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Fugene6——一种介导体外真核细胞高效率基因转染的新方法 被引量：10
1
作者 胡义德 高楠 +2 位作者 曹晓运 周决 曹世龙 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期138-140,共3页
目的建立一种介导体外真核细胞高效率基因转染的新方法。方法采用一种新的非脂质体基因转染试剂 Fu-gene 6 ,以人 p14ARF蛋白表达载体 (p CI- neo- p14ARF)为外源 DNA,转染存在 p14ARF基因原发缺失的人 H46 0 ,A5 49,U2 5 1和 PC- 3共 ... 目的建立一种介导体外真核细胞高效率基因转染的新方法。方法采用一种新的非脂质体基因转染试剂 Fu-gene 6 ,以人 p14ARF蛋白表达载体 (p CI- neo- p14ARF)为外源 DNA,转染存在 p14ARF基因原发缺失的人 H46 0 ,A5 49,U2 5 1和 PC- 3共 4个癌细胞系 ,通过 G418筛选 2 1d确定转染效率。结果经转染的 4个细胞系培养孔中均长出了抗 G418细胞克隆 ,而且这些细胞克隆的 p14ARF基因 PCR产物均为阳性 ,细胞毒性分析发现高浓度 Fugene6作用下各细胞的增殖活力未受影响。结论 Fugene 6为一简便快速、易操作。 展开更多
关键词 fugene6 真核细胞 基因转染 人p14ARF表达载体
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LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效率比较 被引量：2
2
作者 张宝 霍霞 +3 位作者 徐锡金 齐宗利 郑谨 彭琳 《生物技术通讯》 CAS 2007年第4期638-640,共3页
目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMI... 目的:比较LipofectAMINE2000与Fugene6转染细胞的效果。方法:将含有Firefly和Renilla荧光素酶基因的质粒分别用LipofectAMINE2000和Fugene6转染293T、HepG2和DLD-1细胞,于48h后裂解细胞测定荧光素酶活性。结果:在293T细胞中,LipofectAMINE2000转染组的萤火虫(Firefly)和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的6.5和5.6倍(P<0.005);在HepG2细胞中,LipofectAMINE2000转染组的Firefly和Renilla荧光素酶活性分别是Fugene6转染组的44和49倍(P<0.001);而在DLD-1细胞中,两者无差别。结论:转染试剂LipofectAMINE2000和Fugene6对不同细胞的转染效果存在差异,当进行转染实验时,对于不同的细胞须根据情况进行选择。 展开更多
关键词 LipofectAMINE2000 fugene6 转染
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用Fugene6制作高滴度慢病毒方法的优化比较 被引量：2
3
作者 范霖 马志昭 +3 位作者 高山峨 路建伟 李思光 潘晓静 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2011年第4期385-390,共6页
针对实验室中比较普遍的包装的慢病毒滴度不高的问题,我们对慢病毒包装过程中的几个关键步骤进行了优化。采用Fugene6同时转染携带GFP的质粒和包装慢病毒所必需的包装质粒进入293T细胞中。通过使用荧光显微观察GFP的表达亮度及流式细胞... 针对实验室中比较普遍的包装的慢病毒滴度不高的问题,我们对慢病毒包装过程中的几个关键步骤进行了优化。采用Fugene6同时转染携带GFP的质粒和包装慢病毒所必需的包装质粒进入293T细胞中。通过使用荧光显微观察GFP的表达亮度及流式细胞技术测量GFP阳性细胞的比例来测定病毒滴度。通过优化Fugene6和DNA的比例,发现当Fugene6和DNA的比例是3:1时获得的慢病毒的滴度最高;通过对转染后收获病毒的时间的比较,发现转染48小时后回收所得到的慢病毒滴度最高。 展开更多
关键词 慢病毒 滴度 fugene6
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FuGNE6与pGPu6/GFP/neo-GPC3-iRNA质粒不同比率对HepG2细胞转染效率的影响 被引量：1
4
作者 姜菲菲 赵焕英 +3 位作者 隋雷鸣 绳波 徐萌 李莉 《山西医科大学学报》 CAS 2015年第1期25-27,100,共4页
目的探讨转染试剂FuGNE6与pGPu6/GFP/neo-GPC3-iRNA质粒不同比率对HepG2细胞转染效率的影响,并寻找最佳的转染比例。方法采用转染试剂FuGNE6(以6μl为例)与GPC3-iRNA质粒(μg)比率分别为6∶0.5,6∶1,6∶1.5,6∶2,6∶4,6∶6及GPC3-iRNA... 目的探讨转染试剂FuGNE6与pGPu6/GFP/neo-GPC3-iRNA质粒不同比率对HepG2细胞转染效率的影响,并寻找最佳的转染比例。方法采用转染试剂FuGNE6(以6μl为例)与GPC3-iRNA质粒(μg)比率分别为6∶0.5,6∶1,6∶1.5,6∶2,6∶4,6∶6及GPC3-iRNA量固定1μg(以此为例),转染试剂与GPC3-iRNA质粒(μg)比率分别为2∶1,4∶1,6∶1,8∶1,10∶1进行转染。分别用荧光显微镜、流式细胞仪及PI染色实验观察细胞转染效率及48h细胞存活率。结果FuGNE6固定为6μl时,质粒用量从0.5-2μg转化效率逐步增高,超过2μg后转染效率反而大大降低,各比例组在48h细胞存活率都在95%以上;质粒量固定为1μg时,随转染试剂增加转化效率不断增大,超过6∶1时,随转染试剂增加,48h细胞存活率也逐渐下降。结论FuGNE6与GPC3-iRNA比例为6∶1.5时转化效率最大,且细胞存活率高。 展开更多
关键词 转染 fugene6 HEPG2细胞
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