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染色体外同源重组结合细胞质注射途径研制转基因小鼠
1
作者 耿艳艳 端家忠 +2 位作者 李勇 宁涛 张靖溥 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2004年第6期572-577,共6页
以绵羊 β 乳球蛋白基因 (β Lactoglobulin ,β LG)为转基因表达框架 ,将人G CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,hG CSF)基因与报告基因 增强型绿色荧光蛋白 (EnhancedGreenFluorescenctProtein ,EGFP)基因作为双表达单元... 以绵羊 β 乳球蛋白基因 (β Lactoglobulin ,β LG)为转基因表达框架 ,将人G CSF(HumanGranulocyteColonyStimulatingFactor,hG CSF)基因与报告基因 增强型绿色荧光蛋白 (EnhancedGreenFluorescenctProtein ,EGFP)基因作为双表达单元拼接到 β LG基因的第一外显子处 ,并在G CSF基因两侧引入同源重组位点loxP、lox2 2 72 ,将打靶基因表达构件 β LG hG CSF IRES EGFP(总长 9 3kb)分为两段进行构建 ,片段Ⅰ (长 5 9kb)与片段Ⅱ (长 5 6kb)两段重叠部分为 2 2kb。向小鼠受精卵细胞质共注射构件片段Ⅰ、Ⅱ和NLS(核定位信号 ) 3个基因片段。对仔鼠进行整合与表达的检测。PCR Southern杂交检测结果表明 ,片段Ⅰ的整合率为 6 2 3% (86 /138) ,片段Ⅱ的整合率为 5 4 3% (75 /138) ,片段Ⅰ、Ⅱ共整合 (包括两片段分别整合和染色体外同源重组两种情况 )的小鼠为 6 2只 ,整合率为 4 4 9% (6 2 /138) ,其中在双阳性转基因小鼠中发生染色体外同源重组的几率为 80 6 % (5 0 /6 2 )。RT PCR Southern检测了 10只发生染色体外同源重组的转基因雌性小鼠 ,hG CSF基因的表达率为 90 % (9/10 ) ,EGFP基因的表达率为 10 0 % (10 /10 ) ,通过对其乳汁紫外吸收光谱的检测 ,EGFP基因的表达率为 5 0 % (5 /10 )。 展开更多
关键词 染色体外同源重组 核定位蛋白 转基因小鼠 Β-乳球蛋白基因 EGFP g-gsf
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用噬菌体随机肽库筛选刺激细胞生长的活性小肽
2
作者 武婕 范国才 +1 位作者 王清明 陈惠鹏 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期83-85,共3页
目的 筛选刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的活性小肽。方法以Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞系ＮＦＳ－６０为靶细胞，筛选随机６和１５肽库，经３轮筛选后，随机挑取６０个噬菌体克隆进行生物学活性和结合活性鉴定。结果得到６个刺激ＮＦＳ－６０细胞... 目的 筛选刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的活性小肽。方法以Ｇ－ＣＳＦ依赖细胞系ＮＦＳ－６０为靶细胞，筛选随机６和１５肽库，经３轮筛选后，随机挑取６０个噬菌体克隆进行生物学活性和结合活性鉴定。结果得到６个刺激ＮＦＳ－６０细胞生长的阳性噬菌体克隆。经细胞ＥＬＩＳＡ检测，这６个小肽都可与ＮＦＳ－６０细胞结合，并且这６个小肽与细胞结合的量，都与所加入的噬菌体的量成正比，经测序未找到共同序列。结论从随机噬菌体肽库中筛到的活性小肽，可以模拟某些生长因子的活性部位，来刺激靶细胞的生长。 展开更多
关键词 NFS-60细胞 噬菌体肽库 粒细胞集落刺激因子 G-CSF 筛选
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