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诺如病毒新重组株GII.P16/GII.2引起福建省2016年冬季病毒性胃肠炎暴发 被引量:14
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作者 吴冰珊 黄枝妙 +3 位作者 欧剑鸣 齐孝旗 黄业伟 翁育伟 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第9期805-808,813,共5页
目的本文旨在鉴定福建省2016年冬季导致病毒性胃肠炎暴发的病原体,并对病原体进行分子特征研究。方法对疫情暴发地上送的福建省2016年胃肠炎暴发急性病例标本,采用荧光PCR初步判定病原体,常规RT-PCR检测诺如病毒RNA聚合酶和衣壳蛋白基... 目的本文旨在鉴定福建省2016年冬季导致病毒性胃肠炎暴发的病原体,并对病原体进行分子特征研究。方法对疫情暴发地上送的福建省2016年胃肠炎暴发急性病例标本,采用荧光PCR初步判定病原体,常规RT-PCR检测诺如病毒RNA聚合酶和衣壳蛋白基因片段,并进行序列测定和分子特征分析。结果在3起暴发疫情中18份标本经荧光PCR检测均为诺如病毒核酸阳性,其中15份标本RT-PCR检测判为GII型诺如病毒,9份标本成功测序。分析测序结果,证实引起本轮疫情为诺如病毒新重组株,该重组株有别于本地散发流行及全球暴发流行的优势基因型GII.4。毒株RNA聚合酶核苷酸序列与2016年日本的GII.4悉尼变异株Kawasaki194毒株的同源性最高,达98%,为GII.P16亚型;衣壳蛋白核苷酸序列与2008年比利时的IPH2161-08VG06毒株同源性最高(97.7%~98.8%),为GII.2亚型。结论这是福建省首次报道诺如病毒重组株GII.P16/GII.2的检出,并引起病毒性胃肠炎暴发。 展开更多
关键词 病毒性胃肠炎 暴发 诺如病毒 gii.P16/gii.2 分子特征
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南京地区腹泻婴幼儿新型诺如病毒GII.17变异株的检出及基因分析 被引量:8
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作者 蒋翠莲 叶莉莉 +5 位作者 许烨 顾平清 张洪英 靳淼 艾静 付建光 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第20期4717-4720,共4页
目的了解南京地区腹泻婴幼儿新型GII.17诺如病毒变异株的检出及其基因特征,为疾病预防控制及疫苗研制提供切实有力的科学依据。方法收集2015年1-6月南京市妇幼保健院疑似病毒性腹泻粪便标本178份,采用荧光定量PCR方法对标本进行诺如病... 目的了解南京地区腹泻婴幼儿新型GII.17诺如病毒变异株的检出及其基因特征,为疾病预防控制及疫苗研制提供切实有力的科学依据。方法收集2015年1-6月南京市妇幼保健院疑似病毒性腹泻粪便标本178份,采用荧光定量PCR方法对标本进行诺如病毒检测并对阳性标本进行基因分析。结果 178份粪便标本中,检出GII型诺如病毒27份,阳性率为15.2%,未检测出GI型诺如病毒,对该地区诺如病毒阳性标本进行衣壳蛋白区测序,发现27份GII标本中14株为新型GII.17变异株,8株为GII.3型,5株为GII.4-Sydney型;对其中5株GII.17变异株进行完整的衣壳蛋白VP1测序,发现其VP1区部分氨基酸已经出现了突变,而有些氨基酸位点的突变是与病毒抗原性及人群易感性密切相关。结论新型GII.17诺如病毒变异株在南京地区患病毒性腹泻的婴幼儿中检出,且检出率高于其他诺如病毒株,表明其可能已成为本地区新的诺如病毒流行变异株,考虑到其已在国内引起暴发流行,提示该毒株将会是本地区在今后重点预防控制监测的诺如病毒株。 展开更多
关键词 诺如病毒 变异株 gii.17型 基因分析
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基于颜色判定的逆转录环介导等温扩增技术检测GII型诺如病毒基因 被引量:14
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作者 罗剑鸣 吴希阳 +6 位作者 徐子乾 罗乐 聂凯 杨梦婕 曾亚岚 段招军 马学军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期165-171,共7页
建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediatedisothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于GII型诺如病毒基因检测。针对诺如病毒RNA依赖的RNA聚合酶和衣壳蛋白基因序列(RNA-... 建立了一种基于颜色判定的简单、快速和灵敏的逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription loop-mediatedisothermal amplification,RT-LAMP)方法应用于GII型诺如病毒基因检测。针对诺如病毒RNA依赖的RNA聚合酶和衣壳蛋白基因序列(RNA-dependant RNA polymerase and capsid protein gene)设计出6条特异引物,在等温条件下(65℃)进行扩增反应60min。在扩增前加入染料羟基萘酚蓝(HNB)作为反应指示剂,以其颜色变化作为结果判断标准,并经琼脂糖凝胶电泳验证。本文利用此技术对不同腹泻病毒进行了特异性分析,对体外转录的GII型诺如病毒RNA的梯度稀释进行了灵敏度分析,同时与逆转录PCR(RT-PCR)方法进行比较,并对93份腹泻患者粪便中的病毒核酸进行了检测。结果显示,本研究建立的RT-LAMP方法特异性高,灵敏度达到1 000拷贝/μLRNA分子水平,与常规检测RT-PCR方法相当。对临床标本的阳性检出率也与常规RT-PCR相当。由于此方法特异性强,灵敏度较高,耗时短,结果直观,因此有望用于GII型诺如病毒的现场快速检测。 展开更多
关键词 逆转录环介导等温扩增 gii型诺如病毒
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一起旅游团中急性胃肠炎的暴发与GII. 17型诺如病毒相关 被引量:6
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作者 贾立平 邓洁 钱渊 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第5期767-773,共7页
为了解2016年夏季一起发生在某赴内蒙古旅游团游客中的急性胃肠炎暴发流行的病毒病原。分别采集此次胃肠炎暴发流行中两名患病游客腹泻症状发生后第3天、5天和7天的粪便标本,提取核酸后首先用荧光定量PCR扩增诺如病毒核酸进行检测,阳性... 为了解2016年夏季一起发生在某赴内蒙古旅游团游客中的急性胃肠炎暴发流行的病毒病原。分别采集此次胃肠炎暴发流行中两名患病游客腹泻症状发生后第3天、5天和7天的粪便标本,提取核酸后首先用荧光定量PCR扩增诺如病毒核酸进行检测,阳性标本分别用RT-PCR扩增病毒VP1基因和RdRp区域基因,通过基因测序和序列比对进行基因分型,构建进化树确定进化同源性。通过荧光定量PCR法检测到两名患者的粪便标本均为诺如病毒阳性,提示此次胃肠炎暴发流行的病原为诺如病毒,进一步的RT-PCR扩增病毒基因分析显示检测到的诺如病毒为GII.P17-GII.G17型;构建系统进化树分析显示本次与2014~2015年度广州、中国香港、中国台湾和日本等地的病毒亲缘关系更为接近;氨基酸序列分析显示该基因型与2014年以来流行的毒株同源性较近,与2014年之前流行的毒株相比变异较大,氨基酸变异主要出现在主要衣壳蛋白的P结构域。提示GII.P17-GII.G17型诺如病毒也是引起内蒙地区急性胃肠炎暴发流行的病毒病原。 展开更多
关键词 诺如病毒(Norovirus) 急性胃肠炎 基因分型 gii.17型
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我国GII.4型诺如病毒Sydney株P颗粒的表达及其组织血型抗原结合特征 被引量:2
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作者 张婷 龙艳 +2 位作者 张绪富 胡贵方 戴迎春 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期344-348,共5页
目的表达我国新发现GII.4型诺如病毒优势流行株—Sydney株的P颗粒,并探究其结合人类组织血型抗原(HBGAs)受体特征及变化规律。方法扩增SH 2012_05株中的P区域序列,构建进化树分析其氨基酸序列,并在原核表达系统中表达P颗粒。目的重组蛋... 目的表达我国新发现GII.4型诺如病毒优势流行株—Sydney株的P颗粒,并探究其结合人类组织血型抗原(HBGAs)受体特征及变化规律。方法扩增SH 2012_05株中的P区域序列,构建进化树分析其氨基酸序列,并在原核表达系统中表达P颗粒。目的重组蛋白经Western blot确定其特异性,并采用ELISA法检测P颗粒结合HBGAs的能力及方式。结果 SH 2012_05毒株P区域与Sydney/2012原型株同源性为99.1%,为GII.4/Sydney基因簇。SDS-PAGE电泳和Western blot分析验证SH 2012_05株P颗粒具有特异性。其结合HBGAs受体方式与以往流行的基因簇一致,即与A、B、O、AB型分泌型唾液均能结合,其中与B型抗原亲和力最高。结论成功表达了我国新发现GII.4型诺如病毒Sydney株的P颗粒,明确了Sydney株能结合分泌型HBGAs受体的特征。本研究为诺如病毒疫苗株选择提供了技术储备,这将为GII.4型诺如病毒的预防和控制提供科学基础。 展开更多
关键词 诺如病毒 gii.4型 Sydeny株 P颗粒 人类组织血型抗原
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舟山海岛地区新重组GII.P16-GII.2型诺如病毒基因特征分析 被引量:1
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作者 陈灿 王虹玲 +4 位作者 严剑波 李科峰 张辉 吴昺 李鹏 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1026-1032,1048,共8页
目的对舟山市海岛地区2017年4起诺如病毒暴发疫情进行型别鉴定及分子特征研究。方法对舟山市县区暴发疫情所在地上送的40份急性胃肠炎病例样本,采用荧光PCR筛查病原体,常规RT-PCR扩增诺如病毒聚合酶及衣壳蛋白区基因序列,并进行分子特... 目的对舟山市海岛地区2017年4起诺如病毒暴发疫情进行型别鉴定及分子特征研究。方法对舟山市县区暴发疫情所在地上送的40份急性胃肠炎病例样本,采用荧光PCR筛查病原体,常规RT-PCR扩增诺如病毒聚合酶及衣壳蛋白区基因序列,并进行分子特征分析。结果 27份样本筛查为诺如病毒GII型阳性,经基因序列分子特征分析,证实本轮暴发疫情由新重组GII.P16-GII.2型诺如病毒所引起,重组位点位于ORF1-ORF2连接区处1 120-1 122bp,并分别与同处沿海地区江苏省,北京市2016年报道的GII.P16及GII.2型毒株同源性最高;对其中1例样本近乎完整的聚合酶区及衣壳蛋白区氨基酸序列与代表株相比对,发现2016-2017年GII.P16型c簇中聚合酶区5个特异位点发生变异。结论本次为舟山市海岛地区首次检测出诺如病毒重组株GIIP.16-GII.2型,并引起急性胃肠炎暴发,在今后的监测工作中应同时开展诺如病毒的聚合酶区及衣壳蛋白区的序列检测,及时识别新出现的变异株,为本区域诺如病毒的防控提供依据。 展开更多
关键词 诺如病毒 gii.P16-gii.2 暴发 变异
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Acute gastroenteritis outbreak caused by a GII.6 norovirus 被引量:8
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作者 Ling-Fei Luo Kun Qiao +4 位作者 Xiao-Guang Wang Ke-Ying Ding Hua-Ling Su Cui-Zhen Li Hong-Jing Yan 《World Journal of Gastroenterology》 SCIE CAS 2015年第17期5295-5302,共8页
AIM:To report an acute gastroenteritis outbreak caused by a genogroup 2 genotype 6(GII.6) strain norovirus in Shanghai,China.METHODS:Noroviruses are responsible for approximately half of all reported gastroenteritis o... AIM:To report an acute gastroenteritis outbreak caused by a genogroup 2 genotype 6(GII.6) strain norovirus in Shanghai,China.METHODS:Noroviruses are responsible for approximately half of all reported gastroenteritis outbreaks in many countries.Genogroup 2 genotype 4 strains are the most prevalent.Rare outbreaks caused by GII.6 strains have been reported.An acute gastroenteritis outbreak occurred in an elementary school in Shanghai in December of 2013.Field and molecular epidemiologic investigations were conducted.RESULTS:The outbreak was limited to one class in an elementary school located in southwest Shanghai.The age of the students ranged from 9 to 10 years.The first case emerged on December 10,2013,and the last case emerged on December 14,2013.The cases peaked on December 11,2013,with 21 new cases.Of 45 students in the class,32 were affected.The main symptom was gastroenteritis,and 15.6%(5/32) of the cases exhibited a fever.A field epidemiologic investigation showed the pathogen may have been transmitted to the elementary school from employees in a delicatessen via the first case student,who had eaten food from the delicatessen one day before the gastroenteritis episodes began.A molecular epidemiologic investigation identified the cause of the gastroenteritis as norovirus strain GII.6;the viral sequence of the student cases showed 100% homology with that of the shop employees.Genetic relatedness analyses showed that the new viral strain is closely related to previously reported GII.6 sequences,especially to a strain reported in Japan.CONCLUSION:This is the first report to show that norovirus strain GII.6 can cause a gastroenteritis outbreak.Thus,the prevalence of GII.6 noroviruses requires attention. 展开更多
关键词 GENOGROUP 2 GENOTYPE 6 GENOGROUP Genetic relatedness analyses GASTROENTERITIS NOROVIRUSES OUTBREAK
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Genetic Analysis of an Emerging GII.P2–GII.2 Norovirus Associated with a 2016 Outbreak of Acute Gastroenteritis in China 被引量:5
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作者 Yuanyun Ao Xiaolu Xie +2 位作者 Xiaogen Dong Miao Jin Zhaojun Duan 《Virologica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2019年第1期111-114,共4页
Dear Editor,Noroviruses are positive-sense, single-stranded RNA viruses belonging to Caliciviridae and account for more than 50%of all acute gastroenteritis (AGE) outbreaks worldwide and cause an estimated 200,000 dea... Dear Editor,Noroviruses are positive-sense, single-stranded RNA viruses belonging to Caliciviridae and account for more than 50%of all acute gastroenteritis (AGE) outbreaks worldwide and cause an estimated 200,000 deaths per year among children\5 years of age, primarily in developing countries (Hall et al. 2012;Glass et al. 2009). The norovirus genome contains three open reading frames (ORFs). 展开更多
关键词 gii.2 NOROVIRUS Associated with a 2016 OUTBREAK of Acute GASTROENTERITIS in China Genetic Analysis of AN EMERGING gii.P2
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儿童期诊断的青少年起病的成人型糖尿病2型临床特点及基因分析
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作者 叶娟 叶枫 +3 位作者 侯凌 吴薇 罗小平 梁雁 《中国当代儿科杂志》 北大核心 2025年第1期94-100,共7页
目的分析总结青少年起病的成人型糖尿病2型(maturity-onset diabetes of the young type 2,MODY2)患儿的临床表现及遗传学特点,提高临床工作中对MODY2的识别能力。方法回顾性分析2017年8月—2023年7月在华中科技大学同济医学院附属同济... 目的分析总结青少年起病的成人型糖尿病2型(maturity-onset diabetes of the young type 2,MODY2)患儿的临床表现及遗传学特点,提高临床工作中对MODY2的识别能力。方法回顾性分析2017年8月—2023年7月在华中科技大学同济医学院附属同济医院儿科确诊的13例MODY2患儿的临床资料。结果13例MODY2患儿(编号P1~13)均有糖尿病家族史,均为健康体检或因感染性疾病偶然发现的轻度空腹高血糖[(6.4±0.5)mmol/L)]。其中2例空腹血糖达到糖尿病诊断标准,其他病例均为空腹血糖受损或糖耐量受损;1 h血糖(one-hour post-glucose,1-hPG)波动在8.31~13.06 mmol/L,已到达国际糖尿病联盟推荐的糖尿病诊断标准。13例MODY2患儿均为葡萄糖激酶(glucokinase,GCK)基因杂合变异,其中P6为GCK c.1047C>A(p.Y349X)、P11为GCK c.1146_1147insGCAGAGCGTGTCTACGCGCGCTGCGCACATGTGC(p.S383Alafs*87)和P13为GCK c.784_785insC(p.D262Alafs*13),均为尚未报道过的变异。结论该研究丰富了MODY2的基因变异谱;临床对于有糖尿病家族史、偶然发现的轻度空腹血糖增高、糖尿病相关抗体阴性的患儿,需警惕MODY2可能。 展开更多
关键词 单基因糖尿病 青少年起病的成人型糖尿病2型 葡萄糖激酶基因 基因型 儿童
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表达GoAstV-2 Cap蛋白的重组FAdV-4的构建与鉴定 被引量:1
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作者 李星雨 李岩 +14 位作者 杨盼盼 刘俊杰 相梦佳 朱玉涛 邱路遥 乔麒龙 张伯顺 卜德新 韩城昊 于春梅 丛雁方 王增 李建丽 王白玉 赵军 《中国兽医学报》 北大核心 2025年第3期443-448,513,共7页
为构建表达鹅星状病毒基因2型(GoAstV-2)衣壳蛋白(Cap)的重组禽腺病毒4型(FAdV-4),本研究将GoAstV-2的Cap基因表达盒插入到含有FAdV-4感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ中FAdV4基因组的1966 bp自然缺失区,将获得的重组感染性克隆p15A-cm-FAd... 为构建表达鹅星状病毒基因2型(GoAstV-2)衣壳蛋白(Cap)的重组禽腺病毒4型(FAdV-4),本研究将GoAstV-2的Cap基因表达盒插入到含有FAdV-4感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ中FAdV4基因组的1966 bp自然缺失区,将获得的重组感染性克隆p15A-cm-FAdV4-HNJZ-Cap/GoAstV-2利用限制性内切酶线性化后转染鸡肝癌细胞系(chicken hepatoma cell line,LMH),拯救出表达Cap蛋白的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2。将重组病毒在LMH细胞中连续传至第15代,提取重组病毒基因组DNA,用插入位点两侧的鉴定引物进行PCR和利用抗Cap蛋白多克隆抗体进行间接免疫荧光试验和Western blot对重组病毒进行鉴定,同时对重组病毒在LMH细胞中的复制动态进行了研究。结果显示,GoAstV-2的Cap基因能够稳定存在于重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2基因组中,而且获得稳定表达;重组病毒具有良好的体外复制能力。本研究所制备的重组病毒rFAdV4-Cap/GoAstV-2为研制防控鹅FAdV-4和GoAstV-2混合感染的新型高效二联灭活疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 鹅星状病毒基因2型 禽病毒4型 CAP蛋白 二联灭活疫苗
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ABCG2基因不同基因型对蛋鸭蛋壳颜色、蛋品质和产蛋性能的影响
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作者 王珑欣 于思梦 +2 位作者 鲁美希 白向星 侯水生 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第4期1671-1680,共10页
【目的】通过鉴定绿壳纯合M11系北京鸭(60周龄)ATP结合盒G亚家族成员2(ABCG2)基因的基因型,探索ABCG2基因不同基因型对蛋壳颜色、胆绿素合成能力、蛋品质和产蛋性能的影响。【方法】试验以60周龄M11系北京鸭作为试验群体,通过双向等位... 【目的】通过鉴定绿壳纯合M11系北京鸭(60周龄)ATP结合盒G亚家族成员2(ABCG2)基因的基因型,探索ABCG2基因不同基因型对蛋壳颜色、胆绿素合成能力、蛋品质和产蛋性能的影响。【方法】试验以60周龄M11系北京鸭作为试验群体,通过双向等位基因特异性PCR(Bi-PASA)技术鉴定ABCG2基因的基因型,并通过Sanger测序验证。于60周龄的第1天开始连续收集5 d蛋后,测定鸭蛋的蛋品质、蛋壳颜色等级、红值(R值)、绿值(G值)、蓝值(B值)以及胆绿素含量;从不同基因型群体中各随机选择10只鸭,采集肝脏和蛋壳腺;测定肝脏和蛋壳腺中胆绿素含量、以及蛋壳腺中胆绿素合成相关基因表达量。【结果】Bi-PASA基因分型结果与Sanger测序均一致;群体中AA、AG和GG基因型频率分别为68.96%、26.49%和4.55%,存在4.55%的白壳率。AG基因型母鸭所产鸭蛋的蛋形指数显著高于AA基因型,其哈氏单位显著小于AA基因型,蛋重显著高于AA基因型和GG基因型(P<0.05)。AA和AG基因型母鸭所产鸭蛋的蛋壳颜色等级、胆绿素含量极显著高于GG基因型(P<0.01),蛋壳R值和B值显著低于GG基因型(P<0.05),但AG和AA基因型间均无显著差异(P>0.05)。AA和AG基因型母鸭肝脏和蛋壳腺中胆绿素含量显著或极显著高于GG基因型(P<0.05;P<0.01),蛋壳腺中5′-氨基乙酰丙酸合酶1(ALAS1)、粪卟啉原氧化酶(CPOX)和ABCG2基因表达量显著或极显著高于GG基因型(P<0.05;P<0.01),胆绿素还原酶A(BLVRA)基因表达量极显著低于GG基因型(P<0.01);但AG和AA基因型均无显著差异(P>0.05)。【结论】Bi-PASA技术可准确判断ABCG2基因型,ABCG2基因型可以显著影响鸭蛋壳的颜色等级、R值、G值、B值和胆绿素含量,AA和AG基因型母鸭所产鸭蛋均为绿色,GG基因型母鸭所产鸭蛋均为白色,AA和AG基因型母鸭胆绿素合成和转运能力更强,但AA和AG基因型群体母鸭所产鸭蛋中均存在绿色极浅或极深的情况。本研究结果可为培育白羽绿壳蛋鸭品系提供理论依据和实践参考。 展开更多
关键词 蛋壳颜色 ABCG2基因 基因型 胆绿素 蛋品质 产蛋性能
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CCR2基因敲除小鼠的构建及基因型鉴定
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作者 张慧茹 王安琪 +3 位作者 刘崇 周园园 薛慧 涂佳杰 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第7期1167-1172,共6页
目的探讨C-C趋化因子受体2型(CCR2)基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对CCR2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法将引进的CCR2纯合雄性小鼠和野生型雌性小鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交... 目的探讨C-C趋化因子受体2型(CCR2)基因敲除鼠的繁育和基因型分析,验证聚合酶链式反应(PCR)法对CCR2基因敲除鼠基因型检测的适用性。方法将引进的CCR2纯合雄性小鼠和野生型雌性小鼠进行交配繁殖出子一代,获得的F1代杂合子小鼠继续进行交配,待小鼠2周龄时剪尾部组织提取DNA,PCR法扩增目的基因片段,琼脂糖凝胶电泳进行基因型结果判定。通过遗传杂交,提高产生携带CCR2基因敲除纯合子后代比例,采用Western blot技术针对主要免疫细胞及关键脏器验证后代小鼠中CCR2基因的敲除效果,使用流式细胞术针对主要免疫细胞检测CCR2基因的敲除对免疫系统功能是否有影响。结果成功繁育并鉴定了CCR2基因敲除鼠,得到了3种基因型的F2代小鼠:CCR2^(+/+)、CCR2^(+/-)、CCR2^(-/-)。通过PCR法鉴别了子代基因型,Western blot显示CCR2基因敲除小鼠中CCR2蛋白表达极低。流式分析表明,CCR2基因敲除会减少小鼠脾脏来源T细胞中CD4^(+)T和Th1型细胞表达,但不影响巨噬细胞功能。结论正确的繁殖和鉴定是得到纯合CCR2基因敲除鼠的重要途径,PCR法鉴别小鼠基因型具有简便、快捷、可靠的特点。 展开更多
关键词 C-C趋化因子受体2型 基因敲除 聚合酶链式反应 基因型鉴定 蛋白表达 类风湿关节炎
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TREM2基因敲除小鼠的构建、繁育和基因鉴定
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作者 黄蓉 赵鑫鑫 +3 位作者 薛慧 朱梦娟 涂佳杰 王鑫铭 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第6期977-983,共7页
目的采用CRISPR/Cas9技术构建髓细胞触发受体2(TREM2)基因敲除(TREM2^(-/-))小鼠,繁育TREM2^(-/-)小鼠并分析其基因型。方法采用CRISPR/Cas9技术选择性敲除TREM2基因的外显子2~3区域,构建TREM2^(-/-)小鼠模型,所有小鼠的遗传背景均为C57... 目的采用CRISPR/Cas9技术构建髓细胞触发受体2(TREM2)基因敲除(TREM2^(-/-))小鼠,繁育TREM2^(-/-)小鼠并分析其基因型。方法采用CRISPR/Cas9技术选择性敲除TREM2基因的外显子2~3区域,构建TREM2^(-/-)小鼠模型,所有小鼠的遗传背景均为C57BL/6J。采用聚合酶链式反应(PCR)法鉴定小鼠的基因型。实时荧光定量PCR(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blot)检测小鼠主要组织中TREM2的表达水平,从mRNA水平和蛋白水平上验证PCR鉴定结果的真实性以及科学性。根据sgRNA序列在CCTop网站预测出可能存在的脱靶位点,提取小鼠尾部DNA经PCR扩增后进行Sanger测序,检测TREM2^(-/-)小鼠有无产生脱靶效应。结果通过CRISPR/Cas9技术成功构建了TREM2^(-/-)小鼠,并对小鼠进行了基因型鉴定,琼脂糖凝胶电泳结果显示,仅扩增出415 bp条带的小鼠基因型为野生型(WT);仅扩增出449 bp条带的小鼠基因型为TREM2^(-/-);扩增出415 bp和449 bp双条带的小鼠基因型为杂合型。qPCR结果显示,与WT小鼠相比,TREM2^(-/-)小鼠的心脏、脑组织中TREM2的mRNA表达水平均下调(P<0.01),胸腺、肺组织中TREM2的mRNA表达也呈现下降趋势(P<0.05)。Western blot结果显示,与WT小鼠相比,TREM2^(-/-)小鼠的心脏、脑、胸腺、肺组织以及外周血单个核细胞(PBMC)中TREM2的蛋白表达水平均降低(P<0.01)。Sanger测序结果表明TREM2^(-/-)小鼠没有产生脱靶效应。结论成功构建并繁育了TREM2^(-/-)小鼠,建立了一种可靠的基因型鉴定方法,并采用qPCR、Western blot以及Sanger测序分析,验证了小鼠模型遗传的稳定性,将为TREM2基因功能的研究提供重要的基因动物模型。 展开更多
关键词 髓细胞触发受体2 CRISPR/Cas9 基因敲除 聚合酶链式反应 琼脂糖凝胶电泳 基因型鉴定
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阳江高本底地区汉族男性人群IL-2Rβ基因启动子区多态性分析
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作者 唐颖 王静 +3 位作者 颜丽婷 钟雯婷 温翠菊 苏世标 《中国职业医学》 2025年第1期45-49,共5页
目的分析阳江高本底地区(HBRA)汉族男性人群白细胞介素-2受体(IL-2R)β链基因启动子区单核苷酸多态性位点rs76206423的分布特征。方法采用随机数字表法,分别以阳江市阳西县塘口镇(HBRA组)48名男性人群和恩平市横坡镇(对照组)51名男性人... 目的分析阳江高本底地区(HBRA)汉族男性人群白细胞介素-2受体(IL-2R)β链基因启动子区单核苷酸多态性位点rs76206423的分布特征。方法采用随机数字表法,分别以阳江市阳西县塘口镇(HBRA组)48名男性人群和恩平市横坡镇(对照组)51名男性人群作为研究对象。采集2组人群周围静脉血样本,提取基因组DNA,采用单核苷酸多态性位点检测方法,分析2组人群IL-2Rβ启动子区rs76206423(A/G)的基因分型和等位基因频率分布;比较分析HBRA组人群等位基因频率与美国国立生物技术信息中心数据库中人类基因组计划公布的东亚、南亚、非洲、欧洲和美洲5个地区人群的数据差异。结果2组人群rs76206423位点等位基因频率分布符合H-W平衡定律(P>0.05)。HBRA组人群中rs76206423位点基因型以AA型为主(占64.6%),对照组人群以AG为主(占51.0%),差异有统计学意义(P<0.05);2组人群该位点均以变异型等位基因A为主(分别占78.1%和72.5%),差异无统计学意义(P>0.05)。HBRA组人群rs76206423变异型等位基因G分布频率高于南亚、非洲、欧洲和美洲人群(P值均<0.01);但与东亚人群比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论阳江HBRA汉族男性人群中IL-2Rβ基因启动子区中rs76206423等位基因和基因型分别以野生型等位基因A、野生纯合型AA为主;该位点在HBRA人群中可能具有一定的遗传稳定性,变异程度较高。 展开更多
关键词 高本底地区 白细胞介素-2受体β链 基因多态性 基因频率 等位基因 基因型 遗传变异
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HPgV-2的研究进展
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作者 邓婕 钟春如 +4 位作者 杨怡心 张开娜 李梅正 任莉 刘攀 《病毒学报》 北大核心 2025年第1期264-270,共7页
HPgV-2(Human pegivirus 2)是2015年在丙型肝炎病毒感染者和有多次输血史个体中新发现的一种人源性病毒,与HPgV-1及HCV同属于黄病毒科,三者是黄病毒科肝炎病毒属和Pegivirus属内仅有的三种人源性病毒。HPgV-2感染在普通人群中很少见,且... HPgV-2(Human pegivirus 2)是2015年在丙型肝炎病毒感染者和有多次输血史个体中新发现的一种人源性病毒,与HPgV-1及HCV同属于黄病毒科,三者是黄病毒科肝炎病毒属和Pegivirus属内仅有的三种人源性病毒。HPgV-2感染在普通人群中很少见,且在大多数健康人群中并不存在HPgV-2病毒血症,主要传播流行于HCV/HIV合并感染及注射吸毒者等高危人群。大量证据表明,HPgV-2在流行病学上与HCV密切相关,均可在患者体内产生病毒血症且稳定增殖,最终形成慢性感染。但对于HPgV-2是否具有致病性,目前尚无定论。HPgV-2的基因组特征与HPgV-1相似,均为单股正链RNA病毒。HPgV-2作为Pegivirus属内第二种人源病毒,其核苷酸序列间同一性高达92.1%~95.9%,与邻近进化分支的啮齿动物和蝙蝠Pegiviruses的氨基酸相似性却不到32%。由于包膜蛋白抗体的出现可作为HPgV-2感染消退的指标,因此可使用E2蛋白对HPgV-2进行检测。而HPgV-2的核酸检测则通常使用其5'非翻译区(Untranslated region,UTR)和NS3区域的一段序列作为引物进行定量PCR检测。本文旨在总结HPgV-2的患病率、传播、发病机制、基因组特征及病毒检测。 展开更多
关键词 Human pegivirus-2(HPgV-2) 丙型肝炎病毒 发病机制 流行病学 基因组 检测
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Exogenous insulin-associated autoimmunity and the emergence of double diabetes in type 2 diabetes
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作者 Xin-Gang Li Meng-Ya Qi +1 位作者 Xiang Li Fan Ping 《World Journal of Diabetes》 2025年第9期107-116,共10页
BACKGROUND Exogenous insulin may trigger immune-mediated complications,particularly among East Asian populations.Double diabetes,characterized by overlapping features of type 1 diabetes(T1D)and type 2 diabetes(T2D),ma... BACKGROUND Exogenous insulin may trigger immune-mediated complications,particularly among East Asian populations.Double diabetes,characterized by overlapping features of type 1 diabetes(T1D)and type 2 diabetes(T2D),may arise from insulin-induced autoimmunity.This study aimed to explore the association between high-risk human leukocyte antigen(HLA)class Ⅱ genotypes and susceptibility to double diabetes in patients initially diagnosed with T2D.AIM To investigate clinical and immunogenic features of patients who develop double diabetes following exogenous insulin therapy.METHODS We retrospectively analyzed five cases from Peking Union Medical College Hospital and 18 cases identified from published literature.Patients were categorized into two groups:The T2D→T1D group,characterized by autoimmune progression,and the stable T2D(T2D→T2D).Clinical characteristics and HLA class Ⅱ genotypes were compared descriptively between the two groups.RESULTS A total of 23 patients were included in the analysis.Of these,10 progressed from theT2D→T1D with autoimmune features,while 13 remained in the stable T2D→T2D group.There was no statistically significant difference in age at diagnosis between the two groups(57.10±16.11 years vs 60.31±17.41 years).In the T2D→T1D group,70%of patients carried the HLA-DRB104:05 allele and 40%carried DRB109:01,both of which are commonly associated with a high risk of T1D.In contrast,the T2D→T2D group showed greater genetic heterogeneity,with a broader distribution of HLA-DRB1 alleles,including DRB103:02(n=4),DRB109:01(n=4),and several lower frequency alleles such as DRB1*04:05,*08:03,*03:01,*04:06,*14:01,*04:01,*12:02,*15:02 and*02:01.CONCLUSION These findings suggest that patients in the T2D→T1D group exhibit a stronger autoimmune genetic predisposition,characterized by an enrichment of high-risk HLA class II alleles.In contrast,individuals with stable T2D demonstrate greater HLA diversity and lack definitive autoimmune-associated markers. 展开更多
关键词 Double diabetes Insulin autoantibodies Exogenous insulin β-cell failure Human leukocyte antigen genotype Type 1 diabetes Type 2 diabetes
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西安市4起急性胃肠炎疫情中诺如病毒的分子特征分析 被引量:3
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作者 李焱 吴瑞 +5 位作者 陈海龙 张辉 刘继锋 冀贞浩 邓杨妮 马超锋 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期613-619,共7页
诺如病毒(Norovirus,NoV)属于杯状病毒科诺如病毒属,能造成急性肠胃炎暴发,在全球流行广泛,但其在西安市的流行情况不明。为明确2018年10月西安市4起幼儿园急性肠胃炎疫情的病原及其基因特征,本研究采集了患者肛拭子,用实时定量PCR检出... 诺如病毒(Norovirus,NoV)属于杯状病毒科诺如病毒属,能造成急性肠胃炎暴发,在全球流行广泛,但其在西安市的流行情况不明。为明确2018年10月西安市4起幼儿园急性肠胃炎疫情的病原及其基因特征,本研究采集了患者肛拭子,用实时定量PCR检出诺如病毒阳性核酸,对其扩增部分多聚酶区和衣壳区基因并测序。将所得序列上传分型网站以明确基因型,并用软件分析系统进化、重组位点和正选择位点。共检出GII组阳性核酸31份,测序成功25份。4起疫情均由GII.2[P16]型诺如病毒引起。疫情株扩增序列全长、部分多聚酶区和衣壳区的序列与2018年美国流行株(MK773571)的核苷酸同源性分别为99.8%、99.5%和100%。疫情株与GII.2[P16]型中国参考序列(KY421122、KY806296和MG763377)的核苷酸同源性为99.6%,氨基酸同源性为100%。重组位点约在基因组的5 075bp。疫情株基因组的1 613~1 790aa没有正选择位点。及时的流行病学、分子流行病学研究和全基因组测序对控制诺如病毒相关疫情是必要的。 展开更多
关键词 诺如病毒 gii.2[P16] 肠胃炎 重组 选择压力
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2013-2017年中山市20起诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征分析 被引量:8
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作者 师舞阳 杨淑欢 +2 位作者 谢颖 林金思 吴衍恒 《实用预防医学》 CAS 2020年第12期1464-1467,1482,共5页
目的分析2013-2017年间中山市诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征,为中山市诺如病毒感染疫情防控提供分子生物学实验依据。方法收集2013-2017年间中山市20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情病例标本,采用RT-PCR方法测定诺如病毒VP1... 目的分析2013-2017年间中山市诺如病毒暴发疫情的分子流行病学特征,为中山市诺如病毒感染疫情防控提供分子生物学实验依据。方法收集2013-2017年间中山市20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发疫情病例标本,采用RT-PCR方法测定诺如病毒VP1基因全序列,并对序列进行系统发育分析。结果 20起诺如病毒引起的感染性腹泻暴发主要发生在幼儿园及小学,占疫情总数的80.0%(16/20)。获得了77株病毒的VP1基因全序列, 20起疫情分别由GII.4 Sydney2012(25.0%, 5/20),GII.3(25.0%, 5/20),GII.17(25.0%, 5/20),GII.2(15.0%, 3/20),GII.21(5.0%, 1/20),及GII.6(5.0%,1/20)亚型引起,5起暴发中GII.4 Sydney2012分为两个不同分支。结论 GII.17型为中山市新发现流行毒株,2016年底发现的两起GII.4 Sydney2012区别于以往出现GII.4 Sydney2012,可能为新亚型的重组毒株(GII.P16-GII.4 Sydney2012)。VP1基因序列分析可作为有效的诺如病毒分型工具, RdRp基因分析应作为重要补充以确定毒株的重组变异情况。 展开更多
关键词 诺如病毒 暴发 基因分型 感染性腹泻 gii.17
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2007年中国部分地区猪圆环病毒2型分子流行病学分析 被引量:20
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作者 张建武 庄金山 +2 位作者 刘长龙 王小敏 袁世山 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期2949-2957,共9页
【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列... 【目的】对采集自上海、江西、山东、江苏、河南和湖南等省的257份进行了PCV2的检测,确定中国PCV2感染情况及分子特征。【目的】设计一对针对PCV2ORF2的引物,利用PCR对其进行PCV2基因组的检测,对PCV2阳性的样品,进行了ORF2的克隆、序列测定和分析。【结果】结果显示PCV2阳性率为24.51%(63/257),并能从健康猪群中检测的阳性;各PCV2分离株间ORF2核苷酸序列同源性为84.4%~100%,氨基酸同源性为82.5%~100%,与所属群的不同而不同。【结论】中国有2个群的PCV2毒株在流行,以PCV2b群为主(70.97%,22/31),但也有PCV2a群毒株(29.03%,9/31)的流行,同时PCV2流行的基因型没有明显的地域间差异。部分毒株符合高致病性PCV2的特征,暗示中国已存在高致病性PCV2的流行。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 开放阅读框架2 基因型
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