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GOX-CP4EPSP转化甘蓝型油菜的抗草甘膦研究 被引量:4
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作者 万丽丽 王转茸 +3 位作者 辛强 董发明 洪登峰 杨光圣 《湖北农业科学》 2016年第10期2661-2666,共6页
利用Genome walking方法在孟山都抗农达油菜(Brassica napus L.)中克隆了GOX-CP4EPSP双顺反子结构。利用农杆菌介导的遗传转化方法将PCAMBIA-GOX-CP4EPSP植物双元表达载体转化甘蓝型油菜Pol CMS恢复系"7-5"获得转基因植株。... 利用Genome walking方法在孟山都抗农达油菜(Brassica napus L.)中克隆了GOX-CP4EPSP双顺反子结构。利用农杆菌介导的遗传转化方法将PCAMBIA-GOX-CP4EPSP植物双元表达载体转化甘蓝型油菜Pol CMS恢复系"7-5"获得转基因植株。在田间对转基因植株喷施400倍的农达(41%草甘膦异丙胺盐),所有的转基因家系都能存活,而非转基因Pol CMS恢复系"7-5"全部死亡。在转基因植株叶片中能够检测到GOX和CP4EPSP基因的表达。对转基因T1代3个家系在60 mg/L草甘膦培养基上的发芽试验以及GUS染色分析表明抗草甘膦的单株能表达与GOX-CP4EPSP共转化的GUS蛋白质,而对草甘膦敏感的单株和野生型对照植株都不能表达GUS蛋白质。鉴于GOX-CP4EPSP双顺反子在转基因油菜中的有效性和稳定性,可以作为双子叶植物遗传转化的筛选标记。 展开更多
关键词 油菜(Brassica NAPUS L.) gox-cp4epsp 双顺反子 草甘膦抗性 农达 筛选标记
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含抗草甘膦 CP4-EPSPS 基因和耐逆 Trihelix 类转录因子GmGT-2 A基因的植物表达载体构建及转化验证 被引量:2
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作者 李雁杰 朱丹华 +3 位作者 冯小锋 高莎 杨清华 董德坤 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2015年第2期133-140,共8页
高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接... 高效易用的植物表达载体在基因功能相关研究中起着重要的作用。以植物表达载体p BA002为基础载体,使用抗草甘膦CP4-EPSPS基因替换原载体的Bar筛选标记基因,获得新的植物表达载体p ES002。将大豆耐逆相关Trihelix类转录因子Gm GT-2A连接到p ES002,构建了同时含耐逆相关基因和抗除草剂标记基因的植物表达载体p ES002-Gm GT-2A。利用农杆菌介导的花序浸润法转化拟南芥,并对转基因植株进行抗草甘膦和耐盐性鉴定。结果表明,转基因植株在抗草甘膦和耐盐性上均显著强于对照,表明该载体可以用于转基因相关的基因功能研究。 展开更多
关键词 草甘膦 转录因子 表达载体
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Bar+CP4EPSPS基因转化紫花苜蓿的研究及抗性鉴定
3
作者 王英哲 王一楠 +3 位作者 任伟 徐安凯 刘艳芝 郝东云 《北方园艺》 CAS 北大核心 2019年第18期32-39,共8页
为了提高苜蓿抗除草剂的能力,以'公农1号'紫花苜蓿为试验材料,采用农杆菌介导的方法将Bar基因和CP4EPSPS基因转入紫花苜蓿中,研究了优化影响转化的5个主要因子(分别为外植体、农杆菌种类、侵染浓度、共培养时间、筛选浓度),建... 为了提高苜蓿抗除草剂的能力,以'公农1号'紫花苜蓿为试验材料,采用农杆菌介导的方法将Bar基因和CP4EPSPS基因转入紫花苜蓿中,研究了优化影响转化的5个主要因子(分别为外植体、农杆菌种类、侵染浓度、共培养时间、筛选浓度),建立了农杆菌介导的'公农1号'紫花苜蓿高效转化体系,获得转基因植株。结果表明:选择再生苗叶片作为外植体、EHA105农杆菌侵染、菌液浓度OD600值为0.8、共培养3 d、转化过程中草铵膦筛选浓度选择2 mg·L-1为宜,是最佳转化方案。试验结合分子检测和试纸条检测初步证明目的基因已经整合到紫花苜蓿中,最终喷施草甘膦确定12株为转基因植株。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 转化 农杆菌 BAR基因 CP4epspS基因
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Roundup Ready大豆中Lectin、CaMV 35S、NOS和CP4 EPSPS基因的提取与RT-PCR定性范围研究
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作者 王飞 陈伟莉 +3 位作者 付宝莲 王硕 徐艳辉 许传彬 《检验检疫科学》 2009年第1期14-17,共4页
[目的]研究Roundup Ready大豆的Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的RT-PCR定性范围。[方法]用CTAB法提取DNA,对Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的检测条件进行了优化,确定了被检测基因在相同RT-PCR条件下的定性... [目的]研究Roundup Ready大豆的Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的RT-PCR定性范围。[方法]用CTAB法提取DNA,对Lectin、CaMV35S、NOS和CP4EPSPS等被检测基因的检测条件进行了优化,确定了被检测基因在相同RT-PCR条件下的定性范围。[结果]研究发现,不同被检测基因在相同RT-PCR条件下的浓度检出范围不同。Lectin为0.05~792mg/L,CaMV35S为0.25~792mg/L,NOS为0.25~396mg/L,CP4EPSPS为0.05~1980mg/L;共同的方法检出限LOD为5ng,体系浓度范围为0.25~396mg/L。[结论]确定了Roundup Ready大豆被检测基因的定性范围和检出限,可应用于大豆中相关基因的检测。 展开更多
关键词 大豆 LECTIN CaMV 35S NOS CP4 epspS RT-PCR
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转基因大豆GTS 40-3-2产品加工过程中lectin和cp4 epsps成分降解规律研究进展 被引量:1
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作者 杜艳 陈复生 +3 位作者 夏义苗 刘昆仑 张丽芬 刘伯业 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2019年第6期107-115,共9页
自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方... 自转基因作物诞生以来,对其质疑之声从未间断。GTS 40-3-2是最早获批、应用最广泛的转基因大豆,为了更好地保护消费者知情权,国内外学者研究了不同大豆产品的加工工艺,探讨了转基因成分的变化规律,其关注点主要在转基因大豆种子检测方法的开发应用和食品(如豆浆、豆腐等)加工过程中外源成分分子量、含量的变化等方面,而关于食品加工过程中转基因成分的降解机理及本质的影响因素涉及较少。从物理、化学、生物作用3个方面对前人的研究进行梳理,分析转基因大豆GTS 40-3-2中 lectin 和 cp 4 epsps 基因降解的影响因素、降解规律,旨在找到减少甚至去除转基因成分的有效方式,为转基因大豆制品的检测和生产调控提供科学依据。 展开更多
关键词 转基因大豆 GTS 40 3 2 LECTIN 基因 cp4 epspS 基因 降解
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转EPSPS基因大豆植株中蛋白的表达 被引量:4
6
作者 邢珍娟 李飞武 +5 位作者 刘娜 李葱葱 康岭生 宋新元 邵改革 张明 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期981-984,989,共5页
采用ELISA定量测定法研究了转EPSPS基因大豆不同生长时期不同器官中CP4EPSPS蛋白含量的变化。结果表明:转EPSPS基因大豆不同器官在不同生育期CP4EPSPS蛋白含量表现出较大的差异,R8期籽粒中的CP4EPSPS蛋白含量在所有时期和所有组织中... 采用ELISA定量测定法研究了转EPSPS基因大豆不同生长时期不同器官中CP4EPSPS蛋白含量的变化。结果表明:转EPSPS基因大豆不同器官在不同生育期CP4EPSPS蛋白含量表现出较大的差异,R8期籽粒中的CP4EPSPS蛋白含量在所有时期和所有组织中蛋白含量最高;上位叶和下位叶中CP4EPSPS蛋白除V3~V5期和R8期外的表达趋势一致,茎上部和茎下部中CP4EPSPS蛋白存不同时期表达动态趋势基本一致,根中CP4EPSPS蛋白含量在V3~V5期下降,然后逐渐升高,R1~R8期有一个大幅度的下降过程。从V1期至R8期,随着植株的不断生长,各组织中CP4EPSPS蛋白的含量有明显的变化。 展开更多
关键词 转基因大豆 CP4 epspE蛋白含量 酶联免疫吸附测定
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Expression Profiles of <i>psbA, ALS, EPSPS</i>, and Other Chloroplastic Genes in Response to PSII-, ALS-, and EPSPS-Inhibitor Treatments in <i>Kochia scoparia</i> 被引量:6
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作者 Vijay K. Varanasi Shahniyar Bayramov +1 位作者 P. V. Vara Prasad Mithila Jugulam 《American Journal of Plant Sciences》 2017年第3期451-470,共20页
Kochia (Kochia scoparia L. Schrad.), also known as tumbleweed, is an economically important annual C4 broadleaf weed found throughout the US Great Plains. Several herbicides with different modes of action are used in ... Kochia (Kochia scoparia L. Schrad.), also known as tumbleweed, is an economically important annual C4 broadleaf weed found throughout the US Great Plains. Several herbicides with different modes of action are used in the management of kochia. The effect of commonly used herbicides on the expression of their target site(s) and photosynthetic/chloroplastic genes is poorly understood in weed species, including kochia. The objective of this research was to characterize the expression profiles of herbicide target-site genes, KspsbA, KsALS, and KsEPSPS upon treatment with PSII- (e.g. atrazine), ALS- (e.g. chlorsulfuron), and EPSPS- (e.g. glyphosate)-inhibitors, respectively, in kochia. Furthermore, the expression of genes involved in photosynthesis (e.g. KsRubisco, KsCAB, and KsPPDK) was also determined in response to these herbicide treatments. KspsbA was strongly upregulated (>200-fold) 24 h after atrazine treatment. Transcript levels of the KsALS or KsEPSPS genes were 7 and 3-fold higher 24 h after chlorsulfuron or glyphosate treatment, respectively. KsRubisco, a Calvin cycle gene important for CO2 fixation, was upregulated 7 and 2.6-fold 8 and 24 h after glyphosate and chlorsulfuron treatments, whereas it downregulated 8 and 24 h after atrazine treatment. The transcript levels of KsPPDK remained unchanged after glyphosate treatment but increased 1.8-fold and decreased 2-fold at 24 h after chlorsulfuron and atrazine treatments, respectively. KsCAB remained unchanged after chlorsulfuron treatment, but was downregulated after glyphosate and atrazine treatments. The results show that herbicide treatments not only affect the respective target-site gene expression, but also influence the genes involved in the critical photosynthetic pathway. 展开更多
关键词 Kochia scoparia L. Schrad. C4 Herbicide Stress Gene Expression PSBA ALS epspS Photosynthesis Rubisco PPDK CAB
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转基因大豆种植对根际土壤酶活性和养分的影响 被引量:13
8
作者 章秋艳 李刚 +5 位作者 杨志国 王丽娟 王慧 常泓 杨殿林 赵建宁 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期409-413,共5页
采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶... 采用盆栽试验,以耐草甘膦大豆M88、抗虫耐草甘膦大豆ZB及常规大豆中黄13为研究对象,比较分析转基因大豆对根际土壤酶活性和养分含量的影响。结果表明,在大豆成熟期时,与常规大豆中黄13相比,M88、ZB根际土壤碱性磷酸酶活性、过氧化氢酶活性、速效磷含量无显著差异,硝态氮含量显著下降。根际土壤脲酶活性、铵态氮含量则表现不同,其变化随大豆品种的不同而不同。相较于常规大豆中黄13,M88根际土壤脲酶活性和铵态氮含量无显著差异;ZB根际土壤脲酶活性显著下降,而铵态氮含量则显著上升。 展开更多
关键词 转基因大豆 CP4 epsps耐草甘膦基因 Bt cry1Ab抗虫基因 酶活性 氮含量
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转基因大豆中外源基因的二重PCR检测 被引量:1
9
作者 邵碧英 陈文炳 +1 位作者 江树勋 李寿崧 《福建农林大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2005年第4期483-487,共5页
用CTAB法提取转基因大豆(Roundup Ready品系)的总DNA.根据行业标准SN/T 1195-2003,合成用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflowerm osaic viru,s CaMV)35S启动子的引物S1和S2、根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)CP4菌株EPSPS基因的引... 用CTAB法提取转基因大豆(Roundup Ready品系)的总DNA.根据行业标准SN/T 1195-2003,合成用于扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflowerm osaic viru,s CaMV)35S启动子的引物S1和S2、根癌农杆菌(Agrobacterium tum efaciens)CP4菌株EPSPS基因的引物Ea、ER和Eb.应用这5条(2组)引物对转基因大豆进行二重PCR检测时,扩增得到2个新片段,分别与片段S1ER、S1Eb大小一致.将片段S1ER、S1Eb进行克隆并测序,序列已在GenBank上登录,接受号分别为AY592954和AY596948.序列分析结果表明,片段S1ER含有CaMV 35S启动子和矮牵牛叶绿体转运肽序列(CTP)的部分序列,片段S1Eb含有CaMV 35S启动子部分序列、CTP和CP4 EPSPS基因的部分序列,原用于扩增CP4 EPSPS基因的引物中,仅引物Eb位于CP4 EPSPS基因中.重新合成扩增CP4 EPSPS基因的引物E1和E2,建立的二重PCR方法不仅适合于转基因RoundupReady大豆,还适合于其它植物中的CaMV 35S启动子和CP4 EPSPS基因的同时检测. 展开更多
关键词 大豆 CaMV 35S启动子 CP4 epspS基因 二重PCR
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食用精炼大豆油DNA提取及单管巢式PCR检测 被引量:10
10
作者 姚芹 宋浩 陈枫 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2013年第21期183-186,共4页
设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以... 设计了针对转基因Roundup Ready大豆外源基因扩增的内外2对引物,分别位于CaMV35s启动子,CTP基因,CP4EPSPS基因区域,并成功对精炼大豆油中的外源基因进行单管巢式PCR检测。结果表明,用改良试剂盒法和冷冻干燥法提取大豆油中的DNA均可以满足单管巢式PCR检测要求;单管巢式PCR扩增对内外引物的Tm值有特殊要求,外引物的退火温度高于内引物。本实验建立的精炼大豆油转基因成分的单管巢式PCR检测方法特异性强,灵敏度高且快速方便。 展开更多
关键词 精炼大豆油 DNA提取 CP4epspS基因 单管巢式PCR
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转基因大豆非同源对照模板QC-PCR检测方法的建立
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作者 徐景升 阙友雄 +2 位作者 李峰 陈华墙 陈如凯 《生物技术通报》 CAS CSCD 2007年第5期156-159,共4页
建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因... 建立了转基因大豆CP4EPSPS基因的非同源对照模板QC-PCR检测方法。非同源竞争对照构建方法如下:利用CP4EPSPS基因特异引物,以大肠杆菌基因组DNA为异源模板,在低严谨度PCR扩增,回收适宜DNA片段并克隆到pMD-8载体上。该片段与CP4EPSPS基因相应序列除两端引物序列完全相同外,其他部分没有同源性。 展开更多
关键词 竞争定量PCR 非同源对照 CP4epspS 转基因检测
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辐照对抗草甘膦转基因大豆DNA的降解研究
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作者 杜艳 陈复生 陈晨 《河南工业大学学报(自然科学版)》 CAS 北大核心 2020年第4期9-15,共7页
探索辐照对抗草甘膦(Roundup Ready,RR)转基因大豆DNA降解的影响,以达到合理应用转基因大豆的目的。分别以RR大豆籽粒、大豆粉为对象,采用剂量为0、4、10 kGy的Co 60γ-射线进行照射,监测辐照后样品DNA的质量浓度、分子量和外源cp4 epsp... 探索辐照对抗草甘膦(Roundup Ready,RR)转基因大豆DNA降解的影响,以达到合理应用转基因大豆的目的。分别以RR大豆籽粒、大豆粉为对象,采用剂量为0、4、10 kGy的Co 60γ-射线进行照射,监测辐照后样品DNA的质量浓度、分子量和外源cp4 epsps基因拷贝数等的变化情况。结果表明:随着辐照剂量的增加,RR大豆籽粒、大豆粉的基因组DNA完整性呈下降趋势,其中大豆粉的下降程度更高;RR大豆粉中cp4 epsps基因拷贝数随辐照剂量的升高而降低。然而,辐照剂量增加至10 kGy时,长片段lectin和cp4 epsps基因的扩增结果仍呈阳性。因此,辐照作为常用的食品处理手段,可以对RR大豆DNA造成降解,其中大豆粉DNA的降解程度高于完整的大豆籽粒,但要达到大幅降解RR大豆外源基因的目的,需与其他处理方式协同作用。 展开更多
关键词 转基因大豆 DNA cp4 epsps基因 辐照 降解
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