FOXP3和GITR/GITRL mRNA在类风湿关节炎和结直肠癌患者外周血中的表达研究 被引量：5

1

作者 杨蔺 宗明 +5 位作者 卢添宝 李红梅 韩捷 王强 何俊民 范列英 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期66-70,共5页

探讨FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)及其配体(GITRL)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和结直肠癌患者中的表达变化及GITR与FOXP3表达的相关性。运用实... 探讨FOXP3和糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor,GITR)及其配体(GITRL)在类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)和结直肠癌患者中的表达变化及GITR与FOXP3表达的相关性。运用实时荧光定量RT-PCR方法,检测55例健康体检者、55例RA患者、50例结直肠癌患者的外周血单个核细胞(peripheral blood monocytes,PBMC)中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平。结果:在RA患者组FOXP3、GITR和GITRL均显著低于健康对照组(P<0.01),经过转换后的mRNA表达水平分别为对照组的18.5%、7.5%和1.7%,GITR和FOXP3的表达水平呈显著正相关(r=0.86,P<0.01);而在结直肠癌患者组,FOXP3的表达水平显著高于对照组(P<0.01),表达水平为对照组的173.7%,GITR和GITRL的表达水平显著低于对照组(P<0.01),mRNA表达水平为对照组的45.7%和50.1%,GITR和FOXP3的表达有一定的相关性(P=0.046)。RA和结直肠癌患者均存在调节性T细胞(regulatory Tcells,Treg)异常。在RA中,GITR表达趋势与FOXP3一致,均反映Treg数量或功能降低。但在结直肠癌患者中,两者表达不尽一致。 展开更多

关键词 FOXP3 GITR gitrl 类风湿关节炎 结直肠癌

暂未订购

hGITRL在食道癌组织中的表达及临床意义 被引量：8

2

作者 李志祥 钱军 张立功 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1882-1884,共3页

目的探讨食道癌的肿瘤坏死因子受体配体(h GITRL)表达差异的临床病理相关性及其在预测患者预后中的临床指导价值。方法采用Western印迹方法检测112例食道癌临床组织样本和101例配对癌旁食道h GITRL的蛋白表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检... 目的探讨食道癌的肿瘤坏死因子受体配体(h GITRL)表达差异的临床病理相关性及其在预测患者预后中的临床指导价值。方法采用Western印迹方法检测112例食道癌临床组织样本和101例配对癌旁食道h GITRL的蛋白表达,酶联免疫吸附(ELISA)法检测38例食道癌患者、12例食道异常增生患者和20例健康自愿者的血清h GITRL蛋白水平,分层分析与食道癌病理参数的相关性,进一步生存分析h GITRL表达与临床预后的关系。结果食道癌组织中h GITRL蛋白条带灰度值较癌旁食道组织显著增高(P<0.001),且血清h GITRL阳性率为食道癌>食道异常增生>正常食道(P<0.05);食道癌h GITRL的高表达与淋巴结转移和临床分期显著相关(P<0.001);进一步生存分析发现h GITRL阳性表达者的3年、5年无瘤生存率和生存期,均较阴性者明显降低(P<0.05),Cox生存风险模型示h GITRL可能是食道癌患者3年无瘤生存预后的独立危险因素(P=0.029,<0.05)。结论 h GITRL可能成为食道癌早期诊断的生物学标志物,且可能具有预测食道癌患者3年无瘤生存预后的重要临床价值,但尚待大样本临床研究证实。 展开更多

关键词 H gitrl 食道癌 早期诊断 预后

暂未订购

小鼠GITRL基因的克隆和序列分析 被引量：5

3

作者 王胜军 马斌 +2 位作者 仝佳 许化溪 杨胜利 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2004年第2期97-99,102,共4页

目的 :克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA ,同时对其序列分析。方法 :采用RT PCR方法 ,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA ,克隆至pMD18 T载体 ,选择阳性克隆并进行序列测定。结果 :扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长 5 19bp ,编... 目的 :克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA ,同时对其序列分析。方法 :采用RT PCR方法 ,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA ,克隆至pMD18 T载体 ,选择阳性克隆并进行序列测定。结果 :扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长 5 19bp ,编码 173个氨基酸残基 ,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论 :获得小鼠GITRL基因的克隆 ,为进一步研究其生物学功能提供基础。 展开更多

关键词 gitrl基因 CDNA克隆 RT-PCR 调节性T细胞 小鼠

暂未订购

哮喘小鼠肺组织Nuocytes增多与GITR-GITRL表达的关系 被引量：3

4

作者 张梦莹 徐芸芸 +9 位作者 吴静 张盼 张淡宜 彭静静 齐晨 纪晓昀 夏圣 苏兆亮 王胜军 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第4期277-281,共5页

目的:检测哮喘小鼠肺组织中Nuocytes相关指标和GITR-GITRL的表达,探讨哮喘时Th2极化微环境的改变。方法:选择8只Balb/c小鼠,随机分为2组,模型组于第1天,第11天用OVA致敏,第22至26天用2%OVA溶液雾化激发,对照组用PBS处理;采用流式细胞术... 目的:检测哮喘小鼠肺组织中Nuocytes相关指标和GITR-GITRL的表达,探讨哮喘时Th2极化微环境的改变。方法:选择8只Balb/c小鼠,随机分为2组,模型组于第1天,第11天用OVA致敏,第22至26天用2%OVA溶液雾化激发,对照组用PBS处理;采用流式细胞术检测小鼠肺组织内GITR表达和Nuocytes细胞数量;qRT-PCR法检测Foxp3、RORα、ICOS、ST2、IL-5、IL-13和GITR及其配体GITRL的mRNA表达水平;对GITR-GITRL和Nuocytes及其相关分子的表达水平进行相关性分析。结果:与对照组相比,模型组小鼠肺组织中Nuocytes细胞数和GITR表达均升高,且GITRL、Foxp3、RORα、ICOS、ST2以及IL-5和IL-13 mRNA表达水平均明显上调;GITR与RORα和ST2、IL-5、IL-13的表达水平均呈正相关。结论:哮喘小鼠肺组织中Nuocytes和GITR-GITRL表达增高,提示哮喘时GITR-GITRL上调的T细胞免疫应答可能与Th2主导的免疫失衡和Nuocytes极化相关。 展开更多

关键词 Nuocytes GITR gitrl 哮喘 小鼠

暂未订购

FOXP3、GITR和GITRL在口腔扁平苔藓患者外周血中的表达 被引量：3

5

作者 王婧姣 臧磊 +2 位作者 漆明 师志云 赵颖 《实用口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期789-793,共5页

目的:研究FOXP3和GITR/GITRL基因在口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中的表达水平。方法:采用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测30例OLP患者和15例健康人外周血中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平。结果:OLP组FOXP3、GITR和GITRL mRNA表达量... 目的:研究FOXP3和GITR/GITRL基因在口腔扁平苔藓(OLP)患者外周血中的表达水平。方法:采用实时荧光定量RT-PCR的方法,检测30例OLP患者和15例健康人外周血中FOXP3、GITR和GITRL的基因表达水平。结果:OLP组FOXP3、GITR和GITRL mRNA表达量均显著低于健康对照组(P<0.01);结果经2-ΔΔCT转换后,OLP组FOXP3、GITR和GITRL mRNA表达水平分别是健康对照组的23.4%、18.1%和20.9%;FOXP3和GITR的表达水平呈正相关关系(r=0.491,P<0.05)。结论:FOXP3和GITR/GITRL mRNA的表达异常,影响了调节性T细胞(Treg)的功能。 展开更多

关键词 口腔扁平苔藓 实时荧光定量RT-PCR FOXP3 GITR gitrl

暂未订购

小鼠GITRL融合蛋白的表达、纯化及免疫原性的研究 被引量：2

6

作者 马洁 王胜军 +9 位作者 毛朝明 杨敏 王锁英 许小朋 邱谷风 胡正军 姜旭淦 邵启祥 丁庆 许化溪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期675-677,683,共4页

目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性... 目的:构建含小鼠GITRL基因原核表达载体,经转化E.coli以表达GITRL融合蛋白,纯化蛋白并制备相应的抗血清。方法:将GITRL-pMD18-T重组质粒经EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收目的基因,与原核表达载体PET32a连接,应用电转法转化BL21(DE3)菌。阳性克隆经鉴定后用IPTG诱导GITRL蛋白表达,经Ni+-NTA层析柱纯化融合蛋白,通过SDS-PAGE、West-ernblot进行特异性鉴定,CD4+CD25+T细胞免疫抑制试验验证其生物学功能。采用弗氏完全佐剂常规免疫方案,制备抗GITRL抗血清,抗血清的效价和特异性测定采用双向琼脂免疫扩散法。结果:经酶切鉴定和测序分析证实原核表达质粒构建正确,SDS-PAGE和Westernblot结果显示,在40kD处呈现单一蛋白条带,该蛋白具有阻断CD4+CD25+T细胞免疫抑制功能的作用,双向免疫扩散结果显示兔抗小鼠GITRL抗血清效价为1∶16。结论:成功构建GITRL原核表达质粒,制备和纯化的GITRL融合蛋白具有较好的纯度和生物学功能,制备并获得特异性抗血清,可用于GITRL融合蛋白生物学活性的进一步研究。 展开更多

关键词 gitrl 蛋白表达 融合蛋白 小鼠

在线阅读 下载PDF 职称材料

GITRL在内毒素诱导的Kupffer细胞凋亡中的作用研究 被引量：2

7

作者 魏思东 李金政 +4 位作者 龚建平 刘作金 游海波 陈勇 吴传新 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期602-604,607,共4页

目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)在脂多糖(LPS)诱导的Kupffer细胞(KCs)凋亡中的作用。方法:分离BALB/c小鼠的KCs,转染对照siR-NA或者GITRL siRNA 24 h后,分四组培养,分别为对照(Control)组:仅加入培养液;地... 目的:探讨糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)在脂多糖(LPS)诱导的Kupffer细胞(KCs)凋亡中的作用。方法:分离BALB/c小鼠的KCs,转染对照siR-NA或者GITRL siRNA 24 h后,分四组培养,分别为对照(Control)组:仅加入培养液;地塞米松(Dex)组:加入Dex10μmol/L;LPS组:加入LPS 1 mg/L;LPS+Dex组:加入LPS 1 mg/L和Dex 10μmol/L。24 h后用免疫细胞化学法检测GITRL蛋白的表达,应用Annexin V/PI双染标记和流式细胞术检测KCs的凋亡率。结果:LPS刺激增加了KCs GITRL的表达(P<0.05),然而地塞米松处理降低了LPS诱导的GITRL表达。LPS刺激诱导了KCs的凋亡,但是沉默GITRL基因或者地塞米松处理抑制了LPS诱导的凋亡(P<0.05)。结论:LPS可以诱导小鼠KCs的凋亡,其作用可能依赖于GITRL信号的转导。 展开更多

关键词 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(gitrl) Kupfer细胞 凋亡 脂多糖 地塞米松

原文传递

mGITRL真核表达质粒的构建及其在Lewis细胞中的表达 被引量：3

8

作者 胡正军 王胜军 +6 位作者 朱燕萍 鲍俊峰 仝佳 马洁 成军 孙长贵 许化溪 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2008年第2期107-110,共4页

目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定... 目的:构建含小鼠GITRL基因的真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,体外转染小鼠肺癌细胞株Lewis细胞。方法:利用PCR方法扩增mGITRL基因,克隆至pIRES2-eGFP载体,选择阳性克隆并进行序列测定。以电穿孔法转染Lewis细胞,通过G418筛选,获得稳定表达细胞株。结果:构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,基因测序与GenBank中发表的序列完全一致,体外转染Lewis细胞,经G418筛选,体外传代30代以上,RT-PCR及流式细胞仪检测该细胞株稳定表达mGITRL。结论:成功构建了真核表达质粒pIRES2-eGFP/mGITRL,并在小鼠Lewis细胞中稳定表达,为进一步研究GITRL的生物学功能提供研究基础。 展开更多

关键词 gitrl 细胞转染 肿瘤

在线阅读 下载PDF 职称材料

GITRL在脂多糖所致树突状细胞免疫麻痹中的作用 被引量：2

9

作者 王方 李旻 +3 位作者 曲震理 王中晓 薛娣 马瑜红 《中国热带医学》 CAS 2017年第8期749-751,共3页

目的观察脂多糖所致脓毒症小鼠树突状细胞GITRL表达及免疫功能的改变。方法以10 ng/mL脂多糖刺激体外诱导小鼠树突状细胞模拟脓毒症免疫麻痹体系,利用流式细胞术和Brd U细胞增殖反应试剂盒分别检测树突状细胞表面分子CD11c、CD80和GITR... 目的观察脂多糖所致脓毒症小鼠树突状细胞GITRL表达及免疫功能的改变。方法以10 ng/mL脂多糖刺激体外诱导小鼠树突状细胞模拟脓毒症免疫麻痹体系,利用流式细胞术和Brd U细胞增殖反应试剂盒分别检测树突状细胞表面分子CD11c、CD80和GITRL表达、混合淋巴细胞增殖反应及CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg水平。结果脂多糖引起树突状细胞标志分子CD11c、CD80和负调控分子GITRL的表达分别由6.97%、2.61%和22.39%增加到16.02%、13.35%和49.74%,差异均有统计学意义(P<0.01)。平均荧光密度值由4.81增加到17.95,差异有统计学意义(P<0.01)。然而抗原特异性混合淋巴细胞反应OD值由0.532减少为0.419,差异有统计学意义(P<0.01),并且GITRL激活的CD4^+CD25^+Foxp3^+Treg由5.71%增加到8.31%,差异有统计学意义(P<0.05)。结论脂多糖所致脓毒症小鼠树突状细胞表达高水平的免疫共抑制GITRL分子,通过GITRL-GITR激活Treg细胞抑制T细胞增殖和功能,引起免疫麻痹状态。 展开更多

关键词 gitrl 脓毒症 脂多糖 调节性T细胞 免疫麻痹

原文传递

他克莫司通过抑制GITRL减轻大鼠肝移植排斥反应的研究 被引量：2

10

作者 魏思东 龚建平 +1 位作者 李金政 黄中荣 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期1480-1483,共4页

目的探讨他克莫司(FK506)抑制大鼠肝移植排除反应中的作用机制。方法建立大鼠原位肝移植模型,分为3组。耐受组为Brown Norway(BN)到Lewis肝移植;排斥组为Lewis到BN肝移植;他克莫司(FK506)组在建立排斥模型基础上于术后注射FK506。术后7 ... 目的探讨他克莫司(FK506)抑制大鼠肝移植排除反应中的作用机制。方法建立大鼠原位肝移植模型,分为3组。耐受组为Brown Norway(BN)到Lewis肝移植;排斥组为Lewis到BN肝移植;他克莫司(FK506)组在建立排斥模型基础上于术后注射FK506。术后7 d检测肝组织病理改变及糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子相关蛋白配体(GITRL)的表达、Kupffer细胞GITRL的表达及细胞因子的改变。结果与耐受组比较,排斥组肝脏及kupffer细胞中GITRL表达升高,采用FK506后,降低了GITRL表达(P<0.05)。与耐受组比较,排斥组血清及kupffer细胞中IFN-γ表达升高,IL-10降低(P<0.05),而在FK506组,与排斥组比较,血清及kupffer细胞中IFN-γ表达降低,IL-10表达升高(P<0.05)。结论 FK506能减轻大鼠肝移植后的急性排斥反应,其机制与降低GITRL的表达有关。 展开更多

关键词 gitrl 肝移植 急性排斥反应 KUPFFER细胞 他克莫司

暂未订购

小鼠GITRL基因腺病毒载体的构建与鉴定 被引量：1

11

作者 马洁 田洁 +5 位作者 刘艳 刘青玲 毛朝明 焦志军 许化溪 王胜军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1075-1077,共3页

目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌... 目的:构建重组腺病毒pAdEasy-GFP-GITRL,并测定病毒滴度。方法:从PIRES-GITRL载体上用BglⅡ和SalⅠ双酶切,回收目的基因GITRL,插入同样用BglⅡ和SalⅠ双酶切的穿梭质粒pAdtrack-CMV中,将线性化穿梭质粒骨架质粒pAdEasy-1共转染BJ5183菌,鉴定正确后,将重组腺病毒载体pAdEasy-GFP-GITRL转染HEK293细胞,以包装出完整腺病毒。TCID50法测定重组腺病毒滴度,Western blot法检测GITRL蛋白表达。结果:成功构建小鼠GITRL基因的重组腺病毒载体(pAdEasy-GFP-GITRL),经包装后获得高滴度表达GITRL基因的重组腺病毒,病毒滴度为2.0×109pfu/mL。Western blot结果显示重组病毒载体能表达GITRL蛋白。结论:重组腺病毒表达载体(pAdEasy-GFP-GITRL)的成功构建及重组腺病毒的获得为GITRL基因干预治疗奠定了基础。 展开更多

关键词 gitrl 重组腺病毒 病毒滴度

原文传递

hGITRL_(aa52-177)蛋白在杆状病毒系统中的表达 被引量：1

12

作者 唐莉 王胜军 +6 位作者 毛朝明 陈君 胡正军 鲍俊峰 仝佳 邵启祥 许化溪 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期218-221,共4页

目的利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白。方法PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coliDH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳及Western... 目的利用杆状病毒系统表达hGITRLaa52-177蛋白。方法PCR扩增获得hGITRL胞外段(hGITRLaa52-177)基因,克隆入pFastBacHTa转移载体,在E.coliDH10Bac内通过转座子Tn7的介导,得到重组杆粒,转染Tn细胞表达目的蛋白。通过SDS-PAGE电泳及Westernblotting鉴定目的蛋白的表达。结果重组载体pFastBacHTa-hGITRLaa52-177以及重组杆粒Bacmid-hGITR-Laa52-177构建正确,在Tn细胞内成功表达6×His-hGITRLaa52-177重组蛋白,SDS-PAGE电泳及Westernblotting显示重组hGITRLaa52-177蛋白相对分子质量约为Mr18000。结论杆状病毒-昆虫表达系统获得hGITRLaa52-177蛋白,为进一步从蛋白质水平研究hGITR/hGITRL对机体免疫调节的影响奠定了基础。 展开更多

关键词 gitrl 杆状病毒 真核表达

原文传递

人GITRL和IL-21基因对CML来源树突状细胞功能的影响 被引量：1

13

作者 熊彬 金七妹 宋飞雪 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1189-1194,共6页

目的:本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)联合白细胞介素21(IL-21)基因真核表达载体,为探讨目的基因对慢性粒细胞白血病(CML)来源树突状细胞(DC)的影响。方法:脂质体介导法将重组真核表达载体转染经纯化的伊马替... 目的:本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)联合白细胞介素21(IL-21)基因真核表达载体,为探讨目的基因对慢性粒细胞白血病(CML)来源树突状细胞(DC)的影响。方法:脂质体介导法将重组真核表达载体转染经纯化的伊马替尼治疗有效、无效的慢性期CML患者及健康志愿者来源的DC,流式细胞仪检测转染后DC的CD1а、CD83、CD86表达率变化。将转染后的DC与纯化的自体NK混合培养使之成为DC-CIK。以DC-CIK细胞为效应细胞,乳酸脱氢酶释放法观察其对靶细胞的杀伤率。结果:所获目的基因经测序与GenBank比对序列一致,真核表达载体质粒经限制性酶切鉴定片段大小正确,并均可转染至伊马替尼治疗有效、无效的慢性期CML患者及健康志愿者来源的DC细胞。经转染DC的CD1а、CD83、CD86表达率增加,细胞毒活性试验表明转染后的DC可增加自体NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结论:各组DC能够通过转染IL-21和GITRL基因的方式获得自我活化、上调自身细胞表面分子的表达,增强其对肿瘤细胞的细胞毒活性。 展开更多

关键词 IL-21 gitrl 树突状细胞 NK细胞 免疫治疗

暂未订购

GITRL的分子结构 被引量：3

14

作者 唐莉 王胜军 《生命的化学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期386-390,共5页

糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand,GITRL)是TNF家族新成员,与糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)结合后,提供正向的刺激信号,参与T细胞反应。与其他TNF家族成... 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand,GITRL)是TNF家族新成员,与糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(GITR)结合后,提供正向的刺激信号,参与T细胞反应。与其他TNF家族成员不同的是:hGITRL胞外功能区自身聚集形成疏松的三聚体结构,而mGITRL则表现出独特的二聚体结构。在溶液中,GITRL通过寡聚化作用形成多种形式的低聚体,通过寡聚化作用可以调节低聚体的数量,优化GITRL/GITR信号的发挥。此外,GITRL还可以通过传递反向信号发挥其独特的生物学功能。 展开更多

关键词 gitrl 晶体结构 寡聚化

原文传递

GITR/GITRL系统在免疫调节中的作用 被引量：2

15

作者 郑雪平 胡学强 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期385-386,389,共3页

关键词 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体 GITR gitrl 免疫调节

原文传递

Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠GITRL蛋白并鉴定

16

作者 马洁 田洁 +4 位作者 刘青玲 刘艳 杨先知 许化溪 王胜军 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期405-407,共3页

目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化... 目的:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达小鼠糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体的配体(G ITRL)蛋白。方法:用EcoRⅠ和SalⅠ双酶切GITRL-PMD18T载体,回收目的基因G ITRL,并定向克隆入穿梭质粒pFastBacHTA中。以pFastBacHTA-G ITRL转化感受态DH10Bac细菌,在DH10Bac细菌内重组pFastBacHTA与杆粒发生转座。筛选阳性克隆,提取重组杆粒,转染Tn昆虫细胞株,获取完整的重组杆状病毒。反复感染Tn细胞,扩增病毒同时表达目的蛋白,用Western blot法进行蛋白鉴定。结果:经核苷酸序列测定及PCR鉴定,成功地获得含GITRL基因的重组杆粒。在杆粒转染的Tn细胞中表现有细胞病变,推断转染成功并获得重组杆状病毒。Western blot法鉴定显示,在Mr20000处有特异性的蛋白条带。结论:利用Bac-to-Bac杆状病毒表达系统成功地表达了小鼠GITRL蛋白,为进一步研究其生物学活性及功能奠定了实验基础。 展开更多

关键词 gitrl 杆状病毒 真核表达 小鼠

原文传递

GITR/GITRL信号通路与支气管哮喘的研究进展 被引量：1

17

作者 应亚萍 童夏生 +1 位作者 金小红 姚泽忠 《亚洲儿科病例研究》 2013年第2期23-29,共7页

本文采用基于密度泛函理论(DFT)框架下广义梯度近似平面波超软赝势法,支气管哮喘是一种全球性的发病率日益升高的呼吸道变应性疾病,支气管哮喘严重影响儿童的生长发育和心理健康,甚至威胁到他们的生命。但其发病机制目前尚未完全阐明,... 本文采用基于密度泛函理论(DFT)框架下广义梯度近似平面波超软赝势法,支气管哮喘是一种全球性的发病率日益升高的呼吸道变应性疾病,支气管哮喘严重影响儿童的生长发育和心理健康,甚至威胁到他们的生命。但其发病机制目前尚未完全阐明,传统的观点认为Th1/Th2平衡失调理论在哮喘的发病中起着重要的作用。但随着对Th1,Th2以外的其他T细胞亚群的研究,人们逐渐发现CD4+CD25+Treg细胞与哮喘有着密切的关系。而糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体(Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor GITR)是属于肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor TNFR)超家族的成员之一,在CD4+CD25+T调节细胞(Regulatory T cell Treg)细胞高表达,与其配体糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(Glucocorticoid-induced tumor necrosis factor receptor ligand GITRL)结合后能增强T细胞激活、增殖、分泌细胞因子、MAPKs和NF-κB激活效应、抑制CD4+CD25+Treg细胞的功能,从而加强效应性T细胞的活性,有利于增强抗肿瘤免疫和抗病毒免疫,在免疫系统的调节中起着复杂的作用。 展开更多

关键词 GITR gitrl 支气管哮喘

暂未订购

GITRL联合IL-21基因真核表达载体的构建及体外研究

18

作者 熊彬 朱明霞 +1 位作者 金七妹 宋飞雪 《中国实验血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1295-1300,共6页

本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)联合白介素-21(IL-21)基因真核表达载体,为探讨目的基因对慢性髓系白血病(CML)来源树突状细胞(DC)的影响。应用脂质体介导法将重组真核表达载体转染至纯化的DC,而此纯化的DC来... 本研究构建人糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体(GITRL)联合白介素-21(IL-21)基因真核表达载体,为探讨目的基因对慢性髓系白血病(CML)来源树突状细胞(DC)的影响。应用脂质体介导法将重组真核表达载体转染至纯化的DC,而此纯化的DC来源于经伊马替尼治疗有效或无效的慢性期CML患者或健康志愿者。应用ELISA法检测转染后DC细胞因子的浓度变化。将转染后的DC与纯化的自体NK混合培养使之成为DC-CIK。以DC-CIK细胞为效应细胞,应用乳酸脱氢酶释放法观察其对靶细胞的杀伤率。结果表明:所获目的基因经测序与GenBank比对序列一致,PCR及限制性核酸内切酶检测显示,真核表达载体质粒经限制性酶切鉴定片段大小正确,并均可转染至伊马替尼治疗有效、无效的慢性期CML患者及健康志愿者来源的DC细胞。成功转染相应载体后的DC分别表现出IL-2和IFN-γ分泌量增加;细胞毒活性试验表明,转染后的DC可增加自体NK细胞对K562细胞的杀伤活性。结论:DC能够通过转染IL-21和GITRL基因的方式获得自我活化、上调自身细胞因子分泌的能力,为酪氨酸激酶抑制剂治疗无效的CML患者的免疫治疗奠定了理论依据和实验基础。 展开更多

关键词 gitrl IL-21 树突状细胞 NK细胞 免疫治疗

暂未订购

GITRL基因SNP-rs2236876分型方法的比较

19

作者 吴晶晶 仝佳 +4 位作者 陈娟 袁靖 田洁 汤新逸 王胜军 《江苏大学学报（医学版）》 CAS 2015年第4期308-310,316,共4页

目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplificat... 目的:对3种单核苷酸多态(single nucleotide polymorphism,SNP)分型方法进行比较,选择准确有效的SNP分型方法对GITRL SNP-rs2236876A/G进行基因分型。方法:采用Taqman-MGB探针法,限制性片段长度多态性聚合酶链式反应(cleaved amplification polymorphism sequence-tagged sites,PCR-RFLP)法和直接测序法对GITRL SNPrs2236876A/G进行分型并比较。结果:PCR-RLFP法分型结果直接通过电泳图可见,适合少量的实验对象;TaqmanMGB探针法通过不同的荧光区分不同的基因型,适合大量的实验对象;直接测序法交由测序公司测定,样本数量浮动范围较大,费用较高。结论:Taqman-MGB探针法适用于GITRL基因rs2236876A/G基因分型,PCR-RFLP法适用于基因分型结果的验证,直接测序法适用于鉴定有争议的PCR-RFLP法的验证结果。 展开更多

关键词 TAQMAN-MGB探针 单核苷酸多态分型 PCR-RFLP gitrl

暂未订购

CpGODN对哮喘小鼠肺组织GITR/GITRL表达的影响 被引量：3

20

作者 王琼艳 李孟荣 +2 位作者 王玥 姜晗丹 李迎春 《医学研究杂志》 2013年第7期121-125,共5页

目的观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响。方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组。以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。观... 目的观察CpGODN干预对哮喘小鼠肺组织GITR及GITRL表达的影响。方法 48只SPF级雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组(简称对照组),哮喘模型组(简称模型组),地塞米松治疗组,CpGODN治疗组。以卵清白蛋白(OVA)致敏和激发建立小鼠哮喘模型。观察肺组织病理;对支气管肺泡灌洗液(BALF)进行细胞分类及计数;反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫组化检测肺组织中GITR、GITRL的表达。结果 BALF中嗜酸性粒细胞平均(x±s,下同)计数:CpGODN组为(2.76±0.25)×107/L,地塞米松组为(1.05±1.72)×107/L,均低于模型组的(12.09±2.62)×107/L,差异有统计学意义(P<0.01),CpGODN组与地塞米松组比较差异无统计学意义(P>0.05)。RT-PCR、免疫组化结果:CpGODN组与地塞米松组GITR、GITRL表达高于模型组,差异有统计学意义(P均<0.05),CpGODN组GITRL mRNA、GITR蛋白表达高于地塞米松组,差异有统计学意义(P<0.05)。相关分析:肺组织GITR与GITRL表达呈正相关(P<0.01,n=40)。结论 CpGODN能改善哮喘小鼠气道炎症,显著增强哮喘小鼠模型中GITR及GITRL在肺组织中的表达。 展开更多

关键词 哮喘 CPGODN 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体 糖皮质激素诱导的肿瘤坏死因子受体配体

暂未订购