化氮(NO)和活性氧(ROS)的动态变化,并用荧光标记技术检测小鼠腹腔巨噬细胞MHCⅡ及CD86的表达强度和分布的变化。结果:小鼠腹腔巨噬细胞受HSPgp96刺激后,细胞内Ca2+、NO和ROS的生成量都快速升高,分别在刺激后30s、80s和580s时达峰值,增幅分别为(161.06±70.99)%、(77.58±31.17)%和(647.28±185.70)%。小鼠腹腔巨噬细胞受HSPgp96刺激后MHCⅡ阳性表达率:对照组为(40.9±3.5)%,HSPgp96(60mg/L)组为(61.8±5.1)%;CD86阳性表达率:对照组为(23.1±3.1)%,HSPgp96(60mg/L)组为(54.9±2.0)%。结论:HSPgp96在体外可使小鼠腹腔巨噬细胞内Ca2+、NO及ROS生成量明显增加;使抗原递呈分子MHCⅡ、CD86的表达明显上调。 展开更多
关键词 热休克蛋白gp96 巨噬细胞 H22肝癌细胞 小鼠
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肿瘤源性热休克蛋白gp96诱导淋巴细胞反应及其抗肿瘤效应 被引量：4
13
作者 朱昌来 林琳 张天一 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第3期234-237,共4页
目的研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。方法利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8... 目的研究肿瘤细胞来源的热休克蛋白gp96-多肽复合物在体外诱导脾淋巴细胞的特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)反应。方法利用蛋白纯化技术、SDS-PAGE凝胶电泳及Western blot法分离纯化、鉴定gp96-多肽;通过流式细胞术、免疫荧光技术、CCK-8法等检测经gp96多肽诱导的CD8+T细胞及其抗肿瘤效应。结果经鉴定获得纯化的热休克蛋白;流式细胞仪检测表明,经gp96-肽复合物诱导后的CD8+T细胞比例达到近70%,远远高于对照组的35%、26%;该活化的CTL细胞在效靶比为50∶1时的肿瘤杀伤率达72%,与对照组相比具有统计学意义;激光共聚焦显微镜观察证实实验诱导组的培养上清能诱导H22肿瘤细胞凋亡的形态学改变。结论肿瘤来源的热休克蛋白gp96-肽复合物能诱导小鼠脾淋巴细胞的CTL反应,该活化的CTL具有特异性抗H22肿瘤细胞的免疫作用,并能分泌免疫活性物质诱导H22肿瘤细胞凋亡。 展开更多
关键词 gp96-肽复合物 H22细胞 细胞毒性T淋巴细胞 细胞凋亡
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热休克蛋白gp96-肽复合物体外对人肝癌细胞的抗肿瘤效应 被引量：3
14
作者 吴信华 庄红芹 +3 位作者 鞠少卿 戚菁 施维 姚登福 《江苏医药》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期409-411,共3页
目的研究热休克蛋白gp96-肽复合物修饰树突状细胞(DC)后对人肝癌细胞的体外特异抗肿瘤效应。方法从人原发性肝癌组织中提取gp96-肽复合物,用其修饰DC细胞后与T淋巴细胞共同培养,以MTT法检测该复合物介导的细胞毒性T细胞(CTL)对不同来源... 目的研究热休克蛋白gp96-肽复合物修饰树突状细胞(DC)后对人肝癌细胞的体外特异抗肿瘤效应。方法从人原发性肝癌组织中提取gp96-肽复合物,用其修饰DC细胞后与T淋巴细胞共同培养,以MTT法检测该复合物介导的细胞毒性T细胞(CTL)对不同来源人肝癌细胞的抗肿瘤效应,并与粗提抗原修饰DC细胞组相比较。结果 gp96-肽复合物诱导的CTL对原代肝癌细胞杀伤效率为74.3%,明显高于粗提抗原组(42.5%)和未加抗原组(14.4%)(P<0.01),粗提抗原组对肝癌细胞杀伤效率高于未加抗原组(P<0.01)。且该复合物的抗肿瘤效应具有一定的组织特异性。结论 gp96-肽复合物修饰的DC细胞,在体外能刺激产生特异的抗肿瘤细胞毒性T细胞,因而热休克蛋白gp96在肿瘤免疫治疗中具有重要的实用价值。 展开更多
关键词 gp96-肽复合物 树突状细胞 肝癌
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gp96、Mcl-1在肝硬化和肝癌组织中表达及意义 被引量：3
15
作者 李峰 魏群 +1 位作者 黄东凤 张弘 《检验医学》 CAS 2015年第2期185-190,共6页
目的通过研究gp96、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)蛋白在肝硬化和肝癌组织中的表达及临床病理学意义,初步探讨其与肝硬化和肝癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学ENVISION法分别检测19例肝硬化组织(癌旁肝硬化组织)、32例肝癌组织和21... 目的通过研究gp96、髓样细胞白血病-1(Mcl-1)蛋白在肝硬化和肝癌组织中的表达及临床病理学意义,初步探讨其与肝硬化和肝癌发生、发展的关系。方法采用免疫组织化学ENVISION法分别检测19例肝硬化组织(癌旁肝硬化组织)、32例肝癌组织和21例对照肝组织(癌旁非硬化肝组织)中gp96、Mcl-1的表达,并分析其各自表达与肝癌临床病理学特征的关系。取来源于同一患者的肝癌组织、癌旁肝硬化组织或癌旁非肝硬化组织,分别配对检测gp96、Mcl-1,比较两者的阳性表达率。结果对照组、肝硬化组和肝癌组gp96阳性表达率逐渐递增,差异有统计学意义(P<0.05);gp96的阳性表达与肿瘤有无包膜、TNM分期有关(P<0.05),与患者的性别、年龄、肿瘤大小、血清甲胎蛋白(AFP)值、组织学分级及临床分期无关(P>0.05)。肝癌组和肝硬化组Mcl-1阳性表达率明显高于对照组(P<0.05),但肝癌组和肝硬化组之间差异无统计学意义(P>0.05);Mcl-1阳性表达与肿瘤有无坏死和TNM分期有关(P<0.05)。肝癌组gp96阳性表达率明显高于配对癌旁肝硬化组及配对癌旁非肝硬化组(P均<0.05);而肝癌组Mcl-1阳性表达率明显高于配对癌旁非肝硬化组,与配对癌旁肝硬化组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 gp96、Mcl-1过表达可能与肝癌的发生、发展有关。gp96可能参与了肝硬化的发生、发展及向肝癌的恶性转化,有助于判断肝癌患者的预后。 展开更多
关键词 gp96 髓样细胞白血病-1 肝细胞癌 肝硬化
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热休克蛋白HSP70和gp96在抗病毒感染中的作用 被引量：4
16
作者 杨柳萌 刘红亮 郑永唐 《细胞生物学杂志》 CSCD 北大核心 2004年第5期483-486,共4页
热休克蛋白(HSP)是一组在进化上高度保守、具有重要生理功能的蛋白质家族,是生物在应激条件下产生的一种非特异性防御产物,在调节免疫应答和抗病毒反应中起重要作用。现简要介绍HSP70、gp96(HSP96,GRP94)这两种HSP与病毒感染的关系及在... 热休克蛋白(HSP)是一组在进化上高度保守、具有重要生理功能的蛋白质家族,是生物在应激条件下产生的一种非特异性防御产物,在调节免疫应答和抗病毒反应中起重要作用。现简要介绍HSP70、gp96(HSP96,GRP94)这两种HSP与病毒感染的关系及在抗病毒感染中的作用。 展开更多
关键词 热休克蛋白 HSP70 gp96 病毒 感染 HIV 宿主细胞
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热应激对慢性粒细胞白血病细胞系K562中热休克蛋白gp96表达的影响及其意义 被引量：2
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作者 王昕 史斌 +3 位作者 王申五 董建强 崔建英 韩淑霞 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2006年第4期667-672,共6页
本研究查明不同热应激条件对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞中热休克蛋白gp96表达量的影响,为寻找增加K562细胞中gp96的提取量的最佳热应激条件提供实验依据。用免疫组织化学方法检测经38、40、42、44、46及48℃水浴热休克处理30分钟后... 本研究查明不同热应激条件对慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞中热休克蛋白gp96表达量的影响,为寻找增加K562细胞中gp96的提取量的最佳热应激条件提供实验依据。用免疫组织化学方法检测经38、40、42、44、46及48℃水浴热休克处理30分钟后的K562细胞中gp96表达量的变化;以平均阳性细胞百分率和平均荧光强度为指标,用流式细胞术研究40、44、48及52℃各水浴热休克处理30分钟对K562细胞中gp96表达量的影响;利用免疫印记原理,用Westernblot技术研究K562细胞经40、44、48与52℃水浴各休克处理30分钟后gp96表达量的变化。结果表明免疫组织化学方法显示gp96主要在胞浆内表达,在48℃水浴热休克处理30分钟时,强阳性的细胞数最多,积分也最高;流式细胞术显示平均阳性细胞百分率和平均荧光强度均在48℃水浴热休克处理30分钟组达高峰,各温度间gp96表达量的差异有统计学意义;Westernblot显示48℃水浴热休克处理30分钟时gp96的表达量达到高峰,各温度间gp96表达量的差异有统计学意义。结论48℃水浴热休克处理30分钟,gp96在K562细胞中的表达量达到高峰,该条件可作为提取K562细胞gp96的一个有效预处理条件。 展开更多
关键词 慢性粒细胞白血病 热休克蛋白 gp96 肿瘤免疫 热应激
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热休克蛋白gp96抗肿瘤免疫的研究进展 被引量：4
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作者 岳培彬 杨树德 黄常志 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第3期225-227,共3页
热休克蛋白 (HSP) gp96是一种高度保守和呈单态性的蛋白质。它具有分子伴侣功能 ,能与细胞内大量多肽非共价结合而不受细胞单倍型和MHC分子的影响。gp96 肽复合物也可在体外形成 ,并具有与体内相似的免疫活性。gp96参与MHCⅠ类抗原的... 热休克蛋白 (HSP) gp96是一种高度保守和呈单态性的蛋白质。它具有分子伴侣功能 ,能与细胞内大量多肽非共价结合而不受细胞单倍型和MHC分子的影响。gp96 肽复合物也可在体外形成 ,并具有与体内相似的免疫活性。gp96参与MHCⅠ类抗原的提呈。用肿瘤源gp96 肽复合物免疫小鼠可诱发抗相应肿瘤细胞的MHCⅠ类限制性CD8+ 细胞毒性T细胞免疫应答 ,并能产生记忆性T细胞应答 ,具备了作为疫苗的一个关键要素 ,为肿瘤免疫治疗开辟了一个新的途径。 展开更多
关键词 热休克蛋白 gp96 抗原提呈 抗肿瘤免疫 疫苗 肿瘤 免疫治疗
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从K562细胞中提取热休克蛋白GP96及其对人树突状细胞分化和功能的影响 被引量：2
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作者 陈以娟 史斌 +1 位作者 王申五 崔建英 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 2004年第5期620-624,共5页
本研究旨在建立从K5 6 2细胞系中提取热休克蛋白GP96的方法 ,进而研究GP96对人树突状细胞分化和功能的影响。采用蛋白分离提纯技术 ,将K5 6 2细胞裂解 ,经饱和硫酸铵沉淀、亲和层析、离子交换层析后提纯出热休克蛋白GP96 ,用SDS PAGE凝... 本研究旨在建立从K5 6 2细胞系中提取热休克蛋白GP96的方法 ,进而研究GP96对人树突状细胞分化和功能的影响。采用蛋白分离提纯技术 ,将K5 6 2细胞裂解 ,经饱和硫酸铵沉淀、亲和层析、离子交换层析后提纯出热休克蛋白GP96 ,用SDS PAGE凝胶电泳和Westernblot方法对其进行鉴定。将提纯的GP96加入从正常人外周血单个核细胞诱导培养的树突状细胞 (dendriticcell,DC)中 ,通过流式细胞术检测DC细胞表型变化 ,用MTT法测定混合淋巴细胞反应 (mixedlymphocytereaction ,MLR)。结果表明 :从 1× 10 1 0 K5 6 2细胞中能提纯出热休克蛋白GP96 6 0 - 80 μg ;加入GP96制备的HSP DC ,其细胞表面标志CD83、CD86和HLA DR的表达率比常规培养DC明显升高 ,CD1a表达率降低 (P <0 .0 5 ) ;HSP DC比常规培养DC具有更强的刺激混合淋巴细胞反应的能力 (P <0 .0 5 )。结论 :从K5 6 2细胞中可以提取出热休克蛋白GP96 ;热休克蛋白GP96可以促进树突状细胞分化成熟 。 展开更多
关键词 热休克蛋白 热休克蛋白gp96 树突状细胞 肿瘤免疫 肿瘤疫苗
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人乳腺癌中葡萄糖调节蛋白94(Grp94/Gp96)的表达及意义 被引量：5
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作者 应小平 杨守京 +1 位作者 王敏 王映梅 《现代肿瘤医学》 CAS 2003年第3期176-177,共2页
目的　探讨人乳腺浸润性导管癌中葡萄糖调节蛋白 94 (glucose -regulatedprotein ,GRP94 )的表达与乳腺癌生长、浸润及转移的关系。方法　采用DakoEnvision免疫组织化学染色法对 30例乳腺癌中的GRP94进行免疫组化染色。结果　乳腺浸润... 目的　探讨人乳腺浸润性导管癌中葡萄糖调节蛋白 94 (glucose -regulatedprotein ,GRP94 )的表达与乳腺癌生长、浸润及转移的关系。方法　采用DakoEnvision免疫组织化学染色法对 30例乳腺癌中的GRP94进行免疫组化染色。结果　乳腺浸润性导管癌 30例 ,其中有淋巴结癌转移的 15例 ,GRP94阳性 1例 ,弱阳性 5例 ,阴性 9例 ;无淋巴结癌转移的 15例 ,GRP94阳性 10例 ,弱阳性 2例 ,阴性 3例 ;有淋巴结癌转移组GRP94表达低 ,无淋巴结癌转移组GRP94表达高 ;(P <0 0 5 ) ,两组之间存在显著差异。结论　在乳腺浸润性导管癌中GPR94的表达与转移有关 ,低表达者往往有转移。 展开更多
关键词 人乳腺癌 葡萄糖调节蛋白94 热休克蛋白 Grp94/gp96 肿瘤生长 肿瘤浸润 肿瘤转移
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