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题名质粒DNA Fast NGS测序方法的开发和应用
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作者
宋辉
曹文刚
肖晓文
杜军
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机构
北京擎科生物科技股份有限公司研究院
湖北擎科生物科技有限公司研发部
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出处
《生物技术进展》
2024年第4期594-600,共7页
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基金
鄂州市科学技术局2022年科技计划项目-重点研发专项。
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文摘
质粒DNA是最常用的基因运载工具,在基因合成技术中扮演着至关重要的角色。如何实现合成质粒DNA的准确且快速检测,是确保基因组完整性和提高基因合成效率的关键。尽管基于一代DNA的测序方法,其准确性已成为行业标准,但在检测通量、检测速度和检测成本等方面仍然存在局限性,这促使科学家们不断寻求新的解决方案。基于生物酶库,开发了DNA建库酶TN5,建立了高通量质粒DNA检测方案——Fast NGS。利用不同长度、不同质量的质粒DNA样本评估了Fast NGS的可行性,并对质粒DNA样本进行了高通量测序,最后对比了Fast NGS与Sanger测序的效率。结果表明,DNA建库酶TN5蛋白的纯度和质量符合二代测序要求。Fast NGS适用于3~8 kb基因合成质粒的测序检测,其检测通量高达2500个·12 h-1,测序成功率超过95%,测序准确性与一代测序相当,并且无明显序列偏好性。Fast NGS实现了质粒DNA的高通量、快速且低成本检测,为基因合成技术的发展提供了新的方向。
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关键词
fast
ngs
质粒DNA
高通量测序
TN5
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Keywords
fast ngs
plasmid DNA
high-throughput sequencing
TN5
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分类号
Q819
[生物学—生物工程]
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