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GnT-V RNAi对人前列腺癌PC-3细胞侵袭能力的影响 被引量：1
1
作者 王炳卫 魏婷 +1 位作者 李亚辉 张健 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1263-1265,共3页
目的通过研究GnT-V基因的表达变化对人前列腺癌PC-3细胞迁移、侵袭能力的影响,观察RNAi对PC-3细胞GnT-V表达的抑制效应,寻求较高抑制率的靶点。方法设计针对GnT-V基因的siRNA靶序列,构建siRNA表达载体并转染PC-3细胞,采用趋化运动和侵... 目的通过研究GnT-V基因的表达变化对人前列腺癌PC-3细胞迁移、侵袭能力的影响,观察RNAi对PC-3细胞GnT-V表达的抑制效应,寻求较高抑制率的靶点。方法设计针对GnT-V基因的siRNA靶序列,构建siRNA表达载体并转染PC-3细胞,采用趋化运动和侵袭实验评价GnT-V siRNA对人前列腺癌PC-3细胞迁移及侵袭能力的影响。结果成功构建了siRNA表达载体GnT-V siRNA,趋化运动实验表明下调GnT-V表达可显著抑制PC-3细胞的趋化运动性(P<0.01);侵袭实验显示,抑制GnT-V表达可显著抑制PC-3细胞的侵袭能力,PC-3GnT-V/1079组较对照组明显减少(P<0.05)。结论 RNAi可以显著降低人前列腺癌PC-3细胞GnT-V的表达,从而有效抑制PC-3细胞的迁移和侵袭能力,因此,具有较高抑制效率的GnT-V的siRNA可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。 展开更多
关键词 RNA干扰 gnt-v基因 前列腺癌 侵袭能力
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胃癌细胞株中GnT-V表达水平的检测
2
作者 吴琼 操龙阳 +4 位作者 张俊杰 张丽 欧宏亮 孙龙娥 王志荣 《世界肿瘤杂志》 2010年第2期92-94,110,共4页
目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1，应用RT-PCR、Real-time PCR、Westem blot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞Gn... 目的检测正常胃黏膜细胞株GES-1和胃癌细胞株GnT-V的mRNA和蛋白质的表达水平。方法体外培养胃癌细胞株BGC823、SGC7901、MKN45和正常胃黏膜细胞株GES-1，应用RT-PCR、Real-time PCR、Westem blot等技术检测胃癌细胞株及正常胃黏膜细胞GnT-V mRNA和蛋白质表达的水平。结果检测显示3株胃癌细胞（BGC823、SGC7901、MKN45）均表达CmT-V mRNA，其中BGC823、SGC7901呈高表达，MKN45则低表达GnT-V（P〈0．05）。各细胞相对正常对照组GnT-V的相对表达倍数分别为18．25，13．36，9．25。Western blot结果显示3株胃癌细胞均不同程度的GnT-V蛋白表达，而正常对照组不表达GnT-V蛋白。结论胃癌细胞不同程度表达GnT-V，各细胞中以BGC823表达量最高，SGC7901表达量居中，MKN45呈低表达，提示GnT-V可能对于胃癌的发生发展有一定的影响。 展开更多
关键词 gnt-v 胃癌细胞株 表达
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GnT-V通过影响自噬调控糖尿病小鼠的心肌损伤
3
作者 赵然 王婷婷 +1 位作者 赵杰琼 李妍 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第7期842-848,共7页
目的探究N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminetransferase-V,GnT-V)对糖尿病心肌病小鼠心肌损伤的影响及潜在分子机制。方法30只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(Con组)、糖尿病心肌病组(DCM组)和糖尿病心肌病+干扰GnT-... 目的探究N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminetransferase-V,GnT-V)对糖尿病心肌病小鼠心肌损伤的影响及潜在分子机制。方法30只6~8周龄雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组(Con组)、糖尿病心肌病组(DCM组)和糖尿病心肌病+干扰GnT-V基因的腺相关病毒组(DCM+AAV-shGnT-V组),每组10只。DCM组小鼠腹腔注射50 mg/kg链脲佐菌素,连续5 d,诱导糖尿病模型(随机血糖≥16.7 mmol/L),继续普通饮食喂养12周诱导糖尿病心肌病模型;对照组小鼠腹腔注射相应剂量的的柠檬酸盐缓冲液;DCM+AAV-shGnT-V组在糖尿病模型诱导成功后4周,通过心肌注射40μL滴度为1×10^(10)PFU/mL的腺相关病毒(AAV)-shGnT-V以敲低GnT-V基因。超声心动图检测各组小鼠心脏功能,Masson染色观察各组小鼠心肌纤维化情况,TUNEL染色检测各组小鼠心肌细胞凋亡程度,免疫组化染色观察各组心肌组织中GnT-V和Beclin1的表达情况,Western blot法检测自噬蛋白LC3、P62及PI3K/AKT通路的蛋白表达情况。结果与Con组相比,DCM组小鼠心脏收缩功能显著降低(P<0.05),心肌组织纤维化程度明显增加(P<0.05),心肌细胞的凋亡率明显上升(P<0.05),心肌组织中GnT-V、自噬蛋白Beclin1、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著增加,P62的表达明显减少(P<0.05),且PI3K和AKT磷酸化程度明显降低(P<0.05)。与DCM组相比,DCM+AAV-shGnT-V组小鼠心脏收缩功能明显改善(P<0.05),心肌组织纤维化程度显著下降(P<0.05),心肌细胞的凋亡率明显降低(P<0.05),GnT-V、Beclin1及LC3Ⅱ/LC3Ⅰ表达显著下调,P62的表达明显增加(P<0.05),且PI3K和AKT磷酸化程度明显增强(P<0.05)。结论敲低GnT-V基因可以显著改善糖尿病心肌病小鼠的心肌组织纤维化进展和心肌细胞凋亡程度,其作用可能与激活PI3K/AKT信号通路,进而抑制心肌自噬有关。 展开更多
关键词 糖尿病心肌病 自噬 凋亡 心肌纤维化 gnt-v PI3K/AKT
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抑制糖基转移酶GnT-V的表达可增强胶质瘤细胞放射敏感性
4
作者 宫梦晓 沈力 +3 位作者 刘艳芹 柯青 骆志国 唐以军 《湖北医药学院学报》 CAS 2017年第6期487-490,F0002,共5页
目的:探讨N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)介导的N-糖基化修饰在胶质瘤细胞放射敏感性中的作用及调控机制。方法:采用RT-PCR和Western blot技术筛选GnT-V高表达的胶质瘤细胞;运用RNA干扰技术抑制GnT-V基因和蛋白表达,流式细胞术和荧光... 目的:探讨N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(GnT-V)介导的N-糖基化修饰在胶质瘤细胞放射敏感性中的作用及调控机制。方法:采用RT-PCR和Western blot技术筛选GnT-V高表达的胶质瘤细胞;运用RNA干扰技术抑制GnT-V基因和蛋白表达,流式细胞术和荧光显微镜观察细胞N-糖基化修饰改变;4 Gy X-射线处理后分析细胞放射敏感性差异。结果:成功筛选GnT-V高表达的U251细胞;下调U251细胞中GnT-V的表达,可阻断N-糖链合成,逆转X-射线诱导的G2/M期阻滞,促进细胞凋亡。结论:抑制GnT-V的表达可通过阻断N-糖基化修饰增强胶质瘤细胞的放射敏感性。 展开更多
关键词 gnt-v N-糖基化 胶质瘤 放射敏感性
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白细胞介素1β通过β1整合素糖基化修饰诱导EA.hy926细胞凋亡 被引量：2
5
作者 李佳佳 杨竹 +1 位作者 王应雄 于超 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期921-925,共5页
目的探讨IL-1β对血管内皮细胞损伤机制。方法以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,利用不同浓度IL-1β刺激24 h,采用Western blot方法检测IL-1β对β1整合素、Bcl-2、Bax、Caspase-3及N-乙酞氨基葡萄糖转移-V(GnT-V)表达的影响;通过Lecti... 目的探讨IL-1β对血管内皮细胞损伤机制。方法以EA.hy926血管内皮细胞为研究对象,利用不同浓度IL-1β刺激24 h,采用Western blot方法检测IL-1β对β1整合素、Bcl-2、Bax、Caspase-3及N-乙酞氨基葡萄糖转移-V(GnT-V)表达的影响;通过Lectin blot方法显示IL-1β对GnT-V所修饰的所有糖蛋白量的影响;免疫共沉淀方法检测IL-1β对β1整合素糖基化修饰量的变化;流式细胞术检测细胞凋亡率的变化。结果 IL-1β可从蛋白翻译水平抑制β1整合素的表达,同时可以下调Bcl-2/Bax的比例,上调Caspase-3的表达。初步揭示IL-1β诱导血管内皮细胞凋亡可能是通过β1整合素N-连接糖基化作用来完成的。结论 IL-1β可通过调控EA.hy926细胞β1整合素的糖基化修饰,增加细胞凋亡率,损伤血管内皮细胞。 展开更多
关键词 IL-1Β gnt-v Β1整合素 EA.hy926 糖基化 凋亡
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N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-V过表达对人肝癌细胞迁移及粘附分子表达的影响 被引量：3
6
作者 王丽影 陈伉俪 +3 位作者 苏剑敏 靳嘉巍 陈惠黎 查锡良 《实验生物学报》 CSCD 北大核心 2001年第3期219-225,共7页
为了探讨转染N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-V)正义cDNA后对7721细胞迁移影响及其机制,我们研究了GnT-V/7721和pcDNA3/7721(对照组)两株细胞的迁移力及其与侵袭转移能力密切相关的细胞表面重要粘附分子整合蛋白和E-钙粘蛋白的表达情况... 为了探讨转染N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-V)正义cDNA后对7721细胞迁移影响及其机制,我们研究了GnT-V/7721和pcDNA3/7721(对照组)两株细胞的迁移力及其与侵袭转移能力密切相关的细胞表面重要粘附分子整合蛋白和E-钙粘蛋白的表达情况。通过琼脂滴法检测两株细胞的迁移力;间接免疫荧光法测定细胞表面整合蛋白α5和β1的含量及用RT-PCR方法检测细胞整合蛋白α5和β1的mRNA水平;免疫细胞化学ABC法检测了细胞E-钙粘蛋白表达水平;Western杂交方法检测β-连环蛋白含量。结果发现,7721细胞经转染GnT-V cDNA后,迁移力明显增高;整合蛋白α5亚基的含量比对照组增加2.9倍;β1亚基未见明显变化。α5亚基mRNA水平为对照细胞的2.1倍,β1亚基的mRNA含量无明显改变。GnT-V/7721细胞E-钙粘蛋白及β-连环蛋白表达也有不同程度的升高。本文结果提示与N-糖链加工有关的GnT-V过表达,可促进7721细胞表面整合蛋白的表达以及E-钙粘蛋白β-连环蛋白的表达,从而增加肿瘤细胞的迁移能力。 展开更多
关键词 肝癌细胞 转染N-乙酰氨基葡萄糖转移酶-V 粘附分子 迁移
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N-乙酰氨基葡萄糖基转移酶V在肿瘤发生及转移中的作用机制
7
作者 齐晶晶 王丽影 查锡良 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期625-629,共5页
N-糖链的β-1,6分支与肿瘤关系密切。N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)可催化β-1,6糖链分支的生成。GnT-V是一种双功能蛋白,可以定位在高尔基体中,也可以分泌形式存在。该酶通过一种金属离子依赖的... N-糖链的β-1,6分支与肿瘤关系密切。N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminyltransferase V,GnT-V)可催化β-1,6糖链分支的生成。GnT-V是一种双功能蛋白,可以定位在高尔基体中,也可以分泌形式存在。该酶通过一种金属离子依赖的丝氨酸蛋白酶来破坏细胞外基质或者直接催化促血管因子的生成来促进肿瘤的生长或转移,也可以通过分泌型的GnT-V催化糖链生成改变血管生成因子的功能,或者直接促进它们的转录从而起到促进肿瘤转移的作用。另外,GnT-V可以与癌基因产物及其受体相互作用来促进肿瘤的发生及侵袭。本综述主要就GnT-V的基本性质、促肿瘤生成及转移的机理进行展开,并展望了其在肿瘤治疗中的应用。 展开更多
关键词 gnt-v 肿瘤 血管生成 癌基因
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shRNA沉默GnT-Ⅴ基因表达对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响 被引量：1
8
作者 王炳卫 杨国胜 +1 位作者 范立新 邱晓拂 《现代泌尿生殖肿瘤杂志》 2013年第3期151-154,共4页
目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染P... 目的构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)表达质粒,研究shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。方法设计针对GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染PC-3细胞,通过G418筛选,建立稳定表达GnT-Ⅴ基因的细胞株,采用RT-PCR和蛋白质印迹检测GnT-ⅤmRNA和蛋白的表达,并通过CCK-8增殖实验、流式细胞仪评价GnT-ⅤshRNA对前列腺癌PC-3细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建了GnT-ⅤshRNA表达质粒,且该质粒明显下调GnT-Ⅴ的表达;PC-3细胞GnT-Ⅴ/1079的mRNA和蛋白质水平的抑制率分别为76.5%和67.0%,对PC-3细胞呈明显抑制效应;CCK-8增殖实验显示,与对照组相比,PC-3GnT-Ⅴ/1079的增殖受到明显抑制(P<0.01),以48h为著;流式细胞仪检测结果表明,PC-3GnT-Ⅴ/1079的凋亡率明显增加(P<0.05)。结论 shRNA GnT-Ⅴ能显著降低GnT-Ⅴ基因的表达水平,从而有效抑制PC-3细胞增殖,并促进细胞凋亡,该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗前列腺癌的有效靶点。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 RNA干扰 GnT-Ⅴ基因 细胞增殖 细胞凋亡
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靶向糖基转移酶shRNA表达质粒对LoVo细胞侵袭和增殖能力的抑制作用 被引量：3
9
作者 贺富丽 马强 张健 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第8期1071-1078,共8页
通过构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)干扰表达质粒,研究了shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.设计了靶向GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA... 通过构建针对N-乙酰氨基葡萄糖转移酶Ⅴ(GnT-Ⅴ)的小片段发夹状RNA(shRNA)干扰表达质粒,研究了shRNA表达质粒沉默GnT-Ⅴ基因后对LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.设计了靶向GnT-Ⅴ基因的小干扰RNA(siRNA)靶序列,构建shRNA表达载体并转染人结肠癌LoVo细胞,通过G418筛选建立稳定低表达GnT-Ⅴ基因的细胞株.分别采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质印迹(Western blot)检测shRNA对GnT-Ⅴ基因mRNA及蛋白质表达的影响.并通过CCK-8增殖实验、异质黏附实验、划痕愈合实验、趋化运动实验、细胞侵袭实验评价pGPU6/GFP/Neo GnT-ⅤshRNA对人结肠癌LoVo细胞增殖、黏附以及迁移、侵袭能力的影响.实验成功地构建了GnT-Ⅴ shRNA表达质粒,并且该质粒明显下调GnT-Ⅴ的表达,LoVo GnT-Ⅴ/1564和LoVo GnT-Ⅴ/2224的mRNA水平的抑制率分别为82%和71.5%,蛋白质水平的抑制率分别为68%和56%.选择干扰效率较高的LoVo GnT-Ⅴ/1564进行进一步实验.CCK-8增殖实验显示,与阴性对照组相比,LoVo GnT-Ⅴ/1564的增殖受到明显抑制(P<0.001),尤以72h为著;下调GnT-Ⅴ表达可增强LoVo细胞的黏附能力(t=-3.357,P<0.01),而显著抑制LoVo细胞的趋化运动能力(t=44.051,P<0.001);划痕实验结果也显示抑制GnT-Ⅴ表达延长LoVo细胞的愈合时间;用Matrigel胶介导的细胞侵袭实验结果显示,LoVo GnT-Ⅴ/1564和LoVo GnT-Ⅴ/NC的穿膜细胞数分别为(5.10±1.25)个和(39.55±2.16)个,GnT-Ⅴ/1564组较阴性对照组明显减少(t=61.626,P<0.001).结果表明,靶向GnT-Ⅴ的shRNA真核表达质粒可以显著降低GnT-Ⅴ的表达,从而抑制LoVo细胞的增殖、迁移和侵袭能力,因此,该GnT-Ⅴ的siRNA序列可能成为治疗结直肠癌的有效靶点. 展开更多
关键词 GnT-Ⅴ RNAI 结直肠癌 侵袭能力
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