文摘[目的]测定中药复方金思维肠吸收液的有效成分并进行网络药理学分析,探究其治疗阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease,AD)的作用机制并进行实验验证。[方法]采用高效液相质谱色谱联合(high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry,HPLC-MS)法测定金思维肠吸收液和金思维原液的共有成分,使用中药系统药理学数据库与分析平台(Traditional Chinese Medicine Systems Pharmacology Database and Analysis Platform,TCMSP)对共有成分进行筛选,使用SWISS数据库查询药物作用靶点;使用DrugBank、OMIM、GeneCards、DisGeNET、TTD数据库查询AD靶点。对药物靶点与疾病靶点进行韦恩分析,得到金思维治疗AD的关键靶点。使用STRING数据库进行蛋白互作(protein-protein interaction,PPI)分析,使用Cytoscape 3.7.2软件绘制PPI网络图。将关键靶点导入Metascape平台,进行基因本体(gene ontology,GO)分析和京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)通路分析,使用Cytoscape 3.7.2软件将相关网络关系可视化。最后依据网络药理学分析结果,选择磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(phosphoinositide 3-kinase/protein kinase B,PI3K/AKT)信号通路进行细胞实验验证。[结果]共筛选出符合条件的活性成分73个,其中延胡索甲素、甜橙黄酮、黄芩黄酮Ⅱ、甘草素、黄藤素为关联靶点数量排名前5的活性成分,即金思维肠吸收液治疗AD的关键成分。PPI网络分析提示,AKT1等为治疗AD的核心靶点。KEGG分析提示,金思维肠吸收液治疗AD可能涉及PI3K/AKT信号通路、钙信号通路、环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)信号通路等。细胞实验结果表明,模型组磷酸化AKT(phosphorylated-AKT,p-AKT)蛋白表达较正常组显著降低(P<0.01);模型组磷酸化糖原合酶激酶-3β/糖原合酶激酶-3β(phosphorylated-glycogen synthase kinse-3β/glycogen synthase kinse-3β,p-GSK-3β/GSK-3β)比值较正常组显著降低(P<0.05),金思维肠吸收液中、高剂量组较模型组显著升高(P<0.0001,P<0.001),通路抑制剂组与模型组差异无统计学意义(P>0.05)。[结论]金思维肠吸收液通过多途径、多靶点治疗AD,其中对PI3K/AKT信号通路及其下游靶点的调节是其发挥作用的关键。
