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GA2ox1氧化酶基因的克隆及原核表达 被引量：7
1
作者 常丽 赵小英 +3 位作者 郭明 林建中 李秀山 刘选明 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第6期1099-1104,共6页
采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pD-EST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化。结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h。蛋... 采用RT-PCR从拟南芥基因组中克隆到GA2ox1基因,通过Gateway克隆技术构建原核重组表达载体pD-EST17-GA2ox1,并转化大肠杆菌BL(21)star,对蛋白原核表达条件进行优化。结果表明,最佳表达条件为温度30℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导6 h。蛋白表达形式为包涵体,与Biotech对GA2ox1基因在大肠杆菌中的表达情况推测的结论一致。重组蛋白分子质量约为40 kD,经Ni Sepharose亲和层析柱纯化和Western blot鉴定得纯度90%以上的GA2ox1重组蛋白。研究结果为GA2ox1抗体制备及蛋白功能的进一步研究奠定了基础。 展开更多
关键词 ga2ox1基因 Gateway克隆 原核表达 纯化 WESTERN BLOT
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薄壳山核桃赤霉素氧化酶基因CiGA2ox1克隆与功能分析 被引量：3
2
作者 魏晶晶 胡恒康 +10 位作者 张佳琦 严泽埔 王正加 李岩 王克涛 张瑞 梁婧 黄坚钦 黄有军 娄和强 张启香 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1368-1381,共14页
【目的】从薄壳山核桃(Carya illinoinensis)中分离克隆赤霉素氧化酶CiGA2ox1基因,通过遗传转化及功能验证研究该基因对薄壳山核桃生长发育的影响,为薄壳山核桃新品种选育提供理论参考。【方法】采用PCR扩增技术从薄壳山核桃体胚中克隆... 【目的】从薄壳山核桃(Carya illinoinensis)中分离克隆赤霉素氧化酶CiGA2ox1基因,通过遗传转化及功能验证研究该基因对薄壳山核桃生长发育的影响,为薄壳山核桃新品种选育提供理论参考。【方法】采用PCR扩增技术从薄壳山核桃体胚中克隆出CiGA2ox1基因全长序列,分析其序列和表达特性。通过亚细胞定位观察其在烟草中发挥功能的场所。构建35S::CiGA2ox1::GFP过表达载体,利用农杆菌介导法将35S::CiGA2ox1::GFP过表达载体转化到薄壳山核桃体胚中,获得CiGA2ox1过表达株系。通过qRT-PCR方法分析转基因薄壳山核桃中相关基因的表达水平,采用丙酮乙醇提取方法测定再生植株中叶绿素含量。【结果】薄壳山核桃CiGA2ox1基因全长1053 bp,编码350个氨基酸。CiGA2ox1蛋白含有1个2OG-FeⅡ-Oxy保守结构域和3个Fe^(2+)结合位点。序列系统进化分类结果表明,CiGA2ox1基因与核桃JrGA2ox1基因亲缘关系最近。烟草叶片亚细胞定位显示,CiGA2ox1蛋白定位于细胞核和细胞膜中。对薄壳山核桃进行遗传转化后经荧光检测及PCR验证表明,35S::CiGA2ox1::GFP过表达载体成功转入薄壳山核桃体胚以及再生植株中。与野生型相比,过表达株系CiGA2ox1 mRNA相对表达量极显著增加,节间极显著缩短,呈半矮化表型,叶片长宽比降低,叶色深绿,叶绿素含量极显著提高。【结论】薄壳山核桃CiGA2ox1基因对植株高度具有负调节作用,对叶绿素含量具有正调节作用。研究结果为开发新的半矮化薄壳山核桃突变体提供有价值的参考数据。 展开更多
关键词 薄壳山核桃 Ciga2ox1 亚细胞定位 植株高度 叶绿素含量
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巴西蕉和超级矮蕉中MaGA2ox1基因的克隆和表达模式分析
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作者 杨医境 程志号 +3 位作者 郭素霞 孙长君 王贤智 吴琼 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第6期1834-1841,共8页
为了培育抗倒伏矮秆香蕉,本研究以常规栽培种巴西蕉(Musa spp. Baxi, BX)和超级矮蕉(super dwarf cavendish, SDC)为材料,对二者GA2ox基因进行克隆、荧光定量表达和烟草亚细胞定位分析发现,该基因cDNA全长990 bp,编码329个氨基酸,其编... 为了培育抗倒伏矮秆香蕉,本研究以常规栽培种巴西蕉(Musa spp. Baxi, BX)和超级矮蕉(super dwarf cavendish, SDC)为材料,对二者GA2ox基因进行克隆、荧光定量表达和烟草亚细胞定位分析发现,该基因cDNA全长990 bp,编码329个氨基酸,其编码蛋白的氨基酸序列在这两种材料中完全一致;蛋白分子量为36.4 k D,等电点为6.27,无跨膜区和信号肽;MaGA2ox1基因所合成的蛋白质序列与椰子、水稻、拟南芥的亲缘关系最为密切;该基因定位于在细胞膜和细胞核中;五叶一心期,巴西蕉的根、叶片、心叶等组织中MaGA2ox1基因表达均高于SDC;十叶一心期,巴西蕉的老叶和根组织中的MaGA2ox1基因表达量高于SDC,在嫩叶和心叶组织中MaGA2ox1基因表达量低于SDC,两时期MaGA2ox1基因的总组织表达量巴西蕉高于SDC。本研究为解析香蕉形态建成过程中GA2ox氧化酶的调控机制提供一定的参考。 展开更多
关键词 香蕉 ga2ox1 系统进化树 亚细胞定位 表达模式分析
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