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柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56 蛋白的原核表达及其多克隆抗体的制备与鉴定
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作者 姜明慧 宋勇乐 +9 位作者 苏观志 陈庆彪 李娟 戚南山 廖申权 吕敏娜 林栩慧 蔡海明 张旭 孙铭飞 《广东畜牧兽医科技》 2025年第3期1-7,共7页
为研究柔嫩艾美耳球虫GAM56蛋白的生物学功能,以柔嫩艾美耳球虫广东株配子体cDNA为模板,克隆该分离虫株的gam56基因编码序列。构建pET⁃B2M⁃GAM56截短表达载体,利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达GAM56蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备G... 为研究柔嫩艾美耳球虫GAM56蛋白的生物学功能,以柔嫩艾美耳球虫广东株配子体cDNA为模板,克隆该分离虫株的gam56基因编码序列。构建pET⁃B2M⁃GAM56截短表达载体,利用大肠杆菌表达系统通过IPTG诱导表达GAM56蛋白,纯化后免疫BALB/c小鼠制备GAM56多克隆抗体。通过间接ELISA和Western blot分析抗体的效价和特异性;收集E.tenella(GD)配子体阶段样品,利用GAM56多克隆抗体进行免疫荧光检测以评价其应用效果。结果显示:相比E.tenella(Houghton)参考虫株,E.tenella(GD)的gam56基因存在末端部分片段的缺失,CDS序列1077 bp,可编码358个氨基酸;预测蛋白大小41.3 kDa。GAM56保守区域截短原核表达蛋白主要以包涵体形式存在。间接免疫荧光分析显示该抗体能够特异性识别配子体阶段的GAM56蛋白。该研究为进一步解析柔嫩艾美耳球虫广东株GAM56生物学功能提供了材料,为艾美耳球虫有性发育相关蛋白的功能研究与机制解析奠定基础。 展开更多
关键词 柔嫩艾美耳球虫 gam56 原核表达 多克隆抗体
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巨型艾美球虫gam56基因的截短原核表达及其产物的免疫保护效果 被引量:3
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作者 许金俊 姜慧婕 +3 位作者 陶建平 彭昊 张艳 孙文瑶 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期892-897,共6页
为评价gam56基因重组表达产物作为亚单位疫苗预防鸡巨型艾美球虫(E.maxima)感染的效果,以E.maximaNT株配子体总RNA为模板,RT-PCR扩增和克隆gam56基因,选择该基因两段含丰富抗原表位的编码区片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1在大肠杆菌中... 为评价gam56基因重组表达产物作为亚单位疫苗预防鸡巨型艾美球虫(E.maxima)感染的效果,以E.maximaNT株配子体总RNA为模板,RT-PCR扩增和克隆gam56基因,选择该基因两段含丰富抗原表位的编码区片段,利用原核表达载体pGEX-6P-1在大肠杆菌中进行截短表达。以可溶性的GST-gam56-2融合蛋白为免疫原,设立高、中、低(1.0mg、0.5mg、0.25mg)3个剂量,单独或使用弗氏完全佐剂,于5d、12d和19d对雏鸡进行3次免疫,26d用5×104个E.maxima孢子化卵囊进行攻虫,8d后迫杀,对各组的存活率、相对增重率、卵囊减少率、ACI等指标进行统计分析。结果显示:就相对增重率而言各免疫组比未免疫攻毒组的高27.6%以上,而各免疫组之间差异不显著(p>0.05);就卵囊减少率指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度减少,但是均小于75%;就ACI指标而言,各免疫组较未免疫攻毒组均有不同程度增加,以中剂量蛋白佐剂组为最高。GST-gam56-2融合蛋白对于E.maxima感染具有一定的免疫保护效力。 展开更多
关键词 巨型艾美球虫 gam56基因 重组蛋白 保护效果
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鸡堆型艾美耳球虫gam56基因的克隆及其表达产物的免疫原性分析 被引量:1
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作者 华恩玉 朱玉 +5 位作者 汪飞燕 孔令明 刘丹丹 候照峰 许金俊 陶建平 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第12期1535-1541,共7页
为了研究堆型艾美耳球虫gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球虫(扬州株)卵囊DNA,应用PCR扩增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy载体;测序、密码子优化后连接至pET-28a质粒,构建pET-28aEagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序... 为了研究堆型艾美耳球虫gam56基因的功能,提取堆型艾美耳球虫(扬州株)卵囊DNA,应用PCR扩增gam56基因,克隆至pGEM-T-Easy载体;测序、密码子优化后连接至pET-28a质粒,构建pET-28aEagam56表达载体,转化至大肠杆菌BL21;重组菌经酶切和测序鉴定后诱导表达,对表达产物进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果显示:gam56基因全长1 323 bp,编码440个氨基酸;重组蛋白大小约49 ku,以可溶蛋白形式为多,能被组氨酸单抗特异性识别;该重组蛋白能被小鼠抗重组蛋白多克隆抗体以及鸡抗堆型艾美耳球虫、鸡抗毒害艾美耳球虫、鸡抗巨型艾美耳球虫和鸡抗柔嫩艾美耳球虫的阳性血清特异性识别。本研究结果为进一步探析堆型艾美耳球虫gam56基因功能与研制鸡球虫病基因工程疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 堆型艾美耳球虫 gam56基因 克隆 原核表达 免疫原性分析
原文传递
Anti-Recombinant Gametocyte 56 Protein IgY Protected Chickens from Homologous Coccidian Infection 被引量:2
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作者 DING Jun LIU Qiao-rong +2 位作者 HAN Jin-peng QIAN Wei-feng LIU Qun 《Journal of Integrative Agriculture》 SCIE CAS CSCD 2012年第10期1721-1728,共8页
Coccidiosis is caused by intra-cellular infection of Eimeria spp., which goes through a complex life cycle in the intestinal mucosa of infected hosts. Specific immunoglobulins (IgY) could be produced in egg yolk by ... Coccidiosis is caused by intra-cellular infection of Eimeria spp., which goes through a complex life cycle in the intestinal mucosa of infected hosts. Specific immunoglobulins (IgY) could be produced in egg yolk by immunizing hens with specific antigens. In the present study, we cloned the E. maxima gain56 gene, expressed the GST-GAM56 fusion protein and raised IgY to GST-GAM56 in hens. The anti-GST-GAM56 IgY antibody was isolated and used to treat chickens infected with E. maxima oocysts. Intramuscular injection of the antibodies provided minimal protection against parasite infection. However, oral dosing of the IgY 3 or 5 d after oocyst inoculation significantly improved body weight gain, reduced oocyst output and intestinal lesion score were reduced at 3 or 5 d after oocyst challenging, compared to the untreated control group. Our findings suggest that the IgY to gam56 could be an effective prophylactic or therapeutic agent against E. maxima infection in chickens and should have a practical application value. 展开更多
关键词 Eimeria maxima recombinant GST-gam56 IGY therapeutic agent
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