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IgG4亚型Fc突变体的构建及其对血液半衰期的影响 被引量:1
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作者 郭勋 谢惠君 张元 《生物工程学报》 北大核心 2025年第8期3143-3154,共12页
本研究旨在构建一系列IgG4(immunoglobulin G4)亚型的Fc(fragment crystallizable)重组蛋白突变体,筛选出血液半衰期显著提高的Fc突变体,分析基因突变位点与半衰期的关系,为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的开发提供理论依据。选取9个... 本研究旨在构建一系列IgG4(immunoglobulin G4)亚型的Fc(fragment crystallizable)重组蛋白突变体,筛选出血液半衰期显著提高的Fc突变体,分析基因突变位点与半衰期的关系,为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的开发提供理论依据。选取9个基因突变位点进行突变,并将不同的突变位点进行组合,通过分子克隆及点突变技术构建不同的突变子表达质粒pET24b-Fc。将以上质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),通过蛋白表达技术成功表达了具有不同突变的Fc重组蛋白,其中Fc2和Fc3突变体重组蛋白产量略低,其他突变体蛋白的表达未受影响;通过体外细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)、钙黄绿素乙酰氧基甲酯/碘化丙啶(calcein acetoxymethyl ester/propidium iodide,calcein AM/PI)试剂盒及体内酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测不同Fc突变体的毒性,结果表明突变后的重组蛋白Fc具有良好的生物相容性和安全性。最后,利用荧光标记Fc突变体,通过体内实验探究不同突变对血液半衰期的影响,成功筛选出血液半衰期显著提高的Fc5突变体。本研究为IgG4亚型的抗体及Fc融合蛋白药物的优化设计提供了理论依据与实践基础。 展开更多
关键词 IGG4 fc突变体 半衰期 点突变 抗体 融合蛋白
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ADRB2和FCER1B基因多态性与壮族咳嗽变异性哮喘患儿治疗效果及肺功能改善情况的相关性 被引量:8
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作者 陆玉娇 杨月容 +3 位作者 陈宇 罗柳 胡丽珊 米佳 《广西医学》 CAS 2022年第22期2618-2623,共6页
目的探讨肾上腺素能受体β2(ADRB2)和Ⅰ型Fcε受体β(FCER1B)基因多态性与壮族咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿治疗效果及肺功能改善情况的相关性。方法纳入88例壮族CVA患儿,检测其ADRB2基因rs1042713位点、FCER1B基因rs569108位点的基因型。... 目的探讨肾上腺素能受体β2(ADRB2)和Ⅰ型Fcε受体β(FCER1B)基因多态性与壮族咳嗽变异性哮喘(CVA)患儿治疗效果及肺功能改善情况的相关性。方法纳入88例壮族CVA患儿,检测其ADRB2基因rs1042713位点、FCER1B基因rs569108位点的基因型。随访患儿使用吸入性糖皮质激素治疗3个月后的疗效及肺功能改善情况。分析上述两个基因位点多态性与患儿治疗效果及治疗后肺功能改善情况的相关性。结果88例CVA患儿中,治疗好转67例(好转组)、无效21例(无效组),肺功能正常52例(肺功能正常组)、肺功能异常36例(肺功能异常组)。好转组与无效组之间、肺功能正常组与肺功能异常组之间ADRB2基因rs1042713位点基因型分布的差异均有统计学意义(均P<0.05),携带GG基因型患儿治疗后出现无效、肺功能异常的风险分别是携带AA/AG基因型患儿的4.833倍、7.636倍(均P<0.05)。好转组与无效组之间、肺功能正常组与肺功能异常组之间FCER1B基因rs569108位点基因型分布的差异均无统计学意义(均P>0.05)。结论壮族CVA患儿的吸入性糖皮质激素治疗效果及治疗后肺功能改善情况可能与ADRB2基因rs1042713位点多态性密切相关,而与FCER1B基因rs569108位点多态性可能无关。 展开更多
关键词 咳嗽变异性哮喘 肾上腺素能受体β2 Ⅰ型fcε受体β 基因多态性 吸入性糖皮质激素 治疗效果 肺功能 儿童
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阿柏西普类似药电荷异构体的药代动力学研究
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作者 安红 刘万卉 +3 位作者 沈振铎 沙春洁 杨博璐 赵燕燕 《烟台大学学报(自然科学与工程版)》 CAS 2019年第3期250-254,共5页
阿柏西普类似药是一种全人源化的重组Fc融合蛋白,经过proteinA柱纯化后分离制备得到3个等电点(pI)逐渐升高的电荷异构体组分,分别为Fr1、Fr2和Fr3;采用成像毛细管等电聚焦电泳、分子排阻色谱、肽图分析、寡糖分析和唾液酸分析进行表征。... 阿柏西普类似药是一种全人源化的重组Fc融合蛋白,经过proteinA柱纯化后分离制备得到3个等电点(pI)逐渐升高的电荷异构体组分,分别为Fr1、Fr2和Fr3;采用成像毛细管等电聚焦电泳、分子排阻色谱、肽图分析、寡糖分析和唾液酸分析进行表征。从Fr1到Fr3,pI值升高可能是C端赖氨酸含量逐渐升高和唾液酸Neu5Ac含量依次降低的结果。单次静脉给药SD雄性大鼠进行药代动力学(PK)研究,通过与阿柏西普进行对照,观察不同电荷异构体的PK特性,并初步揭示了机理。结果表明:从Fr1到Fr3,组分的AUC0-t和t1/2逐渐降低,清除率增加,推测可能是由于唾液酸Neu5Ac的含量降低造成的,并建议阿柏西普类似药的研制过程中要控制唾液酸Neu5Ac的含量。 展开更多
关键词 fc融合蛋白 阿柏西普 电荷异构体 药代动力学
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新型冠状病毒受体结合域-Fc融合蛋白表达及小鼠免疫原性
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作者 高飞霞 范蒋锋 +4 位作者 刘雪颖 张敏 郑眉 丁亚红 罗剑 《国际生物制品学杂志》 CAS 2023年第1期1-6,共6页
目的表达制备新型冠状病毒刺突蛋白的受体结合域(receptor binding domain, RBD)-Fc融合蛋白, 并评价其在小鼠模型中的免疫原性。方法将新型冠状病毒RBD与小鼠免疫球蛋白Fc段融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中表达并制备融合蛋白。将不同剂... 目的表达制备新型冠状病毒刺突蛋白的受体结合域(receptor binding domain, RBD)-Fc融合蛋白, 并评价其在小鼠模型中的免疫原性。方法将新型冠状病毒RBD与小鼠免疫球蛋白Fc段融合基因在中国仓鼠卵巢细胞中表达并制备融合蛋白。将不同剂量的RBD-Fc融合蛋白分别单独或辅以氢氧化铝佐剂免疫小鼠, 通过ELISA、假病毒中和试验、酶联免疫斑点试验检测诱导产生的体液和细胞免疫应答。结果 10 μg RBD-Fc融合蛋白辅以氢氧化铝佐剂能有效诱导小鼠产生良好的RBD特异性IgG抗体应答, 该抗体可阻断病毒RBD与细胞表面病毒受体的结合, 进一步研究表明该重组蛋白还诱导产生了针对原始毒株、Beta变异株和Delta变异株假病毒的中和抗体, 中和抗体滴度分别为1 566、336和270。结论制备的RBD-Fc融合蛋白具有较好的免疫原性, 可为开发COVID-19重组蛋白疫苗提供参考。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 受体结合域 免疫球蛋白fc片段 氢氧化铝佐剂 免疫原性 中和抗体 变异株
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