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小黄鱼gfpt1基因克隆及其对高温胁迫和变形假单胞菌感染的响应
1
作者 刘浩文 刘四芳 +5 位作者 李倩 张天乐 朱家杰 俞晓平 楼宝 刘峰 《渔业科学进展》 北大核心 2026年第1期172-183,共12页
夏季频发的高温以及养殖过程中变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的内脏白点病已成为制约小黄鱼(Larimichthys polyactis)养殖业发展不容忽视的问题。谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶-1(gfpt1)基因是信号转导和应激响应的关键... 夏季频发的高温以及养殖过程中变形假单胞菌(Pseudomonas plecoglossicida)引起的内脏白点病已成为制约小黄鱼(Larimichthys polyactis)养殖业发展不容忽视的问题。谷氨酰胺果糖-6-磷酸转氨酶-1(gfpt1)基因是信号转导和应激响应的关键调节因子。为探究gfpt1基因在小黄鱼对高温胁迫和变形假单胞菌感染过程中的响应特征,本研究首次克隆获得小黄鱼gfpt1基因的CDS序列,序列长度为2049 bp,编码682个氨基酸,含有PLN02981 super family保守结构域,同源序列比对发现,其与大黄鱼(Pseudosciaena crocea)相似性最高,达99.37%。荧光定量检测发现,gfpt1基因在各组织中广泛表达,但表达量具有组织差异性,肝脏中的表达量显著高于其他组织。通过荧光定量PCR技术检测32℃高温胁迫和变形假单胞菌感染不同时间小黄鱼肝脏中gfpt1表达水平变化发现,高温胁迫导致gfpt1表达量显著增加,随着高温处理时间的延长,基因表达量呈先升高后降低的变化趋势,6 h时的表达量最高;变形假单胞菌感染同样导致gfpt1表达量发生显著变化,感染后6 h的基因表达量显著低于对照组,随着感染时间的延长,表达量逐渐上升,48 h时达到最高,此时显著高于对照组,随后表达量逐渐降低,至96 h时,其表达量显著低于对照组,说明gfpt1在小黄鱼响应高温胁迫和病原菌侵染过程中发挥了一定的调节作用,但二者响应机制存在明显不同。本研究揭示了小黄鱼肝脏中gfpt1在响应高温胁迫和变形假单胞菌感染的表达变化特征,研究结果为深入解析鱼类响应高温胁迫、病原菌感染等过程中的生理调节机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 小黄鱼 gfpt1基因 克隆 高温胁迫 变形假单胞菌
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兔抗人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)多克隆抗体的制备及应用 被引量：3
2
作者 吴少春 刘林 +1 位作者 高艳春 顾玉超 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期651-656,共6页
目的 制备特异性识别人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)的兔多克隆抗体。方法 通过比对GFPT1及其高度同源的同工酶GFPT2的蛋白质序列,针对GFPT1的特异性序列设计并合成2个多肽,多肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联作为抗原免疫新西兰大... 目的 制备特异性识别人谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(GFPT1)的兔多克隆抗体。方法 通过比对GFPT1及其高度同源的同工酶GFPT2的蛋白质序列,针对GFPT1的特异性序列设计并合成2个多肽,多肽与钥孔戚血蓝蛋白(KLH)偶联作为抗原免疫新西兰大白兔,3次加强免疫后得到抗血清,采用ELISA检测抗血清效价。构建GFPT1和GFPT2的大肠杆菌表达载体,诱导表达获得GFPT1和GFPT2重组蛋白,通过Western blot法检测GFPT1和GFPT2重组蛋白以验证抗血清的特异性、免疫荧光细胞化学染色检测786-O细胞GFPT1的表达验证获得的抗血清能否识别内源性表达的GFPT1。结果 获得了特异性识别GFPT1的多克隆抗体,效价高达1∶1 458 000,该抗体可用于Western blot法以及免疫荧光细胞化学染色。结论 成功制备了特异性识别GFPT1的兔多克隆抗体。 展开更多
关键词 谷氨酰胺果糖6磷酸氨基转移酶1(gfpt1) 重组蛋白 多克隆抗体
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GFPT1基因新突变致先天性肌无力综合征1例及家系报告
3
作者 李茂华 周楷 《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期168-172,共5页
报告1例谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶1(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase 1,GFPT1)基因复合杂合变异致先天性肌无力综合征患者及家系的临床资料。先证者为14岁男性,表现为运动后易疲劳、肢带型肌无力。基因检测发现患者G... 报告1例谷氨酰胺-果糖-6-磷酸转氨酶1(glutamine-fructose-6-phosphate aminotransferase 1,GFPT1)基因复合杂合变异致先天性肌无力综合征患者及家系的临床资料。先证者为14岁男性,表现为运动后易疲劳、肢带型肌无力。基因检测发现患者GFPT1存在2个复合杂合突变。患者外公、母亲存在5-20号外显子杂合缺失,为新发现突变位点;患者爷爷、父亲存在c.331C>T点突变,为已报道的突变位点。予溴吡斯的明和沙丁胺醇治疗后肌无力症状稍好转。GFPT1相关先天性肌无力综合征可出现与重症肌无力相似的肌无力、运动不耐受,重复电刺激可见低频递减,患者可能没有典型肌电图及肌活检改变,胆碱酯酶抑制剂治疗有一定效果,早期行遗传学检测具有重要意义。 展开更多
关键词 肌无力综合征 gfpt1基因 重症肌无力 胆碱酯酶抑制剂
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PPP2R2A在乳腺癌细胞中结合GFPT2并导致其去磷酸化 被引量：2
4
作者 李笑荣 张进 马端 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期956-963,共8页
PPP2R2A是PP2A磷酸酶的调控亚基之一,以往的研究报道显示,PPP2R2A可促进肿瘤细胞生存和生长。本研究通过串联亲和纯化联合HPLC-Chip-ESI/MS/MS筛选PPP2R2A的相互作用蛋白质,分析结果显示,L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶1(Glutamine-fru... PPP2R2A是PP2A磷酸酶的调控亚基之一,以往的研究报道显示,PPP2R2A可促进肿瘤细胞生存和生长。本研究通过串联亲和纯化联合HPLC-Chip-ESI/MS/MS筛选PPP2R2A的相互作用蛋白质,分析结果显示,L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶1(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 1,GFPT1)和L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶2(Glutamine-fructose-6-phosphate transaminase 2,GFPT2)是PPP2R2A可能的结合蛋白。通过免疫荧光共定位、GST Pull-down和免疫共沉淀等方法,进一步确认了PPP2R2A和GFPT1及GFPT2的相互结合。通过shRNA下调PPP2R2A后,GFPT2的磷酸化水平显著增加,但GFPT1的磷酸化水平改变不明显。GFPT2是O-GlcNAC糖基化修饰通路中的一个限速酶,在乳腺癌细胞MDA-MB-231中下调PPP2R2A后,蛋白质O-GlcNAC糖基化修饰水平增加。这些结果表明,PPP2R2A可直接结合GFPT2,并导致其去磷酸化,进而影响细胞内O-GlcNAC糖基化修饰。 展开更多
关键词 PPP2R2A L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶1 L-谷氨酰胺-D-果糖-6-磷酸转氨酶2 O-GlcNAC糖基化
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