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GMP级质粒的生产与质控:从基础研究到临床应用的规范化路径
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作者 陈成 衣玉兰 +1 位作者 程海子 吴钦斌 《中国细胞生物学学报》 2026年第1期174-183,共10页
质粒DNA作为细胞与基因治疗产品的活性物质或关键原材料,其生产工艺和质量控制是保障生物制品安全性和有效性的核心环节。该文论述了质粒的战略价值和GMP需求,梳理了质粒从基础研究中的分子工具逐步发展为工业化产品的历程,并深度对比... 质粒DNA作为细胞与基因治疗产品的活性物质或关键原材料,其生产工艺和质量控制是保障生物制品安全性和有效性的核心环节。该文论述了质粒的战略价值和GMP需求,梳理了质粒从基础研究中的分子工具逐步发展为工业化产品的历程,并深度对比了中国、美国、欧盟三大监管体系在不同应用场景下对质粒的分类和监管策略。作者根据和元生物已完成的近百个GMP质粒工业化项目的实践经验,总结了工业化质粒的生产工艺及质量控制要求,希望能为基因治疗领域的研发企业和科研人员提供有益参考,助力其更高效地实现质粒从实验室研究向临床应用的转化。 展开更多
关键词 基因治疗 原材料 gmp质粒
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检测大肠杆菌内c-di-GMP水平的双荧光素报告质粒的构建及应用
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作者 张贝贝 胡剑刚 +8 位作者 王欣宇 郭伟奇 姚澜 王芷洋 王帝 祁晶晶 田明星 鲍衍清 王少辉 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期4814-4822,共9页
细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调... 细菌通过调控第二信使环二鸟苷酸(cyclic diguanylate,c-di-GMP)而促进其适应环境、存活及致病。【目的】本研究旨在建立有效的c-di-GMP水平检测方法,为大肠杆菌内c-di-GMP水平检测提供便利条件。【方法】根据c-di-GMP核糖开关受体的调控方式、荧光报告基因等设计引物,通过重叠聚合酶链反应(overlap polymerase chain reaction,overlap PCR)和同源重组酶构成基于核糖开关的双荧光素报告质粒pAmCherry-Vc2EGFP(pACVcE),然后构建c-di-GMP代谢基因过表达菌株和缺失菌株,利用pACVcE检测大肠杆菌内c-di-GMP水平。【结果】Overlap PCR扩增产物与目的靶序列一致,测序结果证明pACVcE序列正确。表达c-di-GMP合成酶DgcZ的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著升高,而表达c-di-GMP降解酶PdeK的大肠杆菌胞内c-di-GMP水平显著降低。禽致病性大肠杆菌的胞内c-di-GMP水平检测发现c-di-GMP降解酶基因pdeK缺失后胞内的c-di-GMP水平显著升高。【结论】本研究构建了基于核糖开关的双荧光素报告质粒,可方便、快速检测大肠杆菌胞内c-di-GMP水平。 展开更多
关键词 环二鸟苷酸 核糖开关 双荧光素报告质粒 检测
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