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离子交换层析法制备人高纯FVIII制剂 被引量：9
1
作者 罗亮 袁进 牟蕾 《华西药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第3期174-176,共3页
目的 :用一种新的离子交换层析法从人血浆冷沉淀中制备高纯FVIII。方法 :溶解后冷沉淀经氢氧化铝吸附 ,低温下酸沉淀和聚乙二醇沉淀后用 0 .3%磷酸三正丁酯和 1%Tween 80处理以灭活脂包膜病毒 ,然后过DEAE FractogelTSK 6 5 0M层析柱。... 目的 :用一种新的离子交换层析法从人血浆冷沉淀中制备高纯FVIII。方法 :溶解后冷沉淀经氢氧化铝吸附 ,低温下酸沉淀和聚乙二醇沉淀后用 0 .3%磷酸三正丁酯和 1%Tween 80处理以灭活脂包膜病毒 ,然后过DEAE FractogelTSK 6 5 0M层析柱。绝大部分杂蛋白和磷酸三正丁酯 Tween 80直接流穿 ,而吸附的FVIII凝集活性蛋白通过增加离子强度洗脱 ,并直接除菌分装而无需超滤或加入蛋白稳定剂。结果 :层析收率达 70 %～ 90 % ,制品特异性活性超过 10 0IU·mg-1,相对血浆纯化倍数超过 5 0 0 0倍。结论 :该制剂纯度高于传统FVIII制剂 。 展开更多
关键词 离子交换 层析法 fviii制剂 甲型血友病 治疗
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血浆相关因子对重组FVIII稳定循环及降解途径的影响 被引量：3
2
作者 伍立恒 李德款 +4 位作者 连通 李成 林方昭 宋春雷 梁洪 《药物生物技术》 CAS 2023年第3期234-238,共5页
探究本研究中的重组人凝血因子VIII(rhFVIII)与血管性血友病因子(vWF)的结合力;FVIII激活后的活化FVIII(FVIIIa),经活化蛋白C(APC)介导降解的速率以及在FVIII抑制物存在条件下的生物活性变化,并与市售重组FVIII产品(ADVATE)与血源FVIII... 探究本研究中的重组人凝血因子VIII(rhFVIII)与血管性血友病因子(vWF)的结合力;FVIII激活后的活化FVIII(FVIIIa),经活化蛋白C(APC)介导降解的速率以及在FVIII抑制物存在条件下的生物活性变化,并与市售重组FVIII产品(ADVATE)与血源FVIII产品进行比较。将FVIII加至人vWF(无FVIII)中进行孵育,通过ELISA法检测FVIII与vWF的结合情况,计算出平衡解离常数进行比较;利用过量凝血酶激活获得FVIIIa,加入APC后通过检测剩余保留活性的FVIIIa计算出灭活速率;制备抑制物模拟血浆,检测不同抑制物浓度下FVIII的剩余活性,计算FVIIIa抑制率,并与ADVATE与血源FVIII进行比较。本研究的rhFVIII对APC介导降解的敏感性与ADVATE及血源FVIII产品相比没有统计学差异(P>0.05)。在vWF结合力方面,本研究rhFVIII与ADVATE没有统计学差异(P>0.05)。在含有抑制物血浆中,本研究rhFVIII的活性抑制率与ADVATE及血源FVIII产品均没有统计学差异(P>0.05)。证实了本研究rhFVIII可与vWF稳定结合,激活后的rhFVIIIa可经APC途径正常降解,为A型血友病患者的治疗提供了新的选择。 展开更多
关键词 血友病A 重组人凝血因子VIII 活化蛋白C 血管性血友病因子 fviii抑制物
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内皮细胞因子TM、vWF、凝血因子Ⅶ、Ⅷ和D-二聚体在肝移植排斥反应变化的研究 被引量：2
3
作者 温春光 罗绍凯 +5 位作者 何晓顺 李娟 刘敏 刘莉莉 邹外一 彭爱华 《肝胆外科杂志》 2004年第1期47-50,共4页
目的　为了解肝移植出现排斥反应患者内皮细胞因子、凝血因子和纤溶功能的变化 ,了解这些因素在监测排斥反应、疗效和判断预后的作用。方法　随机观察肝移植 4 1例 ,其中出现排斥反应 1 6例 (急性排斥 1 2例、慢性排斥 4例 )。在术前、... 目的　为了解肝移植出现排斥反应患者内皮细胞因子、凝血因子和纤溶功能的变化 ,了解这些因素在监测排斥反应、疗效和判断预后的作用。方法　随机观察肝移植 4 1例 ,其中出现排斥反应 1 6例 (急性排斥 1 2例、慢性排斥 4例 )。在术前、术后检测血浆血栓调节蛋白 (STM)、血管性血友病因子 (v WF)、因子 V (FV )、V (FV )和 D-二聚体 (D- D)含量。结果　 1有排斥者术前 FVII含量减少 (6 9.2± 7.2 % ) ,D- D含量则升高 (1 .1 9± 0 .2 0 ng/ L) ;2有排斥者术后、排斥前 2天 FVII进一步减少 (分别为 75 .7± 3.1 ,6 0 .7± 4 .5 ) ,而 STM(分别为 5 .5 8± 0 .4 2 m g/ m l,5 .93± 0 .4 5 ng/ m l)、v WF(分别为 1 0 1 .2± 4 .6 % ,1 0 4 .3± 5 .8% ) ;D- D(分别为 2 .89± 0 .75 ,5 .2 8± 0 .81 )则明显升高 ;3急性排斥较慢性排斥 ,冲击治疗无效组与有效组 ,治疗后死亡组与生存组比较 ,STM和 D- D均明显升高。结论　本研究结果初步显示 :1血浆 STM　 v WF、D- D含量增高和FVII含量减少 ,可作为肝移植排斥早期预报指标 ,其中 STM的特异性最高 ;2血 STM、v WF、D- D和 FVII可作为监测肝移植排斥的实验室检测项目和指标 ;3血 STM和 D- D可作为区分急性与慢性排斥。 展开更多
关键词 肝移植 排斥反应 血栓调节蛋白(TM):血管性血友病因子(vWF)因子VⅡ(FVⅡ) 因子VⅢ(FVⅡ) D-二聚体(D-dimer D-D)
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凝血因子Ⅷ制剂及其临床应用 被引量：3
4
作者 李燕 《中国医学物理学杂志》 CSCD 2005年第A05期656-657,共2页
本文主要介绍了凝血因子Ⅷ制剂冷沉淀和浓缩物的制备方法和性质特点,临床应用适应症、输注剂量、使用方法、注意事项和不良反应及预防,仅供同道参考。
关键词 因子Ⅷ(FⅧ) 冷沉淀 FⅧ浓缩物 甲型血友病
暂未订购
一种分泌和活性改善的新型人凝血因子VIII变构体
5
作者 缪静 刘泽隆 +2 位作者 屈慧鸽 迟晓艳 朱甫祥 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期708-714,共7页
甲型血友病基因治疗疗效受凝血因子VIII(FVIII)表达水平低下的制约。FVIII分泌低效,且活化产物的A2区易于自发脱落使其容易失活。犬属FVIII(cFVIII)的胞内Furin水解酶裂解位点变异,使其主要以单链多肽形式分泌,而人源FVIII(hFVIII)受Fu... 甲型血友病基因治疗疗效受凝血因子VIII(FVIII)表达水平低下的制约。FVIII分泌低效,且活化产物的A2区易于自发脱落使其容易失活。犬属FVIII(cFVIII)的胞内Furin水解酶裂解位点变异,使其主要以单链多肽形式分泌,而人源FVIII(hFVIII)受Furin水解,主要以重链(HC)和轻链(LC)非共价二聚体形式分泌,这种差异使cFVIII分泌性和比活性均高于hFVIII。我们前期的工作在人源B结构域缺失型FVIII(hBDD-FVIII)HC的A2与轻链LC的A3区引入链间二硫键表明,HC和LC二聚体的分泌性得到改善,活化产物稳定性和血浆凝血活性提高。本文构建一种新型hBDD-FVIII变构体F8C-RH,包含链间二硫键突变M226C/D1828C和Furin水解位点突变R1645H。培养的CHO和BHK细胞转基因表明,F8C-RH的分泌性和活性有明显改善。小鼠门静脉注射肝靶向转基因,血浆F8C-RH浓度和凝血活性均明显升高。为进一步腺相关病毒(AAV)载体转F8C-RH的甲型血友病基因治疗研究提供了依据。 展开更多
关键词 凝血因子VIII 新型人BDD-fviii变构体 分泌 活性
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