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Gal80^(ts)与Gal4组合灵敏控制果蝇中UAS转基因的表达水平
被引量:
3
1
作者
李开霞
马恩波
+2 位作者
张建珍
赵一丹
张徐波
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期481-488,共8页
【目的】Gal80^(ts)与Gal4组合驱动UAS转基因表达是黑腹果蝇Drosophila melanogaster研究中常用的转基因过表达遗传学工具,通过温度控制实现对UAS转基因表达的灵活开关。Gal80^(ts)是一种温度敏感型蛋白,低温下(18℃)与Gal4蛋白结合并...
【目的】Gal80^(ts)与Gal4组合驱动UAS转基因表达是黑腹果蝇Drosophila melanogaster研究中常用的转基因过表达遗传学工具,通过温度控制实现对UAS转基因表达的灵活开关。Gal80^(ts)是一种温度敏感型蛋白,低温下(18℃)与Gal4蛋白结合并抑制其转录活力,高温下(29℃)解除对Gal4的抑制,从而允许Gal4结合UAS位点,启动UAS转基因的表达。但是从18~29℃的开关只能强烈过表达UAS转基因,而不能灵活调控转基因的表达水平。本实验系统研究一系列温度下转基因的表达水平,从而实现该体系对转基因的表达水平的灵活控制。【方法】以果蝇翅芽这一常用器官组织为研究模型,以2种Gal4品系(dpp-Gal4和en-Gal4,分别由decapentaplgic和engrailed基因的启动子驱动)分别与tub-Gal80^(ts)(微管蛋白基因tubulin启动子驱动)基因重组后,再分别与UAS-wg(wingless)转基因品系杂交;在一系列温度(18,25,27.5,28,28.5和30℃)下进行子代幼虫培养,通过免疫组化染色揭示并量化分析转基因wg在3龄幼虫翅芽上的表达水平。【结果】18~25℃培养条件下,Gal80^(ts)与Gal4组合系统中的UAS转基因不能表达;30℃时培养,转基因强烈地过表达;在25~30℃区间内,随着温度升高,转基因表达水平逐渐上升。【结论】在25~30℃之间的温度调控可以实现对Gal80^(ts)与Gal4组合系统中的UAS转基因表达水平的调控。本研究结果对调控转基因表达程度有重要价值。
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关键词
黑腹果蝇
Gal4/UAS系统
gal80
ts
UAS转基因
基因表达水平
荧光强度
原文传递
Lac^+酿酒酵母工程菌中GAL80基因敲除对乳糖利用的影响
被引量:
1
2
作者
邹静
郭学武
+3 位作者
申童
张翠英
董建
肖冬光
《酿酒科技》
北大核心
2013年第12期36-41,共6页
构建1株可以高效利用乳糖的酿酒酵母工程菌株,以期实现利用乳清生产燃料乙醇,即为燃料乙醇生产提供了新的碳源,又解决了乳清的污染问题。克隆了AY5的GAL80基因,构建敲除质粒pUC-GABCUP。以该质粒为模板PCR扩增同源重组片段GA-CUP1-GB,以...
构建1株可以高效利用乳糖的酿酒酵母工程菌株,以期实现利用乳清生产燃料乙醇,即为燃料乙醇生产提供了新的碳源,又解决了乳清的污染问题。克隆了AY5的GAL80基因,构建敲除质粒pUC-GABCUP。以该质粒为模板PCR扩增同源重组片段GA-CUP1-GB,以Lac+酿酒酵母AY51024M为受体菌株,利用同源重组的方法敲除受体菌株中的GAL80基因,得到1株既解除Gal80抑制又能利用乳糖的菌株AY51024M-G。结果表明,转化子半乳糖利用速率为1.089 g/L·h,较AY51024M提高23.5%;乳糖的发酵周期为60 h,较亲本缩短16.7%;乳糖利用速率为0.852 g/L·h,较AY51024M提高23%;乙醇对乳糖得率为理论得率的89.35%。在Lac+酿酒酵母工程菌中,乳糖代谢与半乳糖代谢密切相关,敲除GAL80有助于提高乳糖的代谢速率,缩短发酵周期。
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关键词
乳糖
半乳糖
Lac+酿酒酵母
gal80
在线阅读
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职称材料
利用基因工程提高酿酒酵母半乳糖代谢
被引量:
1
3
作者
邹静
孟军
+1 位作者
张建才
郭硕
《河北科技师范学院学报》
CAS
2016年第4期14-22,共9页
为了提高酿酒酵母半乳糖利用速率,减弱葡萄糖阻遏半乳糖代谢,研究了负代谢调控基因GAL80,GAL6以及MIG1基因对半乳糖代谢的影响。通过重复利用loxp-Kan MX-loxp抗性基因对GAL80,GAL6以及MIG1基因进行单敲除、双敲除及三敲除,共构建了7株...
为了提高酿酒酵母半乳糖利用速率,减弱葡萄糖阻遏半乳糖代谢,研究了负代谢调控基因GAL80,GAL6以及MIG1基因对半乳糖代谢的影响。通过重复利用loxp-Kan MX-loxp抗性基因对GAL80,GAL6以及MIG1基因进行单敲除、双敲除及三敲除,共构建了7株工程菌株。结果表明,7株工程菌株的半乳糖利用速率、乙醇产率均加快。其中,GAL80和MIG1双敲除菌株FY-501α的半乳糖代谢速率为0.916 g·(L·h)^(-1),较亲本提高44.71%,乙醇产率为0.329 g·(L·h)^(-1),较亲本提高46.22%,而在FY-501α基础上继续敲除GAL6得到GY-501α,其半乳糖代谢速率以及乙醇产率均未见提高。7株菌的葡萄糖阻遏效应也得到减弱,其中FY-501α的葡萄糖阻遏效应较亲本减弱42.11%,其次为EY-502α,FY-502α和FY-503α,减弱31.57%。阻断半乳糖代谢途径的负调控基因可以加速半乳糖代谢、减弱葡萄糖阻遏效应。
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关键词
GAL基因
半乳糖代谢
葡萄糖阻遏
MIG1
gal80
在线阅读
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职称材料
酵母转录因子Gal4研究进展
被引量:
4
4
作者
朱凯川
张建华
刘士德
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期81-85,共5页
胁迫应答基因的转录激活是细胞应答胁迫作用的关键步骤。转录激活因子与启动子顺式作用元件结合是胁迫应答基因转录激活的关键环节。进化保守的Gal4是半乳糖代谢相关基因的转录激活因子。酵母Gal4通过其N端的DNA结合结构域识别并结合启...
胁迫应答基因的转录激活是细胞应答胁迫作用的关键步骤。转录激活因子与启动子顺式作用元件结合是胁迫应答基因转录激活的关键环节。进化保守的Gal4是半乳糖代谢相关基因的转录激活因子。酵母Gal4通过其N端的DNA结合结构域识别并结合启动子UAS,通过其C端的激活结构域与转录因子作用,起始RNA聚合酶Ⅱ复合体的组装和转录。该过程不仅受转录调控因子Gal80和Gal3的调节,还与Gal4二聚体的形成有关。概述了酵母半乳糖代谢相关基因转录激活因子Gal4的研究进展。
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关键词
Gal4
gal80
Gal3
UAS
转录激活
原文传递
题名
Gal80^(ts)与Gal4组合灵敏控制果蝇中UAS转基因的表达水平
被引量:
3
1
作者
李开霞
马恩波
张建珍
赵一丹
张徐波
机构
山西大学应用生物学研究所
山西大学生命科学学院
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016年第5期481-488,共8页
基金
国家自然科学基金项目(31402021)
文摘
【目的】Gal80^(ts)与Gal4组合驱动UAS转基因表达是黑腹果蝇Drosophila melanogaster研究中常用的转基因过表达遗传学工具,通过温度控制实现对UAS转基因表达的灵活开关。Gal80^(ts)是一种温度敏感型蛋白,低温下(18℃)与Gal4蛋白结合并抑制其转录活力,高温下(29℃)解除对Gal4的抑制,从而允许Gal4结合UAS位点,启动UAS转基因的表达。但是从18~29℃的开关只能强烈过表达UAS转基因,而不能灵活调控转基因的表达水平。本实验系统研究一系列温度下转基因的表达水平,从而实现该体系对转基因的表达水平的灵活控制。【方法】以果蝇翅芽这一常用器官组织为研究模型,以2种Gal4品系(dpp-Gal4和en-Gal4,分别由decapentaplgic和engrailed基因的启动子驱动)分别与tub-Gal80^(ts)(微管蛋白基因tubulin启动子驱动)基因重组后,再分别与UAS-wg(wingless)转基因品系杂交;在一系列温度(18,25,27.5,28,28.5和30℃)下进行子代幼虫培养,通过免疫组化染色揭示并量化分析转基因wg在3龄幼虫翅芽上的表达水平。【结果】18~25℃培养条件下,Gal80^(ts)与Gal4组合系统中的UAS转基因不能表达;30℃时培养,转基因强烈地过表达;在25~30℃区间内,随着温度升高,转基因表达水平逐渐上升。【结论】在25~30℃之间的温度调控可以实现对Gal80^(ts)与Gal4组合系统中的UAS转基因表达水平的调控。本研究结果对调控转基因表达程度有重要价值。
关键词
黑腹果蝇
Gal4/UAS系统
gal80
ts
UAS转基因
基因表达水平
荧光强度
Keywords
Drosophila melanogaster
GAL4/UAS system
gal80
ts
UAS transgene
gene expression level
fluorescence intensity
分类号
Q966 [生物学—昆虫学]
原文传递
题名
Lac^+酿酒酵母工程菌中GAL80基因敲除对乳糖利用的影响
被引量:
1
2
作者
邹静
郭学武
申童
张翠英
董建
肖冬光
机构
工业发酵微生物教育部重点实验室
出处
《酿酒科技》
北大核心
2013年第12期36-41,共6页
基金
十二五农村领域国家科技计划(No.2012AA101805)
天津市应用基础研究计划项目(No.09JCZDJC17900)
天津科技大学基金(201201 12)资助项目
文摘
构建1株可以高效利用乳糖的酿酒酵母工程菌株,以期实现利用乳清生产燃料乙醇,即为燃料乙醇生产提供了新的碳源,又解决了乳清的污染问题。克隆了AY5的GAL80基因,构建敲除质粒pUC-GABCUP。以该质粒为模板PCR扩增同源重组片段GA-CUP1-GB,以Lac+酿酒酵母AY51024M为受体菌株,利用同源重组的方法敲除受体菌株中的GAL80基因,得到1株既解除Gal80抑制又能利用乳糖的菌株AY51024M-G。结果表明,转化子半乳糖利用速率为1.089 g/L·h,较AY51024M提高23.5%;乳糖的发酵周期为60 h,较亲本缩短16.7%;乳糖利用速率为0.852 g/L·h,较AY51024M提高23%;乙醇对乳糖得率为理论得率的89.35%。在Lac+酿酒酵母工程菌中,乳糖代谢与半乳糖代谢密切相关,敲除GAL80有助于提高乳糖的代谢速率,缩短发酵周期。
关键词
乳糖
半乳糖
Lac+酿酒酵母
gal80
Keywords
lactose
galactose
Lac+ S. Cerevisiae
gal80
分类号
TS261.1 [轻工技术与工程—发酵工程]
在线阅读
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职称材料
题名
利用基因工程提高酿酒酵母半乳糖代谢
被引量:
1
3
作者
邹静
孟军
张建才
郭硕
机构
河北科技师范学院食品科技学院
出处
《河北科技师范学院学报》
CAS
2016年第4期14-22,共9页
基金
河北科技师范学院博士启动基金项目资助项目(项目编号:2013YB015)
文摘
为了提高酿酒酵母半乳糖利用速率,减弱葡萄糖阻遏半乳糖代谢,研究了负代谢调控基因GAL80,GAL6以及MIG1基因对半乳糖代谢的影响。通过重复利用loxp-Kan MX-loxp抗性基因对GAL80,GAL6以及MIG1基因进行单敲除、双敲除及三敲除,共构建了7株工程菌株。结果表明,7株工程菌株的半乳糖利用速率、乙醇产率均加快。其中,GAL80和MIG1双敲除菌株FY-501α的半乳糖代谢速率为0.916 g·(L·h)^(-1),较亲本提高44.71%,乙醇产率为0.329 g·(L·h)^(-1),较亲本提高46.22%,而在FY-501α基础上继续敲除GAL6得到GY-501α,其半乳糖代谢速率以及乙醇产率均未见提高。7株菌的葡萄糖阻遏效应也得到减弱,其中FY-501α的葡萄糖阻遏效应较亲本减弱42.11%,其次为EY-502α,FY-502α和FY-503α,减弱31.57%。阻断半乳糖代谢途径的负调控基因可以加速半乳糖代谢、减弱葡萄糖阻遏效应。
关键词
GAL基因
半乳糖代谢
葡萄糖阻遏
MIG1
gal80
Keywords
GAL genes
galactose metabolism
glucose repression
MIG1
GALSO
分类号
S332.5 [农业科学—作物遗传育种]
在线阅读
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职称材料
题名
酵母转录因子Gal4研究进展
被引量:
4
4
作者
朱凯川
张建华
刘士德
机构
深圳大学生命科学学院
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第1期81-85,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(31070043)
文摘
胁迫应答基因的转录激活是细胞应答胁迫作用的关键步骤。转录激活因子与启动子顺式作用元件结合是胁迫应答基因转录激活的关键环节。进化保守的Gal4是半乳糖代谢相关基因的转录激活因子。酵母Gal4通过其N端的DNA结合结构域识别并结合启动子UAS,通过其C端的激活结构域与转录因子作用,起始RNA聚合酶Ⅱ复合体的组装和转录。该过程不仅受转录调控因子Gal80和Gal3的调节,还与Gal4二聚体的形成有关。概述了酵母半乳糖代谢相关基因转录激活因子Gal4的研究进展。
关键词
Gal4
gal80
Gal3
UAS
转录激活
Keywords
Gal4;
gal80
; Gal3; UAS; Transcriptional; activation;
分类号
Q344.13 [生物学—遗传学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
Gal80^(ts)与Gal4组合灵敏控制果蝇中UAS转基因的表达水平
李开霞
马恩波
张建珍
赵一丹
张徐波
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2016
3
原文传递
2
Lac^+酿酒酵母工程菌中GAL80基因敲除对乳糖利用的影响
邹静
郭学武
申童
张翠英
董建
肖冬光
《酿酒科技》
北大核心
2013
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
利用基因工程提高酿酒酵母半乳糖代谢
邹静
孟军
张建才
郭硕
《河北科技师范学院学报》
CAS
2016
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
酵母转录因子Gal4研究进展
朱凯川
张建华
刘士德
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2011
4
原文传递
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