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慢性吗啡诱导HEK293细胞GIRK1和GIRK2膜表达下调
1
作者 刘冰柯 崔宇 +1 位作者 韩雪 肖力 《中山大学学报(医学科学版)》 北大核心 2026年第2期251-258,共8页
【目的】利用人胚胎肾细胞293(HEK293)观察G蛋白门控内向整流钾离子通道(GIRK)亚单位GIRK1和GIRK2在吗啡耐受后的表达和分布变化。【方法】使用HEK293细胞转染慢病毒pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR,构建过表达GIRK1、GIRK2和μ阿片受... 【目的】利用人胚胎肾细胞293(HEK293)观察G蛋白门控内向整流钾离子通道(GIRK)亚单位GIRK1和GIRK2在吗啡耐受后的表达和分布变化。【方法】使用HEK293细胞转染慢病毒pLV-CMV-GIRK1-T2A-GIRK2-P2A-MOR,构建过表达GIRK1、GIRK2和μ阿片受体(MOR)的稳转HEK293细胞,使用吗啡(1μmol/L,24 h)处理该稳转细胞,构建吗啡耐受HEK293细胞模型。细胞免疫荧光检测细胞模型中MOR与GIRK1和GIRK2的分布及共定位情况。ELISA检测cAMP含量变化确定建立吗啡耐受HEK293细胞模型。细胞免疫荧光和免疫印迹法检测吗啡耐受后GIRK1和GIRK2的分布及蛋白水平变化。多功能酶标仪测量荧光强度检测吗啡耐受后细胞膜电位水平变化。【结果】在稳转HEK293细胞中,免疫荧光化学显示GIRK1和GIRK2主要在胞膜上表达,少量在胞浆中,GIRK1和GIRK2与MOR共定位,且GIRK1和GIRK2共定位。与对照组相比,吗啡处理1 h组cAMP显著降低(1.42±0.07 vs.0.72±0.12,P=0.0010),吗啡处理24 h组cAMP出现显著升高(0.72±0.12 vs.1.98±0.17,P=0.0005)。荧光双染显示吗啡处理24 h后,吗啡耐受组胞浆中GIRK1(13.76±7.67 vs.63.72±16.02,P<0.0001)和GIRK2(7.16±2.61vs.32.92±7.67,P=0.0029)显著增加。免疫印迹法显示吗啡耐受后膜蛋白GIRK1(1.11±0.14 vs.0.85±0.01,P=0.0045)和GIRK2(1.32±0.02 vs.0.86±0.08,P=0.0001)的表达显著下调。膜电位检测显示,吗啡耐受细胞的超极化反应显著减弱(-15.53±0.12)%vs.(-8.17±0.11)%,P<0.0001。【结论】慢性吗啡处理能够诱导稳转HEK293细胞膜GIRK1和GIRK2表达下调。 展开更多
关键词 吗啡 耐受 人胚胎肾细胞293 G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位1 G蛋白门控内向整流钾离子通道亚单位2
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右美托咪定鞘内注射对大鼠急性疼痛行为及脊髓GIRK2表达的影响 被引量：6
2
作者 李雄娟 黄焕森 +2 位作者 陈海铭 阮林 何雁冰 《广东医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1816-1818,共3页
目的观察鞘内注射右美托咪定(Dex)对切口痛模型大鼠诱发疼痛及脊髓背角GIRK2表达的影响。方法采用大鼠切口痛模型。健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为对照组(I组,不作任何处理)、手术组(S组,行左足底切开手术)、安慰剂组(P组,先鞘内注射... 目的观察鞘内注射右美托咪定(Dex)对切口痛模型大鼠诱发疼痛及脊髓背角GIRK2表达的影响。方法采用大鼠切口痛模型。健康成年雄性SD大鼠60只,随机分为对照组(I组,不作任何处理)、手术组(S组,行左足底切开手术)、安慰剂组(P组,先鞘内注射生理盐水后行左足切开手术)、实验1组(L组,先鞘内注射Dex 0.75μg/kg后行左足切开手术)和实验2组(H组,先鞘内注射Dex 1.5μg/kg后行左足切开手术)。使用vonfrey细丝法观察不同时间点大鼠机械痛阈的改变,免疫荧光技术检测脊髓背角GIRK2蛋白表达的变化。结果L、H组机械痛阈值较S组及P组明显升高(P<0.05);大鼠脊髓背角GIRK2蛋白表达也明显增多(P<0.01)。L组与H组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论鞘内预先给予Dex能减轻大鼠急性创伤后的疼痛阈值,增加大鼠脊髓内GIRK2表达,提示DEX的镇痛作用可能与通过上调GIRK2蛋白表达有关。 展开更多
关键词 右美托咪定 girk2蛋白 急性疼痛 疼痛信号传导
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GIRK2通道外流门控机制的分子动力学模拟
3
作者 王瑞 赵伊婷 +2 位作者 石定媛 李岱霖 林嫣 《厦门理工学院学报》 2023年第3期88-95,共8页
为深入理解外流调控型病理或药效机制,采用全原子分子动力学模拟方法,在外向电场作用下,对不同因子(Na+、Gβγ、Na+-Gβγ)调控下的GIRK2通道进行微秒级分子动力学模拟,揭示GIRK2通道的外向电流门控机制。结果表明:Na+和Gβγ亚基协同... 为深入理解外流调控型病理或药效机制,采用全原子分子动力学模拟方法,在外向电场作用下,对不同因子(Na+、Gβγ、Na+-Gβγ)调控下的GIRK2通道进行微秒级分子动力学模拟,揭示GIRK2通道的外向电流门控机制。结果表明:Na+和Gβγ亚基协同作用激活GIRK2通道,Na+使得GIRK2通道G-loop门控打开概率高达94.6%,显示出G-loop门控的调节作用;Gβγ主要影响HBC门控,使其打开概率为73.6%。CTD结构域内向摆动约148.8°和TM2-CTD逆向旋转约11.9°可导致G-loop门激活,而CTD外向摆动和TM2外向倾斜约38.3°导致HBC门激活。 展开更多
关键词 girk2通道 外流门控机制 分子动力学
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weaver基因对CAD细胞生物学功能的影响
4
作者 魏小斌 史克珊 +1 位作者 方立 吴燊荣 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1640-1644,共5页
目的 :评估weaver基因对神经细胞生长发育、蛋白质表达和生命力的影响。方法 :将一类酪氨酸脱氢酶阳性的神经细胞 (一种中枢神经源细胞 ) ,又称CAD (Cath .a -differentiated ,是Cath .a细胞的一种突变型 ,Cath .a是一种转基因大鼠的肿... 目的 :评估weaver基因对神经细胞生长发育、蛋白质表达和生命力的影响。方法 :将一类酪氨酸脱氢酶阳性的神经细胞 (一种中枢神经源细胞 ) ,又称CAD (Cath .a -differentiated ,是Cath .a细胞的一种突变型 ,Cath .a是一种转基因大鼠的肿瘤细胞 )细胞 ,引入由DNA编码的野生型和突变型离子通道。采用DNA克隆、免疫组化、Westernblot等技术进行检测。用不同浓度 (0 2 5mg/L ,0 5mg/L ,1 0mg/L)的Girk2cDNA(对照组 )和wvGirk2cDNA(实验组 )质粒转染CAD细胞后 ,观察两组基因对转染CAD细胞的数目、蛋白质合成、神经突生长等指标的影响 ;并且观察MK80 1和Kir2 3对wvGirk2的抑制作用。结果 :发现高浓度wvGirk2转染的CAD细胞存活数目减少到约6 0 %的单纯Girk2转染细胞数目 ;低浓度wvGirk2没有引起细胞死亡但是减少转染基因的蛋白质产物 ,且神经轴突生长也受wvGirk2影响 ;MK80 1和Kir2 3对wvGirk2有抑制作用。结论 :wvGirk2基因在weaver动物中有一种特殊功能 ,可阻断wvGirk2通道防止细胞死亡。 展开更多
关键词 weaver基因 野生型girk2 wvgirk2 细胞
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帕金森氏综合症发病机理研究:weaver基因研究
5
作者 魏小斌 史克珊 +1 位作者 方立 伍燕 《中国航天医药杂志》 2003年第4期7-12,共6页
目的研究帕金森氏综合症的发病机理,评估wvGirk2对神经细胞生长发育和生命力的影响。方法给一类酪氨酸脱氢酶阳性的神经细胞(一种中枢神经源细胞),又称CAD细胞,引入由DNA编码的野生型和突变型离子通道。采用DNA克隆、免疫组化、WesternB... 目的研究帕金森氏综合症的发病机理,评估wvGirk2对神经细胞生长发育和生命力的影响。方法给一类酪氨酸脱氢酶阳性的神经细胞(一种中枢神经源细胞),又称CAD细胞,引入由DNA编码的野生型和突变型离子通道。采用DNA克隆、免疫组化、WesternBlots免疫印迹等技术进行检测分析。用不同浓度(0.25μg/ml,0.5μg/ml,1.0μg/ml)的Girk2cDNA(对照组)和wvGirk2cDNA(观察组)质粒转染CAD细胞后,观察两组基因对转染CAD细胞的数目、蛋白质合成、神经突生长等指标的影响作用;并且观察MK801和Kir2.3对wvGirk2的抑制作用。结果高浓度wvGirk2转染的CAD细胞存活数目减少到约60%的单纯Girk2转染细胞数目;低浓度wvGirk2没有引起细胞死亡但是减少转染基因的蛋白质产物,且神经突生长也受wvGirk2影响;MK801和Kir2.3对wvGirk2有抑制作用。结论wvGirk2基因在weaver动物中有一种特殊功能,阻断wvGirk2通道能够防止细胞死亡。离子通道的存在和wvGirk2的转染可能对wvGirk2细胞的命运有显著影响。 展开更多
关键词 帕金森氏综合症 发病机理 weaver基因 神经细胞 生长发育
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