目的:寻找体内能够与Fbxl16相互作用的蛋白质,用以揭示该蛋白的功能及其在脊髓损伤修复过程中的作用.方法:通过RT-PCR技术克隆scirr1基因编码区序列,将其克隆入pSos载体以构建质粒pSos-scirr1.把该重组质粒表达的融合蛋白hSos-Fbxl16作...目的:寻找体内能够与Fbxl16相互作用的蛋白质,用以揭示该蛋白的功能及其在脊髓损伤修复过程中的作用.方法:通过RT-PCR技术克隆scirr1基因编码区序列,将其克隆入pSos载体以构建质粒pSos-scirr1.把该重组质粒表达的融合蛋白hSos-Fbxl16作为诱饵蛋白,用改良的酵母双杂交技术筛选大鼠脑cDNA文库中能与Fbxl16相互作用的蛋白质,最后用酵母双杂交回转实验对获得的相互作用的可靠性加以验证.结果:成功构建了融合蛋白表达质粒pSos-scirr1之后,筛选出了14个与Fbxl16阳性相互作用的蛋白质;通过回转实验验证,确定其中两个蛋白能与Fbxl16相互作用,分别是cAMP依赖蛋白激酶α型催化亚基(protein kinase,cAMP-de-pendent,catalytic,alpha,Prkaca)和衣被蛋白复合物ζ亚基(coatomer protein complex,subunit zeta1,Copz1).结论:Fbxl16和Prkaca的相互作用为解释cAMP通路与脊髓损伤的关系提供了新思路,提示Fbxl16与细胞内物质转运有关.展开更多
文摘目的:寻找体内能够与Fbxl16相互作用的蛋白质,用以揭示该蛋白的功能及其在脊髓损伤修复过程中的作用.方法:通过RT-PCR技术克隆scirr1基因编码区序列,将其克隆入pSos载体以构建质粒pSos-scirr1.把该重组质粒表达的融合蛋白hSos-Fbxl16作为诱饵蛋白,用改良的酵母双杂交技术筛选大鼠脑cDNA文库中能与Fbxl16相互作用的蛋白质,最后用酵母双杂交回转实验对获得的相互作用的可靠性加以验证.结果:成功构建了融合蛋白表达质粒pSos-scirr1之后,筛选出了14个与Fbxl16阳性相互作用的蛋白质;通过回转实验验证,确定其中两个蛋白能与Fbxl16相互作用,分别是cAMP依赖蛋白激酶α型催化亚基(protein kinase,cAMP-de-pendent,catalytic,alpha,Prkaca)和衣被蛋白复合物ζ亚基(coatomer protein complex,subunit zeta1,Copz1).结论:Fbxl16和Prkaca的相互作用为解释cAMP通路与脊髓损伤的关系提供了新思路,提示Fbxl16与细胞内物质转运有关.
