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从我国分离的3株蛙虹彩病毒与FV3主要衣壳蛋白基因同源性的比较 被引量:2
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作者 张奇亚 肖枫 +1 位作者 李正秋 桂建芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期83-85,共3页
Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological ch... Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological characterisitics showed that the RGV isolates belong to genus Ranavirus. The DNA sequence analysis of the 5’end of the major capsid protein(MCP) gene of RGV isolates by PCR amplification produced a 531bp fragment.DNA templates were prepared from cells infected with different RGV isolates and the specific primers designed were based on highly conserved region at the 5′ of the gene encoding Frog virus 3(FV3) MCP, which is the typical species of the genus Ranavirus.The PCR products indicated that the nucleotide sequence of MCP gene of the RGV9506,RGV9807 and RGV9808,showed 99.6%, 99.8% and 98.4% homology respectively with the corresponding region of the MCP gene of FV3. 展开更多
关键词 蛙虹彩病毒 fv3 PCR 衣壳蛋白基因 基因同源性
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1株沼泽绿蛙源蛙病毒的分离鉴定及系统发育分析
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作者 田思璐 袁羽 +4 位作者 徐乐 欧阳萍 陈德芳 黄小丽 耿毅 《华中农业大学学报》 北大核心 2025年第2期258-264,共7页
为探究四川某养殖场沼泽绿蛙(Rana grylio)暴发性高死亡率疾病的病因,对病蛙进行病理学检查和病原分离,并结合电镜观察、PCR检测和系统发育分析对分离病原进行鉴定。患病蛙主要病症为皮肤溃疡与四肢肿胀;剖检见肝、脾与肾肿大。组织病... 为探究四川某养殖场沼泽绿蛙(Rana grylio)暴发性高死亡率疾病的病因,对病蛙进行病理学检查和病原分离,并结合电镜观察、PCR检测和系统发育分析对分离病原进行鉴定。患病蛙主要病症为皮肤溃疡与四肢肿胀;剖检见肝、脾与肾肿大。组织病理学观察见肝、脾、肾与肠道等组织器官发生变性、坏死与炎症反应。接种病料的鲤鱼上皮瘤细胞25℃培养4 d呈典型细胞病变效应,TCID50为104.12/0.1 mL。电镜观察到大量正六边形、对角线直径约165 nm的病毒粒子呈晶格状排列。对内脏组织及接种细胞进行蛙病毒主要衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因的特异性PCR检测,结果均为阳性。基于MCP基因全序列的同源性和遗传进化分析显示,分离病毒与蛙病毒属病毒相似性在99%以上,且属于FV3类群。以上结果表明分离病毒(TSL210813)为蛙病毒,是本次沼泽绿蛙疫病的病因。 展开更多
关键词 沼泽绿蛙 蛙病毒 fv3 蛙病毒主要衣壳蛋白基因 病理损伤
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从我国分离的3株蛙虹彩病毒与蛙病毒3型主要衣壳蛋白基因同源性的比较 被引量:13
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作者 张奇亚 肖枫 +1 位作者 李正秋 桂建芳 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期372-374,共3页
Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm-raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological ch... Since 1995,three viral isolates named RGV9506,RGV9807 and RGV9808 associated with frog mortality were isolated from farm-raised frogs (Rana grylio virus,RGV) in China.Both ultrastructural morphology and serological characterisitics had shown that the RGV isolates belong to genus Ranavirus. The DNA sequence analysis of the 5′end of the major capsid protein(MCP) gene of RGV isolates by PCR amplification produced a 531bp fragment.DNA templates were prepared from cells infected with different RGV isolates and the specific primers designed were based on highly conserved region at the 5′ of the gene encoding Frog virus 3(FV3) MCP, which is the typical species of the genus Ranavirus.The PCR products indicate that the nucleotide sequence of MCP gene of the RGV9506,RGV9807 and RGV9808 showed 99.6%, 99.8% and 98.4% homology respectively with the corresponding region of the MCP gene of FV3. 展开更多
关键词 蛙虹彩病毒 蛙病毒3型 fv3 聚合酶链式反应 衣壳蛋白基因 基因同源性 水产动物
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蛙病毒PCR检测方法的建立与比较分析
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作者 李亚男 刘春 +2 位作者 林华剑 秦真东 林蠡 《水产学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期155-163,共9页
为了进一步丰富蛙虹彩病毒检测方法,实验针对蛙病毒3型(frog virus 3,FV3)核衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守区设计一对特异性引物,并选取另外2种蛙病毒PCR检测方法进行对比实验,通过反应体系的优化、反应特异性和敏感性实... 为了进一步丰富蛙虹彩病毒检测方法,实验针对蛙病毒3型(frog virus 3,FV3)核衣壳蛋白(major capsid protein,MCP)基因保守区设计一对特异性引物,并选取另外2种蛙病毒PCR检测方法进行对比实验,通过反应体系的优化、反应特异性和敏感性实验,建立了一种针对FV3的PCR检测方法。结果显示,该方法最低检测限可达1.2个拷贝数的病毒粒子,与神经坏死病毒、虾血细胞虹彩病毒、大口黑鲈虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒、鲤浮肿病毒、传染性脾肾坏死病毒、加州鲈弹状病毒等常见水产动物致病毒株无交叉反应。临床样品检测表明,该方法所获得的检测结果与另外2种方法一致,结果可靠。本研究所建立的FV3 PCR检测方法,具有简便、快速、敏感度好、特异性高、低成本等特点,可用于FV3蛙病毒的快速诊断和分子流行病学调研。 展开更多
关键词 蛙病毒 虹彩病毒 蛙病毒3型(fv3) PCR
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蛙病毒同源蛋白RGV-27R和ADRV-85L的表达及其免疫原性分析 被引量:1
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作者 明成玥 柯飞 张奇亚 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期926-934,共9页
沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)同属虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员,是引起水产动物高死亡率的病原。其同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L与蛙病毒代表株蛙病毒... 沼泽绿牛蛙病毒(Rana grylio virus,RGV)和大鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus,ADRV)同属虹彩病毒科(Iridoviridae)蛙病毒属(Ranavirus)成员,是引起水产动物高死亡率的病原。其同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L与蛙病毒代表株蛙病毒3型(Frog virus 3,FV3)25R基因所编码的大小为31kD的早期蛋白P31K(FV3-P31K)同一性超过99%。我们在观察和比较RGV与ADRV感染大鲵胸腺细胞(Giant salamander thymus cell,GSTC)显微病变的基础上,将ADRV-85L和RGV-27R基因分别克隆到原核表达载体pET-32a与pMAL-p5X中,转化宿主菌E·coli BL21(DE3)并诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(Sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)检测,对这两种蛋白的原核表达及其产物免疫原性进行分析。结果显示这两种基因在载体pET-32a中的表达效率要显著高于pMAL-p5X。随后,取高效诱导表达的pET-32a-RGV-27R产物,经Ni-NTA His-Bind亲和层析分离提纯,获得浓度为1.2 mg/mL的融合蛋白His-RGV-27R,用其免疫动物,制备了抗体27R-Ab,酶联免疫吸附法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)检测抗体的效价为1∶6.25×10~6。用经正常大肠杆菌菌液和正常GSTC细胞悬液吸附处理后的抗体作为一抗,对被RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液进行Western Blot检测,并以重组原核质粒表达的融合蛋白His-RGV-27R和HisADRV-85L作为阳性对照,以正常GSTC细胞悬液为阴性对照,分别从RGV或ADRV感染的GSTC细胞悬液中,检出大小同为31kD的特异性蛋白条带。本研究证实两种蛙病毒同源早期蛋白RGV-27R和ADRV-85L不仅都能在两栖动物细胞中表达,且具有相同的抗原特性,这为深入研究这类病毒蛋白对蛙病毒复制的影响及其与宿主相互作用的分子机制提供了实验材料。 展开更多
关键词 沼泽绿牛蛙病毒(RGV) 大鲵蛙病毒(ADRV) 蛙病毒3型早期蛋白(P31K) 蛋白表达 免疫原性
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