JAK2/p-JAK2在ALS-SOD1-G93A转基因小鼠发病及进展中的表达

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作者 齐银矿 文岚 +2 位作者 余建萍 李堃毅 刘勇 《中南医学科学杂志》 2025年第2期221-225,共5页

目的 观察酪氨酸激酶2(JAK2)/磷酸化JAK2(p-JAK2)在肌萎缩侧索硬化(ALS)-超氧化物歧化酶1(SOD1)-G93A转基因小鼠发病及进展中的作用。方法 构建带有人类SOD1突变基因的ALS-SOD1-G93A转基因小鼠。用运动缺陷评分系统评价小鼠运动功能,观... 目的 观察酪氨酸激酶2(JAK2)/磷酸化JAK2(p-JAK2)在肌萎缩侧索硬化(ALS)-超氧化物歧化酶1(SOD1)-G93A转基因小鼠发病及进展中的作用。方法 构建带有人类SOD1突变基因的ALS-SOD1-G93A转基因小鼠。用运动缺陷评分系统评价小鼠运动功能,观察小鼠行为学,然后随机取30、60、90天日龄、ALS发病期(onset)、终末期ALS-SOD1-G93A转基因小鼠及130天日龄非转基因小鼠(non-Tg)各6只,分别为30天组、60天组、90天组、onset组、终末期组及non-Tg组。取各组小鼠脊髓腰膨大部,利用Western blotting和免疫组织化学实验观察JAK2、p-JAK2蛋白表达水平。结果 JAK2在ALS-SOD1-G93A转基因小鼠各时期和non-Tg小鼠脊髓腰膨大部中阳性表达均较弱,其中,30天组、60天组、90天组可见具有细胞形态的弱阳性表达,onset组、终末期组表达略增多;non-Tg组、30天组、60天组、90天组p-JAK2阳性表达较弱,主要集中在脊髓前角灰质的运动神经元胞质,但30天组、60天组、90天组偶见呈p-JAK2强阳性表达的胶质细胞,并累及白质,随小鼠日龄增加呈p-JAK2强阳性表达的胶质细胞数量增多,onset组、终末期组p-JAK2阳性表达于胶质细胞且明显增强,广泛累及腰髓灰质和白质。Western blotting结果显示,终末期组JAK2、p-JAK2蛋白表达水平较non-Tg组、30天组、60天组明显增高(P<0.05)。结论 在ALS-SOD1-G93A转基因小鼠发病过程中,JAK2、p-JAK2表达显著上调,p-JAK2主要表达在发病后ALS-SOD1-G93A转基因小鼠增生的胶质细胞,提示JAK2/p-JAK2在ALS发病机制中具有重要作用。 展开更多

关键词 ALS JAK2 p-JAK2 SOD1 神经变性疾病 ALS-SOD1-g93a转基因小鼠

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L-3-正丁基苯酞通过上调HO-1改善稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力

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作者 赵旭东 齐雪娇 +2 位作者 张静怡 李奕 于秀军 《脑与神经疾病杂志》 2025年第3期138-143,共6页

目的 探讨不同浓度的L-3-正丁基苯酞(L-NBP)对稳定转染达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)G93A基因(hSOD1-G93A)的神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34 (NSC-34)细胞活力的影响,并探究可能的机制。方法 常规体外培养未转染、稳定转染空载体、人S... 目的 探讨不同浓度的L-3-正丁基苯酞(L-NBP)对稳定转染达人突变超氧化物歧化酶1(SOD1)G93A基因(hSOD1-G93A)的神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34 (NSC-34)细胞活力的影响,并探究可能的机制。方法 常规体外培养未转染、稳定转染空载体、人SOD1野生型(hSOD1-WT)和hSOD1-G93A质粒的NSC-34细胞系;分为空转组(E)、野生组(hSOD1-WT)、突变组(hSOD1-G93A)和实验组(hSOD1-G93A+NBP,hSOD1-WT+NBP),将实验组hSOD1-G93A+NBP按照给药浓度不同分为5μM、10μM、20μM和50μM组。利用显微镜直接观察各组细胞形态变化,通过CCK-8试剂盒检测各组细胞活力,通过乳酸脱氢酯(LDH)试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,并通过蛋白质印迹法检测各组细胞中血红素加氧酶1(HO-1)表达水平。结果 稳定转染质粒后,显微镜下观察到hSOD1-G93A组的NSC34细胞较hSOD1-WT组的细胞胞体变圆,轴突变短,突触减少,而经5μML-NBP处理后,细胞突触增加,轴突延长。hSOD1-G93A组细胞存活率较E组、hSOD1-WT组明显减低,给药的处理细胞存活率明显改善(P<0.05)。hSOD1-G93A组LDH释放量较E组与hSOD1-WT组明显增高,给药的处理LDH释放量减少(P<0.05)。hSOD1-G93A+NBP5组的HO-1表达水平较未给药的处理组(hSOD1-G93A组)明显增高(P<0.05)。结论 用5μM L-NBP干预稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞可以通过降低氧化应激水平,提高细胞存活率,降低细胞损伤。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 L-3-正丁基苯酞 人SOD1-g93a 神经母细胞瘤与脊髓杂交细胞系34细胞 氧化性应激

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发病前后应用丁苯酞对SOD1-G93A转基因鼠影响的比较 被引量：4

3

作者 阴均涛 张红丽 +2 位作者 闫欣 王亚飞 刘亚玲 《中风与神经疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期971-973,共3页

目的观察丁苯酞在发病前后给药对SOD1G93A转基因鼠的影响。方法随机将40只雄性SOD1G93A转基因鼠分为4组,分别为发病前用药组、发病前安慰剂组、发病后用药组和发病后安慰剂组。根据Vercelli A评分判断发病及死亡时间。结果发病前用药具... 目的观察丁苯酞在发病前后给药对SOD1G93A转基因鼠的影响。方法随机将40只雄性SOD1G93A转基因鼠分为4组,分别为发病前用药组、发病前安慰剂组、发病后用药组和发病后安慰剂组。根据Vercelli A评分判断发病及死亡时间。结果发病前用药具有推迟SOD1G93A转基因鼠发病时间和延长生存期的作用,与安慰剂相比,均有显著差异(P<0.05)。发病后用药能延长SOD1G93A转基因鼠生存期,与安慰剂相比,有显著差异(P<0.05)。发病前用药组的生存期与发病后用药组相比,P>0.05,无统计学差异。结论丁苯酞在发病前和发病后给药均具有延长SOD1G93A转基因鼠生存期的作用。 展开更多

关键词 SOD1g93a转基因 丁苯酞 发病时间 生存期

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夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠病程进展和行为学的影响 被引量：10

4

作者 孙远征 孙颖哲 《针灸临床杂志》 2016年第6期74-77,共4页

目的:通过夹脊电针干预ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠,观察其对小鼠病程进展和行为学的影响。方法:本实验以ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠为实验对象,应用美国Jackson实验室提供的引物和方案对ALS-SOD1G^(G93A)转基因小鼠进行PCR鉴定。根据病... 目的:通过夹脊电针干预ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠,观察其对小鼠病程进展和行为学的影响。方法:本实验以ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠为实验对象,应用美国Jackson实验室提供的引物和方案对ALS-SOD1G^(G93A)转基因小鼠进行PCR鉴定。根据病情进展观察小鼠的表型特征。30只ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠,随机分为电针组、手针组和模型组,每组10只(雌性7只,雄性3只),分别给予电针、手针、抓握及捆绑处理,联合应用悬尾试验、称重、转棒实验来观察小鼠的发病时间和生存期。结果:与模型组相比,电针组发病推迟了8天,有显著性差异(P=0.023),手针组发病推迟了5天,但无显著性差异(P>0.05)。与模型组相比,手针组、电针组小鼠生存期分别延长了5天和10天,有显著性差异(分别为P=0.039和P=0.000),与手针组比较,电针组生存期延长了5天,有显著性差异(P=0.042)。与模型组相比,电针治疗能够明显延缓小鼠体重丢失,有显著差异(P<0.05),手针组小鼠体重丢失亦得到一定的延缓,但没有看到显著作用(P>0.05)。与模型组相比,手针组和电针组转棒运动功能明显得到改善,分别延长了1周和2周。结论:夹脊电针能够延迟ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠的发病,延长小鼠的生存期,改善小鼠的运动功能障碍。 展开更多

关键词 夹脊 电针 肌萎缩侧索硬化 生存期 行为学 SOD1^(g93a)转基因小鼠

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夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学的影响 被引量：7

5

作者 郭颖 祝鹏宇 +4 位作者 孙颖哲 孙远征 赵广然 武丹 刘彦麟 《针灸临床杂志》 2017年第5期60-64,89,共6页

目的:观察夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学的影响。方法:本实验以ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠为实验对象,选用经PCR鉴定的ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠24只,按照随机数字表法将小鼠随机分为电针组、手针组和... 目的:观察夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学的影响。方法:本实验以ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠为实验对象,选用经PCR鉴定的ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠24只,按照随机数字表法将小鼠随机分为电针组、手针组和模型组(均n=8只),取同窝野生型小鼠8只作为阴性对照组。于小鼠日龄60天开始干预,电针组针刺双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴,躯干同侧2 Hz电针治疗;手针组针刺双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴;模型组予以捆绑固定,20 min/次,2次/周,共4周;阴性对照组不做任何处置。于小鼠日龄120天时取腰膨大组织进行HE染色和尼氏染色来观察各组小鼠腰髓前角运动神经元胞体及胞核的状态并对运动神经元进行计数,透射电镜观察腰髓前角神经元超微结构变化。结果:HE染色可见模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少,神经细胞结构不清、固缩,胞质胞核染色不清,核固缩,出现空泡状改变;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目增多,神经细胞结构形态有所改善,空泡化减少,且电针组效果优于手针组。尼氏染色可见模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少,非神经细胞增多,病变的神经元出现尼氏体不清,核固缩,细胞体积减小;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目增多,神经细胞结构形态有所改善,能够明显减轻运动神经元的丢失,且电针组效果优于手针组。运动神经元计数:模型组小鼠腰髓前角运动神经元数目明显减少(P<0.01);手针组和电针组小鼠腰髓前角运动神经元数目较模型组增多(P<0.05或P<0.01),且电针组较手针组增多更明显(P<0.05)。透射电镜可见模型组小鼠腰髓前角神经细胞萎缩,细胞膜皱缩,线粒体不同程度肿胀,嵴出现断裂、减少,有些线粒体虽可辨认,但已呈空泡状,核膜凹陷变形或部分破裂,异染色质聚集成块,变性的神经细胞周围可见胶质细胞围绕形成卫星现象;与模型组比较,手针组和电针组小鼠腰髓前角神经细胞超微结构有所改善,且电针组改善更明显。结论:夹脊电针能够改善ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元形态学变化,其效果优于手针治疗。 展开更多

关键词 夹脊 电针 ALS-SOD1^g93a 尼氏染色 电镜

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夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)小鼠腰髓中p38 MAPK/NF-κB信号通路的影响研究 被引量：5

6

作者 苏苏 孙远征 +1 位作者 王仕林 李禹明 《新疆医科大学学报》 CAS 2019年第4期541-546,550,共7页

目的探究p38 MAPK/NF-κB信号通路在夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化-超氧化物歧化酶1^(G93A)(ALS—SOD1^(G93A))转基因小鼠的作用机制。方法选取45只ALS-SOD1^(G93A)转基因阳性雌性小鼠为研究对象,随机分为模型组、手针组、电针组,每组各15... 目的探究p38 MAPK/NF-κB信号通路在夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化-超氧化物歧化酶1^(G93A)(ALS—SOD1^(G93A))转基因小鼠的作用机制。方法选取45只ALS-SOD1^(G93A)转基因阳性雌性小鼠为研究对象,随机分为模型组、手针组、电针组,每组各15只,另取15只同窝野生型雌性小鼠为对照组,小鼠60 d龄时开始实验:对照组、模型组每周给予捆绑固定20 min 2次,手针组给与普通针、电针组采用全能脉冲电疗仪给与电针治疗,每周2次刺激双侧L_(1～2)、L_(5～6)夹脊穴,共治疗4周。120 d取小鼠腰膨大L_(1～6)腰髓,采用尼氏染色、透射电镜观察进行形态学检测,采用免疫组织化学法检测p38、p-p38表达,免疫荧光检测p65核移位,蛋白免疫印迹法检测全称肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白介素-6(IL-6)、白介素-1β(IL-1β)、核因子-κB抑制因子(IκB-α)、p38、p65、p-IκB-α、p-p38、p-p65的表达,实时定量PCR(qPCR)检测TNF-α、IL-6、IL-1βmRNA的表达。结果模型组神经元数目明显减少(P<0.05),手针组与电针组形态学均有较大改善、电针组改善更佳。模型组炎症因子TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA水平上升,与模型组及手针组比较,电针组TNF-α、IL-6、IL-1β蛋白及mRNA明显降低(P<0.05)。模型组检出大量p38、p-p38阳性细胞分布于脊髓灰质前角,与模型组比较,手针组与电针组p-p38表达减弱,电针组减弱程度更大;与对照组比较,模型组p-IκB-α、p-p65含量升高(P<0.05);与模型组相比,手针组与电针组p-IκB-α、p-p65含量下降(P<0.05)。手针组与电针组均抑制p65入核过程,其中电针组抑制更加明显。结论夹脊电针通过抑制p38 MAPK/NF-κB信号通路,对腰髓前角运动神经元产生保护作用,缓解ALS病情的进展,为夹脊电针临床推广提供了理论依据。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化 ALS-SOD1g93a转基因小鼠 夹脊穴 p38 MAPK/NF-κB信号通路

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丁苯酞对不同性别hSOD1^(G93A)转基因小鼠行为学的影响 被引量：2

7

作者 张红丽 刘珊 +3 位作者 阴均涛 闫欣 王亚飞 刘亚玲 《中国新药与临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期682-685,共4页

目的观察丁苯酞对不同性别hSOD1^(G93A)转基因小鼠行为学的影响。方法肌萎缩侧索硬化(ALS)模型hSOD1^(G93A)转基因小鼠24只,随机分为对照组和丁苯酞组,每组雄雌各6只,分别灌胃给予玉米油10 mL·kg^(-1)·d^(-1)和丁苯酞180 mg&#... 目的观察丁苯酞对不同性别hSOD1^(G93A)转基因小鼠行为学的影响。方法肌萎缩侧索硬化(ALS)模型hSOD1^(G93A)转基因小鼠24只,随机分为对照组和丁苯酞组,每组雄雌各6只,分别灌胃给予玉米油10 mL·kg^(-1)·d^(-1)和丁苯酞180 mg·kg^(-1)·d^(-1),记录雄、雌小鼠的行为学表现。结果 90 d时,对照组与丁苯酞组相比均无显著差异(P>0.05)。120 d时,对照组雄性小鼠与雌性小鼠相比,旋转时间和后肢抓力均显著减小(均P<0.05),后肢步长无显著差异(P=0.857);丁苯酞组雄性小鼠与对照组雄性小鼠相比旋转时间、后肢抓力和后肢步长均显著增加(均P<0.05),2组雌性小鼠间比较,旋转时间和后肢抓力无显著差异(均P>0.05),但丁苯酞组雌性小鼠后肢步长显著增加(P<0.05)。丁苯酞组雄性小鼠比对照组雄性小鼠120 d生存期显著延长[(138.5±3.4)d vs.(119.3±3.2)d,P=0.002],雌性小鼠间无显著差异[(134.5±3.5)d vs.(132.0±2.4)d,P=0.573]。结论丁苯酞可明显提高雄性ALS模型小鼠运动协调能力和肌力,延缓疾病进展,延长生存期。 展开更多

关键词 丁苯酞 肌萎缩侧索硬化 hSOD1~g93a基因 性别因素 神经行为学表现 小鼠

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夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元P38 MAPK影响的研究 被引量：3

8

作者 卫彦 杜剑丽 +2 位作者 寇吉友 孙远征 孙忠人 《针灸临床杂志》 2017年第9期60-63,F0003,共5页

目的:通过夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠的干预,观察其对小鼠腰髓脊髓前角运动神经元P38、P-P38表达,旨在证实针刺对神经元细胞的保护作用,为夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)提供实验依据。方法:选取ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠1... 目的:通过夹脊电针对ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠的干预,观察其对小鼠腰髓脊髓前角运动神经元P38、P-P38表达,旨在证实针刺对神经元细胞的保护作用,为夹脊电针治疗肌萎缩侧索硬化(ALS)提供实验依据。方法:选取ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠18只,按随机数字表法随机将其分为电针组、手针组、模型组,每组各6只,阴性对照组选取同窝野生型小鼠6只。在小鼠出生后第60天开始进行干预。电针组:双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴针刺,疏波刺激;手针组:双侧L_(1~2)、L_(5~6)夹脊穴针刺,每10 min捻转1次;模型组、阴性对照组:同一时间,同一时长抓握、捆绑处理。共4周。小鼠出生120天时进行PP38MAPK、P38MAPK免疫组织化学法检测,并用图像分析仪对每张图片阳性表达的平均光密度(mean density)及累积光密度(IOD)进行测定和统计分析。结果:模型组P-P38、P38表达及P-P38/P38比值均明显比阴性对照组升高,且具有极显著性差异(P<0.01)。与模型组和手针组相比,电针组表达明显降低(P<0.01或P<0.05);与模型组比较,虽然手针组比值有所降低,但无显著性差异(P>0.05)。说明夹脊电针可以明显降低ALS-G93A小鼠腰髓前角运动神经元P-P38、P38表达及P-P38/P38比值。结论:夹脊电针对发病中期的ALS-SOD1^(G93A)转基因小鼠腰髓前角运动神经元P-P38表达有下调作用,抑制P38MAPK的活化,从而起到有效保护神经元细胞的作用。 展开更多

关键词 ALS-SOD1^g93a转基因小鼠 夹脊穴 电针 P38MAPK

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稳定转染hSOD1G93A增加NSC34细胞凋亡 被引量：1

9

作者 齐伟静 刘亚玲 +3 位作者 周晓萌 杨帅 耿丽颖 张欣 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2021年第9期544-547,共4页

目的探讨稳定转染hSOD1G93A对NSC34细胞凋亡的影响。方法常规体外培养稳定转染空质粒、hSOD1WT或hSOD1G93A质粒的NSC34细胞系,分为3组:空转组、野生组和突变组。应用CCK-8试剂盒和LDH试剂盒来测定各组细胞活力,应用透射电镜观察细胞线... 目的探讨稳定转染hSOD1G93A对NSC34细胞凋亡的影响。方法常规体外培养稳定转染空质粒、hSOD1WT或hSOD1G93A质粒的NSC34细胞系,分为3组:空转组、野生组和突变组。应用CCK-8试剂盒和LDH试剂盒来测定各组细胞活力,应用透射电镜观察细胞线粒体形态,通过TUNEL染色来检测细胞凋亡情况,应用Western blotting检测各组细胞凋亡相关蛋白的表达水平。结果与空转组和野生组细胞相比,突变组细胞线粒体形态异常,细胞活力明显下降,凋亡细胞数量增多,差异有统计学意义(P<0.05);且突变组细胞Bcl-2的蛋白表达水平显著下降,Bax的蛋白表达水平均明显增高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论稳定转染hSOD1G93A可导致NSC34细胞线粒体形态异常,降低抗凋亡蛋白的表达水平,增加促凋亡蛋白的表达水平,最终导致凋亡细胞增加。 展开更多

关键词 hSOD1g93a NSC34细胞 肌萎缩侧索硬化 凋亡

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丁苯酞对SOD1^(G93A)转基因鼠脊髓Ferritin表达的影响 被引量：1

10

作者 王坤 王舒 +1 位作者 刘珊 刘亚玲 《脑与神经疾病杂志》 2014年第1期19-22,共4页

目的探讨丁苯酞对SOD1G 93A转基因鼠的神经保护作用及其可能的机制。方法选取SOD1G 93A阳性小鼠48只,随机分为丁苯酞组(发病早期及终末期)和安慰剂组(发病早期及终末期),每组12只,观察SOD1G 93A转基因鼠的发病时间和生存期,采用免疫组... 目的探讨丁苯酞对SOD1G 93A转基因鼠的神经保护作用及其可能的机制。方法选取SOD1G 93A阳性小鼠48只,随机分为丁苯酞组(发病早期及终末期)和安慰剂组(发病早期及终末期),每组12只,观察SOD1G 93A转基因鼠的发病时间和生存期,采用免疫组化和蛋白印迹的方法观察SOD1G 93A转基因鼠腰髓铁蛋白(Ferritin)表达。结果丁苯酞组的发病时间为118.0±2.5d,与安慰剂组的109.5±2.2d相比较,P<0.05;生存时间为138.6±2.3d,与安慰剂组的128.1±2.8d相比较,P<0.05;免疫组化显示:发病初期,安慰剂组Ferritin阳性细胞显示胞浆和胞膜周围均匀着色,丁苯酞组Ferritin仅胞膜周围着色,胞核和胞浆着色不明显;终末期,丁苯酞组与安慰剂组相比,二者的Ferritin在胞核和胞浆均有着色;蛋白印迹显示:发病初期,Ferritin在腰髓表达量的相对值,丁苯酞组为0.81±0.23,与安慰剂组的1.57±0.43相比较,P<0.05;终末期,丁苯酞组为1.45±0.45,与安慰剂组的1.73±0.36相比较,P>0.05。结论丁苯酞延迟ALS小鼠的发病时间并延长其生存期,丁苯酞延迟小鼠发病可能与调节铁代谢有关。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化 丁苯酞 SOD1g93a转基因鼠 免疫组化 蛋白印迹 铁蛋白

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scAAV9-IGF-1对SOD1-G93A小鼠抗凋亡通路的作用 被引量：1

11

作者 温迪 吉盈肖 +2 位作者 李秋生 陈相 刘亚坤 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2024年第2期106-110,共5页

目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠... 目的 探索以自我互补双链腺相关病毒9为载体介导的人胰岛素样生长因子-1 (scAAV9-IGF-1)对SOD1-G93A转基因小鼠抗凋亡通路的作用。方法 采用肌萎缩侧索硬化(ALS)的动物模型即转基因SOD1-G93A突变型及野生型(wild type-SOD1,WT-SOD1)小鼠,在其出生后60 d龄时,雌性同窝阳性SOD1-G93A转基因小鼠采用随机的方法分配到治疗组及溶剂对照组,治疗组全身多点肌肉注射scAAV9-IGF-1,溶剂对照组多点肌肉注射AAV9-GFP,同年龄WT-SOD1作为阴性对照组。在肌肉注射40~50 d后,利用PCR技术检测腰髓中IGF-1含量的变化,同时检测抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2的mRNA含量变化,通过免疫组化染色观察抗凋亡通路因子Bcl-xl、Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达。结果 PCR技术检测显示scAAV9-IGF-1处理后,腰髓中IGF-1的mRNA含量显著高于GFP对照组,抗凋亡通路因子Bclxl、Bcl-2的mRNA含量均高于溶剂对照组(均P<0.05),而与WT组差异无统计学意义。免疫组化染色结果显示,治疗组中抗凋亡通路蛋白Bcl-xl,Bcl-2在小鼠腰髓前角神经元中的表达多于溶剂对照组,并且与WT阴性对照组相当。结论 scAAV9-IGF-1可以激活SOD1-G93A转基因小鼠模型中的抗凋亡通路,其通过上调Bcl-xl,Bcl-2的mRNA水平,进而增加Bcl-xl、Bcl-2的蛋白表达,从而产生抗凋亡的作用。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化 SOD1-g93a转基因小鼠 腺相关病毒9 人胰岛素样生长因子-1 抗凋亡通路

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辛伐他汀通过抑制类异戊二烯的合成降低TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞的活力

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作者 齐伟静 刘亚玲 +5 位作者 李睿 杨帅 李帅 耿丽颖 张欣 钱倩 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2021年第3期133-137,共5页

目的观察辛伐他汀对肌萎缩侧索硬化(ALS)的两种细胞模型:TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞活力的影响.方法辛伐他汀、辛伐他汀联合甲羟戊酸途径的下游产物以及下游抑制剂分别干预TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞,应用CCK-8法和LDH法检测细胞活力的... 目的观察辛伐他汀对肌萎缩侧索硬化(ALS)的两种细胞模型:TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞活力的影响.方法辛伐他汀、辛伐他汀联合甲羟戊酸途径的下游产物以及下游抑制剂分别干预TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞,应用CCK-8法和LDH法检测细胞活力的变化.结果辛伐他汀降低了TDP25细胞和hSOD1G93A细胞的活力,呈剂量依赖性和时间依赖性.辛伐他汀导致的细胞活力下降可以通过补充甲羟戊酸,FPP或GGPP而完全缓解,但补充胆固醇不能.另外,FTI-277可以明显降低TDP-25细胞的活力,GGTI-286可以同时降低TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞的活力,而胆固醇抑制剂AY9944对两种细胞的活力均无明显影响.结论辛伐他汀导致TDP-25细胞和hSOD1G93A细胞的活力下降,这种细胞毒性作用可能是由于抑制了类异戊二烯的合成. 展开更多

关键词 辛伐他汀 肌萎缩侧索硬化 类异戊二烯 TDP25细胞 hSOD1g93a细胞

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芳香化酶抑制通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力

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作者 刘琦 闫丽娜 +2 位作者 李睿 刘亚玲 董惠 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2022年第4期210-214,共5页

目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A (hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒C... 目的 研究抑制芳香化酶表达对稳定转染人SOD1-G93A (hSOD1-G93A)的NSC-34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法 将稳定转染hSOD1-G93A的NSC-34细胞分为三组,分别为对照组(SOD-G93A)、转染空质粒组(SOD1-G93A-E)、转染芳香化酶抑制质粒Cyp19a1 ShRNA组(SOD1-G93A-D)。通过实时定量PCR检测Cyp19a1 mRNA表达水平,通过CCK8试剂盒检测各组细胞活力,通过LDH试剂盒检测各组细胞LDH释放水平,通过蛋白印迹法检测各组细胞中芳香化酶(aromatase)、醌氧化还原酶1(NAD(P)H:quinone oxidoreductase1,NQO1)和谷氨酸半胱氨酸连接酶(GCLM)表达水平。结果 瞬时转染48h后,SOD1-G93A-D组Cyp19a1 mRNA表达水平较SOD1-G93A-E组显著下降(P<0.05),细胞活力较SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组明显下降(P<0.05),LDH释放水平较其他两组明显升高(P<0.05)。细胞活力及LDH释放水平在SOD1-G93A-E组及SOD1-G93A组间未发现显著差异(P>0.05)。芳香化酶、NQO1和GCLM蛋白水平在SOD1-G93A-D组明显降低(P<0.05)。结论 抑制芳香化酶通过降低抗氧化应激能力影响稳转hSOD1-G93A的NSC-34细胞活力。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化 hSOD1-g93a Cyp19a1 芳香化酶 氧化应激

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羟丙基-β-环糊精通过加重自噬障碍降低稳转hSOD1G93A的NSC34细胞的活力

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作者 齐伟静 刘亚玲 +1 位作者 李睿 耿丽颖 《脑与神经疾病杂志》 CAS 2024年第10期608-613,共6页

目的观察羟丙基-β-环糊精(HpβCD)对稳转hSOD1G93A的NSC34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法应用HpBCD分别干预对照组(稳转空质粒的NSC34细胞)和实验组(稳转hSOD1G93A的NSC34细胞),通过CCK-8试剂盒检测各组细胞活力,通过透射电镜... 目的观察羟丙基-β-环糊精(HpβCD)对稳转hSOD1G93A的NSC34细胞活力的影响并探讨可能的机制。方法应用HpBCD分别干预对照组(稳转空质粒的NSC34细胞)和实验组(稳转hSOD1G93A的NSC34细胞),通过CCK-8试剂盒检测各组细胞活力,通过透射电镜观察细胞自噬结构,应用Western blotting检测human SOD1、LC3Ⅱ/Ⅰ、P62的蛋白表达水平。结果HpβCD干预后,稳转hSOD1G93A的NSC34细胞活力下降,细胞中humanSOD1含量及自噬结构明显增多,LC3Ⅱ/Ⅰ、P62蛋白的表达水平也显著增加。结论HpβCD降低稳转hSOD1G93A的NSC34细胞活力,这种细胞毒性作用可能是由于进一步加重了稳转hSOD1G93A的NSC34细胞的自噬障碍。 展开更多

关键词 羟丙基-Β-环糊精 hSOD1g93a 肌萎缩侧索硬化 自噬

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RAC1、RAC3和IQGAP1在SOD1^(G93A)突变小鼠脊髓中的表达 被引量：4

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作者 王雪枚 齐波 +5 位作者 霍姿君 赵建涛 管英俊 陈燕春 刘焕彩 张凌云 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 2022年第5期499-506,共8页

目的:检测Ras相关C3肉毒菌毒物底物1(RAC1)、Ras相关C3肉毒菌毒物底物3(RAC3)和IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在SOD1^(G93A)突变小鼠脊髓中的表达变化。方法:选取SOD1^(G93A)突变小鼠与野生型(WT)小鼠作为动物模型,将其分为症状前期(... 目的:检测Ras相关C3肉毒菌毒物底物1(RAC1)、Ras相关C3肉毒菌毒物底物3(RAC3)和IQ结构域GTP酶活化蛋白1(IQGAP1)在SOD1^(G93A)突变小鼠脊髓中的表达变化。方法:选取SOD1^(G93A)突变小鼠与野生型(WT)小鼠作为动物模型,将其分为症状前期(出生70 d)、症状早期(出生95 d)、症状中期(出生108 d)和症状晚期(出生122 d)4个组别,利用RT-PCR检测小鼠脊髓中RAC1、RAC3和IQGAP1 mRNA表达,利用Western Blot和免疫荧光染色检测RAC1、RAC3和IQGAP1蛋白表达与定位。结果:与同窝WT小鼠相比,RAC1 mRNA表达水平在出生不同时间点SOD1^(G93A)突变小鼠脊髓中无明显变化;在出生95、108和122 d RAC3 mRNA均明显降低,IQGAP1 mRNA均明显升高;RAC1、RAC3和IQGAP1蛋白在出生95、108和122 d表达均明显降低;RAC1、RAC3、IQGAP1免疫阳性细胞主要分布在脊髓前角,即运动神经元所在的部位,RAC1、RAC3和IQGAP1均与神经元特异性核抗原(NeuN)标记的神经元共表达。结论:SOD1^(G93A)突变小鼠脊髓中RAC1、RAC3和IQGAP1的表达异常与肌萎缩侧索硬化症(ALS)的发病密切相关。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 脊髓 RAC1 RAC3 IQGAP1 SOD1^(g93a)突变小鼠

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健脾益肺方对肌萎缩侧索硬化hSOD1-G93A转基因小鼠脊髓p38 MAPK蛋白及炎症因子表达的影响 被引量：3

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作者 潘显梅 杨碧莹 +2 位作者 杜宝新 郑瑜 李惠珍 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第15期155-160,共6页

目的：探讨健脾益肺方对hSOD1-G93A转基因小鼠p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）蛋白及炎症因子表达的影响。方法：将24只8周龄的SPF级hSOD1-G93A转基因小鼠随机分为模型组、健脾益肺方（2.86,5.... 目的：探讨健脾益肺方对hSOD1-G93A转基因小鼠p38丝裂原活化蛋白激酶（p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK）蛋白及炎症因子表达的影响。方法：将24只8周龄的SPF级hSOD1-G93A转基因小鼠随机分为模型组、健脾益肺方（2.86,5.72,11.44 g·kg（-1））组,每组6只。8周龄SPF级同窝出生正常野生型小鼠6只作为正常组。模型组和正常组予生理盐水灌胃,药物组予不同剂量的中药灌胃,每日1次,共120 d。用免疫荧光法（immunofluorescence）检测小鼠脊髓小胶质细胞的活化情况,p38 MAPK,p-p38 MAPK蛋白的荧光强度核浆比,蛋白质免疫印迹法（Western blot）检测小鼠脊髓p38MAPK,p-p38 MAPK,肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及环氧化酶-2（COX-2）蛋白的表达。结果：与正常组比较,模型组、健脾益肺方（2.86 g·kg（-1））组小胶质细胞激活数明显增多（P〈0.05,P〈0.01）,p38 MAPK,p-p38 MAPK荧光强度核浆比显著升高（P〈0.01）,与模型组比较,健脾益肺方（5.72,11.44 g·kg（-1））组小胶质细胞激活数及所占总数比例显著减少（P〈0.01）,p38 MAPK,p-p38 MAPK荧光强度核浆比显著下降（P〈0.01）;与正常组比较,模型组、健脾益肺方（2.86 g·kg（-1））组p38 MAPK,p-p38 MAPK,COX-2,TNF-α蛋白表达明显升高（P〈0.05,P〈0.01）,与模型组相比,健脾益肺方（5.72,11.44 g·kg（-1））组p38 MAPK,p-p38 MAPK,COX-2,TNF-α蛋白表达显著降低（P〈0.01）。结论：健脾益肺方可能通过介导p38MAPK通路抑制p38 MAPK蛋白磷酸化,以浓度依赖性抑制小胶质细胞的活化,下调p38 MAPK蛋白及炎症因子的表达,从而发挥神经保护作用。 展开更多

关键词 健脾益肺方 hSOD1-g93a转基因小鼠 炎症因子 P38丝裂原活化蛋白激酶

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RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中的表达 被引量：4

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作者 梁婵婵 王巧真 +4 位作者 蒋欣 刘金梦 徐进超 郑怡雯 王箐 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第1期29-34,共6页

目的:通过研究RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓内的表达变化以阐明Rho/ROCK信号通路在肌萎缩侧索硬化症(ALS)病程中的作用。方法:饲养SOD1-G93A转基因小鼠和同窝野生型小鼠至发病早期、中期和晚期,部分小鼠冰上剥离新鲜脊髓组织,... 目的:通过研究RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓内的表达变化以阐明Rho/ROCK信号通路在肌萎缩侧索硬化症(ALS)病程中的作用。方法:饲养SOD1-G93A转基因小鼠和同窝野生型小鼠至发病早期、中期和晚期,部分小鼠冰上剥离新鲜脊髓组织,利用RT-PCR方法检测RhoA和ROCK2 mRNA的表达,利用Western Blot方法检测RhoA和ROCK2蛋白的表达;部分小鼠行心脏灌注并剥离其脊髓组织制成冰冻切片,利用免疫组织化学染色方法检测RhoA和ROCK2蛋白的表达。结果:在SOD1-G93A鼠发病的早期、中期和晚期,转基因小鼠脊髓中RhoA和ROCK2的mRNA及蛋白表达均上调。免疫组织化学染色实验结果显示,野生型小鼠脊髓中RhoA和ROCK2弥散分布于胞质和突起中,阳性染色浅,SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中RhoA和ROCK2阳性染色深,大量聚集在细胞膜及细胞质。结论:RhoA和ROCK2在SOD1-G93A转基因小鼠脊髓中异常高水平表达与ALS脊髓区病变密切相关,可能参与ALS疾病进程。 展开更多

关键词 肌萎缩侧索硬化症 脊髓 RHOA ROCK2 SOD1-g93a转基因小鼠

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转录因子12在SOD1-G93A转基因小鼠大脑皮层和纹状体中的表达与定位研究 被引量：2

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作者 丁昊宇 陈燕春 +5 位作者 郑怡雯 徐进超 周永佳 林宝勇 张皓云 刘焕彩 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期371-376,共6页

目的:检测转录因子12(TCF12)在SOD1-G93A转基因小鼠不同年龄阶段大脑皮层和纹状体中的表达情况。方法:采用成年SOD1-G93A转基因小鼠和野生型(WT)小鼠,分别在转基因小鼠肌萎缩性侧索硬化症(ALS)发病的早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期... 目的:检测转录因子12(TCF12)在SOD1-G93A转基因小鼠不同年龄阶段大脑皮层和纹状体中的表达情况。方法:采用成年SOD1-G93A转基因小鼠和野生型(WT)小鼠,分别在转基因小鼠肌萎缩性侧索硬化症(ALS)发病的早(95 d)、中(108 d)、晚(122 d)期取材制备标本。使用real time RT-PCR技术检测TCF12的mRNA表达情况,使用Western Blot技术检测TCF12蛋白表达情况,使用免疫荧光双标记技术检测TCF12在大脑皮层和纹状体的表达分布以及细胞类型分布。结果:在SOD1-G93A转基因小鼠和WT小鼠的大脑皮层和纹状体中均检测到了TCF12分布,TCF12在神经元表达;在ALS发病早、中、晚期SOD1-G93A转基因小鼠大脑皮层中的TCF12 mRNA和蛋白表达较WT小鼠显著升高(P<0.05,P<0.01);在发病中、晚期SOD1-G93A转基因小鼠纹状体中的TCF12 mRNA和蛋白水平表达相较于WT小鼠显著升高(P<0.01)。结论:TCF12在SOD1-G93A转基因小鼠发病中晚期大脑皮层和纹状体中表达升高,提示TCF12分子参与大鼠了ALS发病中、晚期神经元的退变进程。 展开更多

关键词 肌萎缩性侧索硬化症(ALS) 转录因子12(TCF12) 大脑皮层 纹状体 SOD1-g93a转基因小鼠

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白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响 被引量：1

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作者 李园园 杜娟 +2 位作者 于莎莎 吴红然 宋学琴 《中药药理与临床》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期33-36,共4页

目的：研究白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响。方法：36只SOD1-G93A小鼠随机分为3组,对照组、溶剂组、白藜芦醇组,每组12只,至症状早期（给药20~40天）或者终末期（给药60~80天）取材,利用激光共聚焦、免疫组织化学、We... 目的：研究白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响。方法：36只SOD1-G93A小鼠随机分为3组,对照组、溶剂组、白藜芦醇组,每组12只,至症状早期（给药20~40天）或者终末期（给药60~80天）取材,利用激光共聚焦、免疫组织化学、Western-blot技术检测小鼠腰髓和运动皮层中LC3B的表达及LC3BⅠ/Ⅱ比值变化。结果：激光共聚焦技术及免疫组织化学技术检测发现症状早期白藜芦醇组（30mg/kg）和溶剂组小鼠腰髓运动神经元及运动皮层神经元与对照组相比LC3B表达增多;Western blot技术检测发现症状早期白藜芦醇组（30mg/kg/d）小鼠腰髓和运动皮层神经元中LC3BⅠ/Ⅱ比值分别为（1.20±0.29,1.27±0.30）,与对照组相比（1.29±0.34,1.42±0.27）降低,但无统计学差异（P〈0.05）。终末期三组间小鼠腰髓和运动皮层LC3B表达及LC3BⅠ/Ⅱ比值无明显差异。结论：白藜芦醇对SOD1-G93A小鼠腰髓和运动皮层LC3B的影响微弱。 展开更多

关键词 白藜芦醇 SOD1-g93a小鼠 LC3B

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丁苯酞单独或联合应用利鲁唑对hSOD1^(G93A)转基因小鼠影响 被引量：1

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作者 王舒 刘亚玲 +2 位作者 孙灿 王坤 刘珊 《脑与神经疾病杂志》 2015年第6期408-412,共5页

目的观察丁苯酞(NBP)在肌萎缩侧索硬化(ALS)治疗的应用前景。方法通过转轮实验、抓力实验、步长测量及发病期、生存期指标观察NBP联合利鲁唑(合用药)、单独利鲁唑、单独NBP对SOD1G93A转基因鼠的影响。结果 90d时:各组间各实验指标无明... 目的观察丁苯酞(NBP)在肌萎缩侧索硬化(ALS)治疗的应用前景。方法通过转轮实验、抓力实验、步长测量及发病期、生存期指标观察NBP联合利鲁唑(合用药)、单独利鲁唑、单独NBP对SOD1G93A转基因鼠的影响。结果 90d时:各组间各实验指标无明显差异;120d时:1转轮实验,三个用药组均优于对照组;合用组优于NBP组,但不优于利鲁唑;利鲁唑组有优于NBP组的趋势;2步长测量,三个用药组与对照组相比较,合用组优于NBP组及利鲁唑组,但P>0.05;利鲁唑组并不优于NBP组(P>0.05);3抓力实验,三个用药组均优于对照组;合用组优于NBP及利鲁唑组;利鲁唑组与NBP组比较,P>0.05;4发病时间与生存期,用药组均能推迟小鼠发病时间,与对照组相比,P<0.05;合用组优于NBP组,但与利鲁唑组相比,P=0.12>0.05;NBP组和利鲁唑组相比,P=0.27>0.05;就生存时间而言,各用药组均能延长小鼠生存时间,与对照组相比,P<0.05;合用组优于NBP组,与利鲁唑组相比,P>0.05;NBP组与利鲁唑组相比,P>0.05。结论 NBP或利鲁唑单独或联合应用均可以提高ALS模型小鼠运动协调能力,延长生存期。联合用药比单独用NBP更能延长小鼠生存期。 展开更多

关键词 丁苯酞 利鲁唑 肌萎缩侧索硬化 hSOD1^g93a转基因小鼠 行为学

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