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巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因的克隆及其功能分析
1
作者 李周华 陈三凤 李季伦 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第10期964-970,共7页
通过原位杂交从巴西固氮螺菌Yu62的基因文库中 ,筛选到glnB基因的阳性克隆 ,将3 7kb/EcoRI+PstI的阳性克隆亚克隆到pUC1 9中 ,进行了全序列分析 ,其在GenBank中的登记号是AF32 3960。DNA序列分析表明该阳性克隆含有完整的glnB基因 ,gln... 通过原位杂交从巴西固氮螺菌Yu62的基因文库中 ,筛选到glnB基因的阳性克隆 ,将3 7kb/EcoRI+PstI的阳性克隆亚克隆到pUC1 9中 ,进行了全序列分析 ,其在GenBank中的登记号是AF32 3960。DNA序列分析表明该阳性克隆含有完整的glnB基因 ,glnB基因下游是编码谷氨酰胺合成酶 (GS)的glnA基因 ,glnB基因上游是一个编码未知蛋白的ORF。glnB基因编码区长 336bp,编码 1 1 2个氨基酸 ,与肺炎克氏杆菌、大豆慢生根瘤菌、豌豆根瘤菌及大肠杆菌在氨基酸顺序的同源性分别高达 71 %、77%、79%和 69%。将卡那霉素抗性片段 (Km -cas sette)插入glnB基因的BglII位点 ,通过三亲杂交法将其引入到巴西固氮螺菌Yu62中 ,通过同源重组 ,获得GlnB- 突变株 (glnB ::Km)。为了进一步分析glnB基因的功能 ,将glnB基因的编码区 ( 339bp)构建在pVK1 0 0中 ,置于Km启动子下组成型表达 ,形成重组质粒pVK -II。将重组质粒pVK -II转入到GlnB- 突变株 ,构建成互补株C -glnB(glnB ::Km/glnB)。对GlnB-突变株和互补株的固氮酶活性和生长性能的测定表明 ,GlnB- 突变体无固氮酶活性 ,即表型为Nif- ;而互补株像野生型菌株一样具有固氮酶活性。突变株、互补株及野生型在菌落生长速度上基本相同。将含有glnB基因的重组质粒pVK -II分别转移到野生型Yu62? 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌YU62 glnb基因 PⅡ蛋白 glnb^-突变标 基因克隆 功能
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巴西固氮螺菌Yu62 glnB基因和glnZ基因的克隆和序列分析 被引量：5
2
作者 陈三凤 杨红 +1 位作者 王娟 李季伦 《中国农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第1期9-13,共5页
gln B基因编码的 PII蛋白在巴西固氮螺菌的固氮过程中起着非常重要的调控作用 ,而 gln Z是与gln B高度同源的基因 ,其产物 Pz可能也在固氮调控中起作用。本研究用 PCR法克隆了巴西固氮螺菌 Yu6 2gln B基因和 gln Z基因。 DNA序列分析表... gln B基因编码的 PII蛋白在巴西固氮螺菌的固氮过程中起着非常重要的调控作用 ,而 gln Z是与gln B高度同源的基因 ,其产物 Pz可能也在固氮调控中起作用。本研究用 PCR法克隆了巴西固氮螺菌 Yu6 2gln B基因和 gln Z基因。 DNA序列分析表明 gln B和 gln Z这 2个基因的编码区的长度都为 336 bp,编码 112个氨基酸。将巴西固氮螺菌 Yu6 2菌株与标准菌株 Sp7的 gln B基因和 gln Z基因分别进行比较 ,结果表明这 2个菌株的 gln B基因在编码区的核苷酸顺序完全相同 ,而 gln Z基因在长 336 bp的编码区内有 4个碱基发生变化 ,但改变后都是同义密码子 ,即编码的氨基酸并未改变。 gln B基因和 gln Z基因在核苷酸顺序上的同源性高达 73.2 % ,氨基酸顺序的同源性达 6 6 .7% 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 glnb基因 glnZ基因 序列分析 克隆
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浑球红细菌谷氨酰胺合成酶基因(glnA)及PⅡ蛋白基因(glnB)的序列分析 被引量：2
3
作者 韩涛 吴永强 宋鸿遇 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1997年第2期130-138,共9页
测定了浑球红细菌的glnA和／glnB基因DNA序列，共2707nt。其中glnA基因编码区为1401nt，编码467个氨基酸；glnB基因编码区为336nt，编码112个氨基醚。DNA序列的G＋C百分含量为65％，它们的密码子第三位GC利用率高达89．1％。在氨基酸序... 测定了浑球红细菌的glnA和／glnB基因DNA序列，共2707nt。其中glnA基因编码区为1401nt，编码467个氨基酸；glnB基因编码区为336nt，编码112个氨基醚。DNA序列的G＋C百分含量为65％，它们的密码子第三位GC利用率高达89．1％。在氨基酸序列上，GS酶和PⅡ蛋白与其它不同属的细菌间有较好的同源性，尤其是固氮类细菌间同源性较高。 展开更多
关键词 浑球红细菌 谷氨酰氨合成酶 基因 glnb基因 固氮
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光合细菌Rhodobacter sphaeroides glnBlacZ 融合子的构建与表达 被引量：1
4
作者 梁莉 朱美珍 吴永强 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1999年第3期249-255,共7页
亚克隆了Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ｇｌｎＢ启动子，以ｐＭＰ２２０ 为载体构建成ｇｌｎＢｌａｃＺ融合子。将ｇｌｎＢｌａｃＺ、ｎｉｆＨｌａｃＺ、ｎｉｆＡｌａｃＺ分别导入Ｒ． ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅ... 亚克隆了Ｒｈｏｄｏｂａｃｔｅｒ ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ ｇｌｎＢ启动子，以ｐＭＰ２２０ 为载体构建成ｇｌｎＢｌａｃＺ融合子。将ｇｌｎＢｌａｃＺ、ｎｉｆＨｌａｃＺ、ｎｉｆＡｌａｃＺ分别导入Ｒ． ｓｐｈａｅｒｏｉｄｅｓ 谷氨酸合酶突变株ｇｌｔＢ－ 、ｇｌｔＤ－ 和野生型菌株中，分析了突变对固氮基因转录表达的影响。试验证明，在ｇｌｔＢＤ 突变株中ｎｉｆＨ 的表达受阻遏，ｎｉｆＡ 表达水平很低。这证明ｇｌｔ 基因的突变引起固氮酶结构基因和固氮正调节基因的转录被阻遏，而ｇｌｎＢ 基因的表达几乎不受影响。试验还测定了环境中结合态氮和有机酸等信号分子对ｇｌｎＢ 和ｎｉｆＨ 表达的影响，发现加入氨或谷氨酰胺后，ｎｉｆＨ 的表达受到明显的阻遏作用，ｇｌｎＢｌａｃＺ的β半乳糖苷酶活性虽下降３０ ％ 左右但不随结合态氮浓度升高而变化，仍维持在一个较高的水平。α酮戊二酸和丙酮酸对ｎｉｆＨ 展开更多
关键词 浑球红细菌 blnB-lacZ 融合子 glt变种
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浑球红细菌（R．srhaeroides）glnBA基因克隆及其物理图谱 被引量：1
5
作者 韩涛 吴永强 宋鸿遇 《植物生理学报（0257-4829)》 CSCD 1996年第2期177-183,共7页
从浑球红细菌的基因文库中筛选到ｐＨＴ３、ｐＨＴ１０及ｐＨＴ３５三个阳性克隆，其中质粒ｐＨＴ１０与ｐＨＴ３５能遗传互补英膜红细菌的谷氨酰胺缺陷型Ｇ２９，使其ＧＳ酶及固氮酶活性得到恢复。对质粒ｐＨＴ１０上的ｇｌｎＡ同源片... 从浑球红细菌的基因文库中筛选到ｐＨＴ３、ｐＨＴ１０及ｐＨＴ３５三个阳性克隆，其中质粒ｐＨＴ１０与ｐＨＴ３５能遗传互补英膜红细菌的谷氨酰胺缺陷型Ｇ２９，使其ＧＳ酶及固氮酶活性得到恢复。对质粒ｐＨＴ１０上的ｇｌｎＡ同源片段进行了亚克隆和限制性内切酶图谱分析，确定了浑球红细菌ｇｌｎＢ与ｇｌｎＡ之间存在连锁关系。 展开更多
关键词 浑球红细菌 光合细菌 基因克隆 物理图谱
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巴西固氮螺菌GlnB与NifA蛋白N端结构域的相互作用 被引量：1
6
作者 周小愚 邹笑笑 李季伦 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第19期2307-2312,共6页
巴西固氮螺（Azospirillum brasilense）可与多种重要作物联合固氮，具有作为生物肥料的潜能。固氯基因（nif）的转录激活蛋白NifA和PⅡ信号转导蛋白家族成员GlnB是参与该菌固氮调控的两个关键蛋白，且NifA的活性调控依赖于GlnB。研究... 巴西固氮螺（Azospirillum brasilense）可与多种重要作物联合固氮，具有作为生物肥料的潜能。固氯基因（nif）的转录激活蛋白NifA和PⅡ信号转导蛋白家族成员GlnB是参与该菌固氮调控的两个关键蛋白，且NifA的活性调控依赖于GlnB。研究结果表明，在无氮条件下GlnB与NifA蛋白N端结构域存在相互作用，且N端18和53位酪氨酸突变为苯丙氨酸的NifA与GlnB的互作增强。研究还发现，NifA蛋白N端66-88位和165-176位氨基酸区域对于与GlnB蛋白的相互作用是必需的。 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 NirA glnb 蛋白互作
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巴西固氮螺菌中P_Ⅱ和P_Z在固氮调节中的不同作用 被引量：2
7
作者 陈三凤 管乐 +3 位作者 应娇妍 李周华 王娟 李季伦 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第5期523-529,共7页
在巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)中 ,glnB和glnZ是两个高度同源基因 ,分别位于 3 7kb EcoRI+PstI和 3 7kb SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒 (Kmr cas sette)插入法 ,对glnB和glnZ分别进行定位诱变 ,并获得相应的... 在巴西固氮螺菌 (Azospirillumbrasilense)中 ,glnB和glnZ是两个高度同源基因 ,分别位于 3 7kb EcoRI+PstI和 3 7kb SalI的两个不同的染色体片段上。用卡那霉素盒 (Kmr cas sette)插入法 ,对glnB和glnZ分别进行定位诱变 ,并获得相应的突变株 ,即glnB- 和glnZ- 。研究表明 ,glnB- 突变株丧失固氮酶活性 ,表现为Nif- ,而glnZ- 象野生型菌株一样具有固氮酶活性。为了进一步研究这两个基因的功能 ,将glnB和glnZ分别构建在pVK1 0 0载体上形成重组质粒pVK -Ⅱ和pVK -Z ,对glnB- 和glnZ- 突变株进行互补实验 ,进一步证明了glnB与固氮酶活有直接相关性 ,而glnZ无此作用。同时 ,通过三亲接合法将pVK -Ⅱ和pVK -Z分别转移到巴西固氮螺菌野生型Yu62和具有一定抗铵能力的draT- 突变株中 ,使glnB和glnZ的拷贝数增加 ,进一步比较它们的固氮酶活性。结果表明多拷贝的glnB基因 ,能显著提高固氮酶活性 ,而多拷贝的glnZ对固氮酶活性无影响。同时 ,将pVK Ⅱ和pVK -Z分别转移到nifA- 突变株中 ,结果表明glnB和glnZ均不能恢复nifA- 展开更多
关键词 巴西固氮螺菌 glnb基因 glnZ基因 突变株 固氮酶活性
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