目的探讨溶质载体家族39成员14(solute carrier family 39 member 14,SLC39A14)对铁过载诱导HepG2细胞胰岛素抵抗的影响及机制。方法体外培养HepG2细胞,加入不同浓度的柠檬酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)通过CCK-8检测细胞活力、...目的探讨溶质载体家族39成员14(solute carrier family 39 member 14,SLC39A14)对铁过载诱导HepG2细胞胰岛素抵抗的影响及机制。方法体外培养HepG2细胞,加入不同浓度的柠檬酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)通过CCK-8检测细胞活力、钙黄绿素(Calcein-AM)检测不稳定铁池(labile iron loop,LIP)、透射电镜观察线粒体、细胞葡萄糖消耗量检测胰岛素抵抗情况、以及SLC39A14蛋白和mRNA的表达;随后加入铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)后检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH);最后使用小干扰RNA(siRNA)技术敲低SLC39A14的表达,观察氧化应激及胰岛素抵抗指标是否变化。结果FAC干预后细胞活力下降、LIP水平增加、细胞葡萄糖消耗量减少,同时上调SLC39A14蛋白和mRNA的表达。与FAC组比较,加入铁死亡抑制剂联合处理后,通过减少ROS和MDA水平、增加GSH含量等方式改善细胞内氧化应激水平,下调SLC39A14蛋白和mRNA的表达,增加葡萄糖消耗量,进而缓解胰岛素抵抗的发生。敲低SLC39A14后,FAC+SLC39A14敲低组HepG2细胞氧化应激和胰岛素抵抗水平较FAC组进一步改善。结论FAC引起HepG2细胞胰岛素抵抗的发生,机制可能与激活SLC39A14有关。展开更多
目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性...目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中反应性活性氧(ROS)的含量,利用商品化试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)的含量,利用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)变化,利用Western Blot和real time RT-PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。结果:血红素处理可降低HT22细胞活性,诱发氧化应激,破坏线粒体膜电位(MMP),并下调GPX4表达而诱导铁死亡。相反,Fer-1可以使细胞活性恢复,降低氧化应激反应,从而抑制HT22细胞铁死亡。结论:血红素中诱发了HT22细胞内脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;铁死亡抑制剂Fer-1可以阻断血红素这种细胞毒性。展开更多
文摘目的探讨溶质载体家族39成员14(solute carrier family 39 member 14,SLC39A14)对铁过载诱导HepG2细胞胰岛素抵抗的影响及机制。方法体外培养HepG2细胞,加入不同浓度的柠檬酸铁铵(ferric ammonium citrate,FAC)通过CCK-8检测细胞活力、钙黄绿素(Calcein-AM)检测不稳定铁池(labile iron loop,LIP)、透射电镜观察线粒体、细胞葡萄糖消耗量检测胰岛素抵抗情况、以及SLC39A14蛋白和mRNA的表达;随后加入铁死亡抑制剂(Ferrostatin-1,Fer-1)后检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)和谷胱甘肽(glutathione,GSH);最后使用小干扰RNA(siRNA)技术敲低SLC39A14的表达,观察氧化应激及胰岛素抵抗指标是否变化。结果FAC干预后细胞活力下降、LIP水平增加、细胞葡萄糖消耗量减少,同时上调SLC39A14蛋白和mRNA的表达。与FAC组比较,加入铁死亡抑制剂联合处理后,通过减少ROS和MDA水平、增加GSH含量等方式改善细胞内氧化应激水平,下调SLC39A14蛋白和mRNA的表达,增加葡萄糖消耗量,进而缓解胰岛素抵抗的发生。敲低SLC39A14后,FAC+SLC39A14敲低组HepG2细胞氧化应激和胰岛素抵抗水平较FAC组进一步改善。结论FAC引起HepG2细胞胰岛素抵抗的发生,机制可能与激活SLC39A14有关。
文摘目的:研究铁抑素-1(Fer-1)对血红素诱导的小鼠海马神经元铁死亡的影响。方法:小鼠海马神经元细胞系HT22细胞分为对照组(control)、血红素处理组(hemin)以及血红素和铁抑素-1联合处理组(hemin+Fer1)。利用CCK-8试剂盒检测各组细胞的活性,利用活性氧荧光探针(DCFH-DA)法检测各组细胞中反应性活性氧(ROS)的含量,利用商品化试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)的含量,利用JC-1试剂盒检测线粒体膜电位(MMP)变化,利用Western Blot和real time RT-PCR检测细胞中谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)的表达。结果:血红素处理可降低HT22细胞活性,诱发氧化应激,破坏线粒体膜电位(MMP),并下调GPX4表达而诱导铁死亡。相反,Fer-1可以使细胞活性恢复,降低氧化应激反应,从而抑制HT22细胞铁死亡。结论:血红素中诱发了HT22细胞内脂质过氧化反应,引起线粒体损伤及铁死亡;铁死亡抑制剂Fer-1可以阻断血红素这种细胞毒性。
