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FkpA促进功能性工程抗体的生产
1
作者 杨萌 杜琳 《生物制品快讯》 2004年第5期20-21,共2页
关键词 fkpa 功能性工程抗体 基因工程 大肠杆菌 融合蛋白
暂未订购
抗膀胱癌重组免疫毒素的可溶性表达及其抗肿瘤活性 被引量：3
2
作者 晁开 何丹 +4 位作者 杨慧 张众 林晴 郭蔼光 黄华樑 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期568-571,共4页
目的 :构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的可溶性表达载体 ,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白。方法 :将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的基因片段 ,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK... 目的 :构建抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的可溶性表达载体 ,并表达、纯化具有抗肿瘤活性的可溶性蛋白。方法 :将抗膀胱癌重组免疫毒素BDI 1 PE38/KDEL的基因片段 ,插入含有大肠杆菌脯氨酰顺反异构酶FkpA基因的共表达载体pTMFK中 ,构建重组共表达载体pTMFK IT。以重组质粒转化大肠杆菌BL2 1(DE3) Star,共表达目的蛋白与FkpA。表达产物以镍离子金属螯合层析柱及抗PE抗体亲和柱层析进行纯化。用ELISA检测免疫毒素的抗原结合活性 ,用噻唑蓝(MTT)法进行体外细胞杀伤实验。结果 :成功地构建了抗膀胱癌免疫毒素基因与FkpA基因的共表达载体 ,并获得纯度较高的目的表达产物。纯化后的表达产物与BIU 87膀胱癌细胞膜抗原具有良好的特异性结合活性 ,对BIU 87膀胱癌细胞有明显的体外特异性杀伤作用。结论 :获得了对膀胱癌细胞具有显著特异性杀伤活性的免疫毒素 。 展开更多
关键词 免疫毒素 膀胱癌 fkpa 可溶性表达 亲和层析 细胞毒性
原文传递
蛋白内含子介导纯化的表达载体的构建及应用
3
作者 张云龙 张众 +2 位作者 王飞 陈毓荃 黄华樑 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第4期13-16,共4页
将抗膀胱癌单链抗体 (PG)融合在蛋白内含子 (intein)的C末端 ,利用intein的N末端具有的chitinbindingdomain(CBD)对几丁质柱的吸附特性及intein的自切割活性对PG进行一次性纯化。同时 ,引入大肠杆菌分子伴侣肽基脯氨酰顺反异构酶 (Fk pA... 将抗膀胱癌单链抗体 (PG)融合在蛋白内含子 (intein)的C末端 ,利用intein的N末端具有的chitinbindingdomain(CBD)对几丁质柱的吸附特性及intein的自切割活性对PG进行一次性纯化。同时 ,引入大肠杆菌分子伴侣肽基脯氨酰顺反异构酶 (Fk pA)与目的蛋白进行共表达及融合表达 ,以使目的蛋白以可溶形式存在。结果显示 ,PG融合蛋白对几丁质柱的吸附效率很高 ,in tein的自切割释放PG的效率也较高 ,但PG仅出现在SDS洗脱液中。FkpA与PG共表达能显著地提高目的蛋白的可溶性。Intein介导的纯化系统前景远大。 展开更多
关键词 单链抗体 INTEIN CBD fkpa pTWIN 纯化
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