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Men1通过调控FTO/ALKBH5表达和减少m6A甲基化而抑制小鼠肾纤维化 被引量:1
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作者 杨云巧 田倩婷 +8 位作者 潘婷 朱佳美 王子名 王旭艳 张拓 周宇霞 郭兵 陈腾祥 金帮明 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期2193-2201,共9页
目的:探讨Men1基因在小鼠肾纤维化中的调控作用及分子机制。方法:使用C57BL/6小鼠建立单侧输尿管结扎(UUO)诱导的小鼠肾纤维化模型,随机分为sham组、UUO-3 d组、UUO-7 d组和UUO-14 d组,每组15只;构建条件性Men1敲除的小鼠模型,将Men1敲... 目的:探讨Men1基因在小鼠肾纤维化中的调控作用及分子机制。方法:使用C57BL/6小鼠建立单侧输尿管结扎(UUO)诱导的小鼠肾纤维化模型,随机分为sham组、UUO-3 d组、UUO-7 d组和UUO-14 d组,每组15只;构建条件性Men1敲除的小鼠模型,将Men1敲除的C57BL/6小鼠随机分为sham-Men1-WT、sham-Men1-CKO、UUO-Men1-WT和UUO-Men1-CKO组,每组8只。采用HE染色、Masson染色和天狼星红染色检测UUO诱导肾损伤及肾纤维化分析。构建MEN1敲除的人肾小管上皮HK-2细胞。通过RT-qPCR、Western blot、免疫组化染色和免疫荧光染色检测UUO小鼠肾组织和体外转化生长因子β(TGF-β;10μg/L)处理的HK-2细胞中MEN1、纤维化标志物(α-平滑肌肌动蛋白、Ⅲ型胶原和纤连蛋白1)、m^(6)A相关蛋白[甲基转移酶样蛋白3(METTL3)、METTL14、YTH结构域家族蛋白2(YTHDF2)、AlkB同源蛋白5(ALKBH5)和脂肪质量及肥胖相关蛋白(FTO)]的mRNA和蛋白表达;斑点印迹(dot blot)实验检测小鼠肾组织和HK-2细胞中m^(6)A甲基化水平。结果:Men1的表达随着肾纤维化加剧逐渐降低(P<0.01);Men1抑制肾组织中纤维化标志物的表达,Men1敲除增加UUO和TGF-β诱导的纤维化胶原的累积(P<0.01);Men1敲除小鼠肾组织和HK-2细胞中FTO和ALKBH5的表达下调(P<0.01),m^(6)A甲基化修饰水平升高(P<0.01);过表达FTO显著降低Men1缺失引起的m^(6)A修饰累积和肾纤维化(P<0.01)。结论:Men1基因缺失促进小鼠肾纤维化;Men1通过调控FTO/ALKBH5的表达降低m^(6)A修饰,从而抑制小鼠肾纤维化。 展开更多
关键词 MEN1基因 肾纤维化 单侧输尿管结扎 m6A RNA甲基化 fto/alkbh5
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猪m^6A去甲基化酶FTO、ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌F18感染抗性的关系分析 被引量:2
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作者 齐晓艺 杨荔 +2 位作者 吴正常 包文斌 吴圣龙 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第9期2960-2967,共8页
为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRN... 为了探讨猪6-甲基腺嘌呤(m^6A)去甲基化酶mRNA表达水平与仔猪大肠杆菌F18抗性的关系,本研究运用实时荧光定量PCR方法检测m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因在35日龄苏太猪断奶仔猪大肠杆菌F18抗性型和敏感型个体十二指肠和空肠组织中的mRNA表达差异,同时分别利用F18ab、F18ac大肠杆菌菌体刺激和内毒素LPS诱导猪小肠上皮细胞(IPEC-J2),检测FTO、ALKBH5基因表达变化。结果表明,FTO、ALKBH5基因在抗性型个体十二指肠和空肠中的表达量均极显著或显著高于敏感型个体(P<0.01,P<0.05);不同F18大肠杆菌菌体刺激IPEC-J2细胞后,FTO基因表达水平均无显著变化(P>0.05),而ALKBH5基因在F18ac刺激后表达量显著上调(P<0.05);LPS诱导4 h时,FTO和ALKBH5基因表达量均显著上调(P<0.05)。本研究在细胞和个体水平上初步验证并发现了m^6A去甲基化酶FTO和ALKBH5基因表达水平与大肠杆菌感染仔猪密切相关,为今后深入研究RNA去甲基化修饰在仔猪细菌性腹泻调控中的作用机制提供了理论基础。 展开更多
关键词 m6A甲基化 fto基因 alkbh5基因 大肠杆菌
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞增殖与迁移能力的影响
3
作者 刘芷言 林丽婵 +7 位作者 刘震宇 沙纪名 刘鹏 毛遂 张云森 李锐 张野 陶辉 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第2期235-241,共7页
目的探究N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响。方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型。... 目的探究N 6-甲基腺苷(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对高糖诱导心肌成纤维细胞(cardiac fibroblasts,CFs)增殖与迁移能力的影响。方法解剖消化新生乳鼠的心脏提取原代CFs,在光学显微镜及共聚焦显微镜下鉴定细胞类型。使用高糖培养基(33 mmol·L-1葡萄糖)诱导细胞活化,使用ALKBH5表达载体转染细胞构建ALKBH5过表达模型。通过免疫荧光染色、Western blot和RT-qPCR检测CFs中去甲基化酶ALKBH5表达变化;Dot blot方法检测m^(6)A水平的变化;Western blot检测增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)及纤维化关键指标Ⅰ型胶原的表达变化;EdU染色法检测CFs增殖能力;Transwell迁移实验检测CFs的迁移能力。结果在高糖诱导下,CFs中ALKBH5的表达量明显下降,m^(6)A水平明显上升;同时增殖指标PCNA和纤维化指标Ⅰ型胶原的表达量明显升高,细胞增殖和迁移能力明显提升。过表达ALKBH5逆转了上述变化。结论ALKBH5过表达可抑制PCNA和Ⅰ型胶原的表达,并减弱CFs的增殖和迁移能力,其作用可能与m^(6)A甲基化修饰有关。 展开更多
关键词 RNA甲基化 alkbh5 心肌成纤维细胞 增殖 迁移 心肌纤维化
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N^(6)-甲基腺嘌呤去甲基化酶FTO和ALKBH5在肿瘤中的研究进展 被引量:1
4
作者 何宜宸 陈依梦 吴昌平 《肿瘤》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期280-295,共16页
N^(6)-甲基腺嘌呤(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)作为真核生物m RNA最常见的转录后修饰形式,对m RNA的可变剪接、5’和3’端加工、出核以及翻译等行为有着广泛的影响,并参与了多种机体的生理活动。随着m^(6)A去甲基化酶脂肪和肥胖相关... N^(6)-甲基腺嘌呤(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)作为真核生物m RNA最常见的转录后修饰形式,对m RNA的可变剪接、5’和3’端加工、出核以及翻译等行为有着广泛的影响,并参与了多种机体的生理活动。随着m^(6)A去甲基化酶脂肪和肥胖相关基因蛋白(fat mass and obesity-associated protein,F TO)以及Alk B同源蛋白5(AlkBhomologue5,ALKBH5)的发现,m^(6)A修饰调节被认为是动态可逆的。肿瘤中异常表达的F TO和ALKBH5蛋白往往导致m^(6)A修饰水平紊乱,这对肿瘤干细胞维持以及肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭乃至对放化疗的敏感性都有着重大影响。在大多数肿瘤中,异常表达的FTO和ALKBH5蛋白发挥着促癌效应,这使得对m^(6)A去甲基化酶抑制剂的探索成为了近年来的研究热点。然而,由于FTO和ALKBH5同属于Alk B双加氧酶家族,都有着保守的共同结构,这造成高特异性抑制剂的开发困难重重。本文将综述m^(6)A去甲基化酶在各种肿瘤中的作用机制以及生物学效应,同时还将概述当前m^(6)A去甲基化酶抑制剂的研究进展,以期全面了解m^(6)A去甲基化酶作为肿瘤诊断和预后生物标志物或是关键治疗靶点的可能性。 展开更多
关键词 肿瘤 AlkB同源蛋白5 RNA脱甲基酶 fto 酶抑制剂
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ALKBH5介导NLRP3的m^(6)A修饰促进心肌梗死小鼠心肌细胞焦亡
5
作者 翟苗苗 尹俭俭 +5 位作者 王智墨 周月姣 于庆文 王沛 张莉蓉 韩圣娜 《中国药理学通报》 北大核心 2025年第3期434-444,共11页
目的N 6-甲基腺苷修饰(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心肌细胞焦亡的影响。方法分别利用腺相关病毒敲低ALKBH5建立左冠状动脉前降支结扎手术的MI模型和采用小干扰RNA敲低目的... 目的N 6-甲基腺苷修饰(N 6-methyladenosine,m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5对心肌梗死(myocardial infarction,MI)小鼠心肌细胞焦亡的影响。方法分别利用腺相关病毒敲低ALKBH5建立左冠状动脉前降支结扎手术的MI模型和采用小干扰RNA敲低目的基因的方法建立小鼠心肌细胞(HL-1)缺氧模型,观察ALKBH5对MI小鼠和缺氧HL-1细胞焦亡的影响。随后在细胞水平进行机制研究,通过RNA pull-down和RNA免疫共沉淀(RIP)实验检测ALKBH5和阅读蛋白IGF2BP2与NLRP3 mRNA的相互结合,应用MeRIP-qPCR方法测定ALKBH5对NLRP3的mRNA的m^(6)A水平的影响。RNA稳定性实验检测ALKBH5和IGF2BP2对NLRP3 mRNA稳定性的影响。结果体内和体外敲低ALKBH5均可抑制NLRP3炎性小体活化缓解MI小鼠和缺氧HL-1细胞的焦亡。机制上,结果显示在HL-1细胞中NLRP3 mRNA能够和ALKBH5蛋白相互结合;敲低ALKBH5可以增加NLRP3的m^(6)A水平和降低NLRP3 mRNA稳定性;随后证实NLRP3 mRNA和IGF2BP2的蛋白相互结合;敲低IGF2BP2增加NLRP3的mRNA稳定性。Rescue实验表明敲低IGF2BP2可以逆转敲低ALKBH5引起的NLRP3 mRNA表达的减少。结论ALKBH5通过m^(6)A修饰的方式介导NLRP3炎性小体活化参与MI小鼠的心肌细胞焦亡。 展开更多
关键词 心肌梗死 NLRP3炎性小体 alkbh5 m^(6)A修饰 IGF2BP2 细胞焦亡
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ALKBH5在肿瘤和肿瘤免疫中的调控作用及相关药物研究进展
6
作者 高雨雨 熊心怡 +1 位作者 陶怀 何迎春 《生命科学研究》 2025年第2期104-114,共11页
RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化通过影响RNA代谢的多个途径调节基因的表达。研究发现,ALKBH5在许多恶性肿瘤的进程中以m6A依赖性方式发挥关键调控作用。因此,探究A... RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)介导的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m6A)去甲基化通过影响RNA代谢的多个途径调节基因的表达。研究发现,ALKBH5在许多恶性肿瘤的进程中以m6A依赖性方式发挥关键调控作用。因此,探究ALKBH5在肿瘤中发挥的生物学功能和机制,对攻克人类恶性肿瘤和研发相关靶向药物具有重要意义。本综述重点阐述了ALKBH5在肿瘤中发挥各种生物学功能的分子机制和其在肿瘤相关免疫中的作用,并且讨论了靶向ALKBH5的肿瘤治疗策略及临床意义,以期为ALKBH5介导肿瘤发生发展分子机制的深入研究和相关防治药物的研发提供新的思路和见解。 展开更多
关键词 alkB同源物5(alkbh5) N6-甲基腺苷(m6A) 肿瘤 肿瘤免疫 治疗策略 药物研发
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TGF-β1/Smad通路下调ALKBH5调控巨噬细胞极化改善大鼠肺纤维化的作用机制
7
作者 岱德羽 党慧 +2 位作者 王雪 王春雨 侯冬华 《河北医学》 2025年第10期1625-1632,共8页
目的:探讨下调AlkB同源物5(ALKBH5)在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)大鼠中的作用,并基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路探讨其潜在的作用机制。方法:采用气管内滴注博来霉素制备PF大鼠模型。将造模成功的SD大鼠分为模型组(PF... 目的:探讨下调AlkB同源物5(ALKBH5)在肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)大鼠中的作用,并基于转化生长因子β1(TGF-β1)/Smad信号通路探讨其潜在的作用机制。方法:采用气管内滴注博来霉素制备PF大鼠模型。将造模成功的SD大鼠分为模型组(PF+不给予任何药物处理)、si-NC组(PF+转染si-NC,尾静脉注射)、si-ALKBH5组(PF+转染si-ALKBH5,尾静脉注射)和通路激活剂组(PF+转染si-ALKBH5+30mg/kg的TGF-β1通路激活剂SRI-011381,尾静脉注射)。另选12只正常大鼠作为对照组。采用RT-qPCR方法检测肺组织中ALKBH5 mRNA、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA、白细胞分化抗原86(CD86)mRNA、A精氨酸酶-1(Arg-1)mRNA、甘露糖受体(CD206)mRNA水平;肺功能检测仪检测各组大鼠组织衰减(G)、呼吸系统阻力(Rrs)、呼吸系统顺应性(Crs)和组织弹性(H);采用HE、Masson染色进行肺脏病理组织学分析;采用Western Blot法检测ALKBH5、I型胶原蛋白(Col I)、纤连蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和TGF-β1/Smad通路相关蛋白表达水平。结果:相较于对照组,模型组大鼠肺结构被破坏,肺泡间隔增厚,肺泡上皮细胞坏死,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著降低(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著升高(P<0.05);相较于模型组和si-NC组,si-ALKBH5组和通路激活剂组肺泡隔轻度增厚,肺组织结构较为完整,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著增加(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著降低(P<0.05);相较于通路激活剂组,si-ALKBH5组大鼠肺组织损伤程度有所改善,G、Crs、Arg-1 mRNA、CD206 mRNA水平显著增加(P<0.05),ALKBH5 mRNA及蛋白、Rrs、H、胶原纤维沉积、Col I、FN、α-SMA、iNOS mRNA、CD86 mRNA、TGF-β1、p-Smad2、p-Smad3水平显著降低(P<0.05)。结论:下调ALKBH5能够缓解肺组织病理损伤和胶原沉积,减轻肺功能损伤,抑制大鼠PF,抑制巨噬细胞向M2型极化,其机制可能与抑制TGF-β1/Smad信号通路有关。 展开更多
关键词 alkbh5 肺纤维化 巨噬细胞极化 TGF-β1/Smad通路
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5在缺血性心血管疾病中的作用
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作者 高源 莫晗 +3 位作者 仝国鼎 王智墨 刘羿君 韩圣娜 《生理科学进展》 北大核心 2025年第3期296-302,共7页
N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是一种转录后RNA修饰,是最丰富的RNA化学修饰类型之一。m^(6)A作为分子开关,在心血管疾病、中枢神经系统和癌症等一系列疾病的发生发展过程中发挥作用。m^(6)A甲基化修饰是动态可逆的,包... N^(6)-甲基腺苷(N^(6)-methyladenosine,m^(6)A)是一种转录后RNA修饰,是最丰富的RNA化学修饰类型之一。m^(6)A作为分子开关,在心血管疾病、中枢神经系统和癌症等一系列疾病的发生发展过程中发挥作用。m^(6)A甲基化修饰是动态可逆的,包括甲基化转移酶(writers)、去甲基化酶(erasers)和阅读蛋白(readers)等共同参与。RNA去甲基化酶alkB同源物5(alkB homolog 5,ALKBH5)可以消除靶RNA上的甲基化修饰。越来越多的证据表明ALKBH5有可能作为特定疾病的治疗靶点。本文论述了ALKBH5的结构特点、生物学功能以及其在缺血性心血管疾病中作用的研究进展,并关注靶向ALKBH5的小分子抑制剂在心血管疾病中的应用。 展开更多
关键词 N^(6)-甲基腺苷 alkbh5 心血管疾病 小分子抑制剂
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CORRECTION:MiR-150-5p Inhibits Cell Proliferation and Metastasis by Targeting FTO in Osteosarcoma
9
作者 Lichen XU PAN ZHANG +2 位作者 GUIQI ZHANG ZHAOLIANG SHEN XIZHUANG BAI 《Oncology Research》 2025年第7期1797-1798,共2页
In the article“MiR-150-5p inhibits cell proliferation and metastasis by targeting FTO in osteosarcoma”(Oncology Research.2024 Oct 16;32(11):1777-1789.doi:10.32604/or.2024.047704),an inadvertent error occurred during... In the article“MiR-150-5p inhibits cell proliferation and metastasis by targeting FTO in osteosarcoma”(Oncology Research.2024 Oct 16;32(11):1777-1789.doi:10.32604/or.2024.047704),an inadvertent error occurred during the compilation of Figs.3b and 6c.This needed corrections to ensure the accuracy and integrity of the data presented. 展开更多
关键词 Fat mass and obesity associated(fto) MiR-150-5p Oosteosarcoma(OS) Cell proliferation Cell metastasis EXOSOME
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ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌细胞上皮间质转化和血管生成并增强其侵袭和转移 被引量:8
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作者 徐小艳 王建君 +3 位作者 闫琛 李川 刘微 杨金花 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第4期355-361,共7页
目的探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋... 目的探讨乳腺浸润性导管癌烷基化修复蛋白B同源物5(ALKBH5)与上皮间质转化(EMT)和血管生成相关蛋白表达的相关性及其与临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR检测原发性乳腺浸润性导管癌组织及对应癌旁组织中ALKBH5、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)、基质金属蛋白酶9(MMP9)、血管内皮生长因子(VEGF)的mRNA表达,免疫组织化学染色法检测ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白表达,用χ^(2)检验分析其与临床病理特征的关系,并采用Spearman相关分析法分析蛋白表达的相关性。采用Kaplan-Meier法评估ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的异常表达与乳腺浸润性导管癌患者无病生存期之间的关系,Cox回归模型分析ALKBH5、E-cadherin、MMP9、VEGF蛋白的表达和临床病理参数与乳腺浸润性导管癌患者预后的关系。结果与癌旁组织相比,ALKBH5、MMP9和VEGF的mRNA和蛋白在乳腺浸润性导管癌组织高表达,E-cadherin表达降低。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白在低分化乳腺癌组织、淋巴结有转移、TNM分期Ⅲ+Ⅳ期的表达率较高;肿瘤直径越大,ALKBH5和VEGF表达率越高。E-cadherin在高分化乳腺癌组织、淋巴结无转移、TNM分期Ⅰ+Ⅱ期表达率较高。Spearman相关分析结果显示,乳腺浸润性导管癌中ALKBH5与E-cadherin表达呈负相关,ALKBH5与MMP9和VEGF表达均呈正相关。ALKBH5、MMP9和VEGF蛋白高表达者的无病生存率均分别低于低表达者,E-cadherin蛋白高表达者无病生存率高于低表达者。Cox回归模型分析显示,ALKBH5和淋巴结转移是乳腺浸润性导管癌预后的独立危险因素。结论ALKBH5促进乳腺浸润性导管癌侵袭和转移可能与增强乳腺导管癌细胞的EMT和血管生成有关。 展开更多
关键词 乳腺浸润性导管癌 烷基化修复蛋白B同源物5(alkbh5) 上皮间质转化(EMT) 临床病理特征
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ALKBH5对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响 被引量:6
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作者 陆瑛 王大为 +4 位作者 何俊波 周朦 曾建 龚爱华 徐岷 《中国细胞生物学学报》 CAS CSCD 2017年第7期865-872,共8页
该研究探讨了6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^6A)去甲基酶ALKBH5(alk B homolog5)对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响。通过数据库分析ALKBH5在胃癌组织中的表达水平;Real-time PCR和Western blot检测ALKBH5在胃癌细胞中表达水平;用sh... 该研究探讨了6-甲基腺嘌呤(N6-methyladenosine,m^6A)去甲基酶ALKBH5(alk B homolog5)对人胃癌AGS细胞迁移和侵袭的影响。通过数据库分析ALKBH5在胃癌组织中的表达水平;Real-time PCR和Western blot检测ALKBH5在胃癌细胞中表达水平;用sh-EGFP和sh-ALKBH5质粒转染人胃腺癌AGS细胞,Transwell实验检测细胞的迁移和侵袭能力,细胞划痕实验进一步检测细胞的迁移能力;用Western blot检测上皮–间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白质的变化。结果显示,弥漫性胃腺癌中ALKBH5的m RNA水平明显低于正常胃组织和其他类型的胃癌组织,且其基因拷贝数也明显低于正常胃组织。在胃癌细胞系中,AGS细胞ALKBH5蛋白质和m RNA水平最高,sh-ALKBH5干扰能明显促进AGS细胞迁移和侵袭能力,且下调其上皮指标水平,而上调间质指标水平。上述结果提示,ALKBH5在胃癌组织中可能是一个抑癌基因,与胃癌细胞的迁移和侵袭能力负相关。 展开更多
关键词 alkbh5 m6A去甲基酶 上皮–间质转化 胃癌 细胞迁移 细胞侵袭
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ALKBH5通过抑制上皮-间质转化降低人滋养细胞的迁移和侵袭能力 被引量:3
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作者 何建萍 李晓娟 +4 位作者 吕梦欣 王珏 唐健 罗胜军 钱源 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第12期1720-1725,共6页
目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实... 目的探讨去甲基酶ALKBH5对滋养细胞HTR-8/SVneo迁移、侵袭功能及对上皮-间质转化(EMT)过程的影响。方法将ALKBH5高表达、抑制及其阴性对照NC质粒转染人滋养细胞系HTR-8/SVneo细胞,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及Westen boltting(WB)实验检测各组细胞中ALKBH5 mRNA及ALKBH5蛋白的表达水平。并通过Transwell实验检测转染后滋养细胞迁移、侵袭功能变化,同时通过WB实验检测各组细胞中上皮-间质转化(EMT)相关蛋白:Vimentin、Fibronectin、E-cadherin、N-cadherin、MMP9及MMP2的表达水平。结果ALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白高表达效果显著(P<0.05);shALKBH5组与未转染组(Control)和无意义序列组(NC)相比,ALKBH5 mRNA及蛋白抑制效果显著(P<0.05)。ALKBH5高表达后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能降低(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达上调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达下调,差异有统计学意义(P<0.05)。ALKBH5表达抑制后HTR-8/Svneo细胞迁移、侵袭功能增强(P<0.05),EMT相关蛋白中上皮标记物E-cadherin蛋白表达下调,间质标记物Fibronectin、N-cadherin、MMP2蛋白表达上调,差异有统计学意义(P<0.05)。结论ALKBH5通过抑制EMT过程降低滋养细胞迁移、侵袭能力,从而参与子痫前期的发病机制。 展开更多
关键词 alkbh同源蛋白5 子痫前期 上皮-间质转化 细胞迁移 细胞侵袭
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肥胖相关基因FTO、FNDC5、PRDM16的研究进展 被引量:3
13
作者 张雨林 詹济华 +2 位作者 谭洋 陈倩 裴刚 《生命的化学》 CAS CSCD 2017年第6期971-979,共9页
脂肪量及肥胖相关基因(FTO)被认定为肥胖关联最强最确切的基因,其单核苷酸多态性变异是导致肥胖的主要原因,通常来讲,其通过与其他肥胖相关基因、细胞因子发生相互作用,从而影响体内脂质的代谢,达到调控体脂量的目的。但是,FTO的很多作... 脂肪量及肥胖相关基因(FTO)被认定为肥胖关联最强最确切的基因,其单核苷酸多态性变异是导致肥胖的主要原因,通常来讲,其通过与其他肥胖相关基因、细胞因子发生相互作用,从而影响体内脂质的代谢,达到调控体脂量的目的。但是,FTO的很多作用机制尚未得到确切证实。本文综述了FTO通过调控IRX3、IRX5的表达,致使白色脂肪细胞内UCP1增多,变成米色脂肪细胞,从而影响能量代谢反应的相关生理机制。FNDC5是新近发现的肌肉相关因子,受到细胞因子PGC-1的诱导激活后,可表达Irisin蛋白,从而促使棕色脂肪细胞的UCP-1表达增加,同时促进细胞转化,提高解偶联呼吸作用的产热耗能反应。PRDM16被冠以"棕色脂肪细胞开关"一名,可激活棕色脂肪细胞关键特征,增强线粒体作用、解耦连呼吸作用及调控PGC-1a和UCP1等的表达;抑制富集白脂肪的几种基因的m RNA水平如resistin和serpin3ak的表达,达到强有力地干预棕色脂肪细胞的分化、代谢及转化反应的效果。 展开更多
关键词 肥胖 fto FNDC5 PRDM16 米色脂肪细胞 UCP1
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ALKBH5去除NFE2L1的m6A甲基化修饰促进黑色素瘤放化疗抵抗的机制研究
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作者 李银玲 表贞淑 《中国美容整形外科杂志》 CAS 2022年第4期236-240,I0006,共6页
目的探讨去甲基化酶AlkB同源蛋白5(AlkB homologue 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)放化疗抵抗中的作用。方法自2019年5月至2021年1月,辽宁省人民医院皮肤科采用实时荧光聚合酶链反... 目的探讨去甲基化酶AlkB同源蛋白5(AlkB homologue 5,ALKBH5)介导的m6A甲基化修饰在皮肤恶性黑色素瘤(cutaneous malignant melanoma,CMM)放化疗抵抗中的作用。方法自2019年5月至2021年1月,辽宁省人民医院皮肤科采用实时荧光聚合酶链反应(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)检测CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1(nuclear factor,erythroid 2 like 1)的表达。TCGA分析ALKBH5和NFE2L1的表达及相关性。在CMM细胞中敲减ALKBH5,免疫沉淀检测NFE2L1的m6A甲基化表达变化。MTT检测ALKBH5和NFE2L1在CMM细胞放化疗抵抗中的作用。结果与正常人表皮黑色素细胞相比,CMM细胞中ALKBH5和NFE2L1的表达水平均明显升高(P<0.05);ALKBH5调控NFE2L1的m RNA的m6A甲基化水平。敲减ALKBH5的CMM细胞,在经过照射和顺铂处理后,细胞成活比例下降,放化疗抵抗减轻(P<0.05);而过表达NFE2L1,治疗后的细胞成活比例增加,诱导了CMM的放化疗抵抗(P<0.05)。结论ALKBH5可通过去除NFE2L1的m6A甲基化修饰,上调NFE2L1的表达,促进CMM的放化疗抵抗。ALKBH5对CMM恶性表型的影响是通过NFE2L1实现的。 展开更多
关键词 皮肤黑色素瘤 alkbh5 NFE2L1 m6A甲基化 放化疗抵抗
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速效救心丸经ALKBH5/m 6A调控自噬减轻缺氧/复氧心肌细胞损伤 被引量:4
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作者 王可妍 高俊杰 +5 位作者 林文勇 王丹 张春伶 牛振超 李益萍 王肖龙 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期918-922,共5页
目的探讨速效救心丸对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及可能机制。方法将H9c2细胞随机分为5组,分别为常氧组、缺氧/复氧组、速效+缺氧/复氧组、川芎嗪+缺氧/复氧组、冰片+缺氧/复氧组。通过RT-qPCR和Western blot检测RNA去甲基化酶ALKBH5 ... 目的探讨速效救心丸对缺氧/复氧心肌细胞的保护作用及可能机制。方法将H9c2细胞随机分为5组,分别为常氧组、缺氧/复氧组、速效+缺氧/复氧组、川芎嗪+缺氧/复氧组、冰片+缺氧/复氧组。通过RT-qPCR和Western blot检测RNA去甲基化酶ALKBH5 mRNA和蛋白的表达。为进一步研究,将H9c2细胞分为空白转染+常氧组、空白转染+缺氧/复氧组、空白转染+速效+缺氧/复氧组、空白转染+川芎嗪+缺氧/复氧组、空白转染+冰片+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+速效+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+川芎嗪+缺氧/复氧组、ALKBH5过表达+冰片+缺氧/复氧组。通过化学发光法检测细胞活力,比色法检测N^(6)-腺嘌呤(m^(6)A)甲基化水平,RT-qPCR检测自噬相关基因的表达。结果与模型组比较,速效救心丸及其有效成分川芎嗪、冰片预处理与ALKBH5过表达可以增加缺氧/复氧后心肌细胞去甲基化酶ALKBH5 mRNA和蛋白的表达,降低m^(6)A甲基化水平,抑制GSK3β、Beclin-1、Atg5的表达,增加mTOR的表达(P<0.01)。结论速效救心丸可以有效减轻缺氧/复氧心肌损伤,其机制可能是通过ALKBH5/m^(6)A途径抑制过度自噬。 展开更多
关键词 速效救心丸 alkbh5 m^(6)A 自噬 心肌细胞 缺氧/复氧
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ALKBH5调控大鼠心肌成纤维细胞活化增殖的作用研究 被引量:2
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作者 周洋 涂彬 +7 位作者 宋凯 王娟 孙赫 孙峰 沙纪名 李锐 张野 陶辉 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1870-1874,共5页
目的探讨6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法取1~3 d新生SD乳鼠心脏,剪碎消化后进行CFs原代培养,并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型,模... 目的探讨6-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5在大鼠心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖中的作用。方法取1~3 d新生SD乳鼠心脏,剪碎消化后进行CFs原代培养,并在显微镜下观察细胞形态。细胞贴壁生长后加入TGF-β1诱导构建CFs活化增殖模型,模型构建成功后分别向各组细胞转染ALKBH5(慢病毒过表达ALKBH5)及慢病毒空载体24~48 h。运用RT-qPCR方法检测ALKBH5、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、I型胶原(CollagenⅠ)和增殖细胞核抗原(PCNA)mRNA的表达;Western blot检测ALKBH5、α-SMA、CollagenⅠ及PCNA蛋白的表达;CCK-8法和EdU染色检测细胞增殖活性变化。结果在CFs活化增殖模型中,与对照组CFs相比,模型组CFs中ALKBH5蛋白和mRNA的表达降低,而与活化增殖相关蛋白PCNA、α-SMA及CollagenⅠ的表达增加。此外,在慢病毒转染ALKBH5过表达组的CFs中,α-SMA、CollagenⅠ和PCNA蛋白和mRNA同ALKBH5病毒空载体组相比表达下降。CCK-8与EdU染色实验表明,与空载体组相比,ALKBH5过表达组CFs增殖活性受到抑制。结论过表达ALKBH5明显抑制CFs的增殖活性,提示ALKBH5可能是参与调控CFs活化增殖的关键因子。 展开更多
关键词 alkbh5 心肌成纤维细胞 心肌纤维化 活化 增殖
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5抑制胃癌细胞运动侵袭和Wnt信号通路活性的机制 被引量:2
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作者 沈李婷 李金洋 +6 位作者 李先峰 车林茸 刘科伟 刘琴 王斌 覃中毅 陈东风 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期459-466,共8页
目的研究RNA去甲基化酶ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法利用人类癌症基因库(the cancer genome Atlas, TCGA)对ALKBH5差异表达的胃癌患者进行总生存期分析;应用小鼠胃原位种植和转移模型分析ALKBH5的蛋白表达与胃癌... 目的研究RNA去甲基化酶ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响及机制。方法利用人类癌症基因库(the cancer genome Atlas, TCGA)对ALKBH5差异表达的胃癌患者进行总生存期分析;应用小鼠胃原位种植和转移模型分析ALKBH5的蛋白表达与胃癌细胞转移的相关性;通过构建敲低/过表达细胞株,结合Transwell实验研究ALKBH5对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;利用m^(6)A修饰位点预测网站m^(6)AVAR(http://m^(6)Avar.renlab.org/index.html),结合蛋白免疫印迹、放线菌素D处理结合实时荧光定量PCR,检测Wnt信号通路下游基因表达和mRNA稳定性。结果 TCGA数据库提示ALKBH5的低表达提示胃癌患者更短的生存期;体内实验验证ALKBH5的低表达与胃癌细胞远处转移相关;ALKBH5的敲低可以促进胃癌细胞的侵袭和转移;Wnt下游分子MYC,CD44,c-Met的mRNA上存在m^(6)A修饰位点;ALKBH5缺失时,Wnt下游分子的蛋白表达增加及mRNA稳定性增强。结论 ALKBH5表达缺失促进胃癌细胞迁移和侵袭能力,维持Wnt信号通路的激活。 展开更多
关键词 alkbh5 RNA甲基化 WNT信号通路 胃癌侵袭
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m^(6)A去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性研究 被引量:4
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作者 夏维 胡玲 +2 位作者 刘东 刘琴 胡红兵 《国际检验医学杂志》 CAS 2021年第6期700-703,共4页
目的探究N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性。方法收集精液标本30份,包括弱精症患者与健康者精液标本各15份,密度梯度离心纯化精子,使用液相色谱与质谱联用(LC-MS/MS)检测精子RNA的m^(6)A水平,使用实时荧光定量... 目的探究N^(6)-甲基腺嘌呤(m^(6)A)去甲基化酶ALKBH5与弱精症的相关性。方法收集精液标本30份,包括弱精症患者与健康者精液标本各15份,密度梯度离心纯化精子,使用液相色谱与质谱联用(LC-MS/MS)检测精子RNA的m^(6)A水平,使用实时荧光定量PCR法检测ALKBH5相对表达水平。结果弱精症患者m^(6)A水平明显高于健康者,ALKBH5相对表达水平低于健康者,差异均有统计学意义(P<0.05)。精子活动度参数相关性分析结果显示,ALKBH5相对表达水平与前向运动精子数和非前向运动精子数呈正相关(r=0.512、0.377,P<0.05),与不动精子数呈负相关(r=-0.497,P<0.05);m^(6)A与前向运动精子数和非前向运动精子数呈负相关(r=-0.442、-0.425,P<0.05),与不动精子数呈正相关(r=0.528,P<0.05)。结论在弱精症患者中,m^(6)A及其去甲基化酶ALKBH5与精子活动度具有相关性。 展开更多
关键词 alkbh5 N^(6)-甲基腺嘌呤 弱精症 精子活动度
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ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响 被引量:2
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作者 李鹏飞 鲍思洁 +4 位作者 王从玉 王思文 孙诚浩 康丽华 管怀进 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第11期847-852,862,共7页
目的探究N 6-甲基腺苷(m 6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的... 目的探究N 6-甲基腺苷(m 6A)去甲基化酶ALKBH5对紫外线诱导的晶状体上皮细胞(LEC)氧化损伤模型中DNA损伤修复的影响。方法运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测年龄相关性白内障(ARC)患者和对照组晶状体前囊膜上皮细胞中ALKBH5的mRNA和蛋白的表达。通过紫外线B(UVB)构建晶状体上皮细胞株SRA01/04细胞氧化损伤模型和靶向ALKBH5设计小干扰RNA(siRNA)转染构建敲降模型,运用qRT-PCR和免疫印迹实验检测氧化损伤模型和敲降模型中ALKBH5的mRNA和蛋白表达。运用CCK-8法检测Control组、UVB组、UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中SRA01/04细胞活力变化。免疫荧光染色检测UVB+siNC组和UVB+siALKBH5#3组中15A3的荧光强度变化。运用qRT-PCR检测转染对照siNC组和转染siALKBH5#3组中11个DNA氧化损伤修复基因(ODRGs)的mRNA表达变化。结果在ARC患者的晶状体前囊膜上皮细胞中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均显著升高。在UVB以时间梯度诱导SRA01/04的细胞氧化损伤模型中,ALKBH5的mRNA和蛋白表达水平均呈上升后下降趋势,其中UVB照射10 min后ALKBH5 mRNA和蛋白表达升高最为显著。ALKBH5敲降效率结果显示,与转染对照siNC组相比,转染靶向ALKBH5的siRNA后,ALKBH5的mRNA和蛋白表达均显著下降。CCK-8法检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞活力明显降低。免疫荧光染色检测结果显示,与UVB+siNC组相比,UVB+siALKBH5#3组SRA01/04细胞内DNA氧化损伤指标15A3染色显著增加。同时,与转染对照siNC组相比,转染ALKBH5#3组SRA01/04细胞的ODRGs中,TREX1、FANCD2、LIG1、MSH2、MSH3、RPA2、SMUG1、XRCC6 mRNA的表达均显著上升,DCLRE1A mRNA的表达显著下降,MGMT和MRE11A mRNA的表达则未见明显差异。结论m 6A去甲基化酶ALKBH5在UVB诱导的LEC氧化损伤模型中诱导性表达上升,敲降ALKBH5可促进LEC内大部分ODRGs表达升高,参与调控LEC内损伤DNA的修复,阻止ARC的发生。 展开更多
关键词 年龄相关性白内障 DNA损伤修复 晶状体上皮细胞 紫外线B N 6-甲基腺苷 alkbh5
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FTO/miR-181b-3p/ARL5B信号通路调控乳腺癌细胞的迁移和侵袭 被引量:2
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作者 徐媛媛 叶爽 +7 位作者 张南 郑淑慧 刘华涛 周科文 王玲 曹越 孙鹏 王庭槐 《癌症》 SCIE CAS CSCD 2020年第12期533-550,共18页
背景与目的近年来,研究已证实在包括乳腺癌在内的多种肿瘤的进展中,RNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰是一个重要的调节过程。脂肪量与肥胖相关(fat mass and obesityassociated,FTO)酶,最初被称为肥胖相关蛋白,是第一... 背景与目的近年来,研究已证实在包括乳腺癌在内的多种肿瘤的进展中,RNA的N6-甲基腺苷(N6-methyladenosine,m^(6)A)修饰是一个重要的调节过程。脂肪量与肥胖相关(fat mass and obesityassociated,FTO)酶,最初被称为肥胖相关蛋白,是第一个被发现的m^(6)A去甲基化酶。然而,FTO与乳腺癌之间的关系目前还存在争议。本研究旨在阐明FTO在乳腺癌中的作用及其临床意义,并探讨其作用机制。方法我们首先用定量逆转录–PCR(quantitative reverse transcription-PCR,qRT-PCR)、Western blotting和免疫组织化学法检测了乳腺癌细胞系和组织中FTO的表达。用划痕实验和Transwell实验检测了FTO过表达或表达敲降的SKBR3和MDA-MB453细胞的迁移和侵袭能力。采用RNA测序(RNA sequencing,RNA-seq)分析FTO的下游靶分子。采用qRT-PCR、荧光素酶报告基因分析和Western blotting证实FTO/miR-181b-p/ARL5B轴。用划痕实验和Transwell侵袭实验检测了ADP核糖基化因子样蛋白GTP酶5B(ADP ribosylation factor like GTPase 5B,ARL5B)在乳腺癌细胞中的生物学功能。结果人表皮生长因子受体2(human epidermal growth factor receptor 2,HER2)表达阳性的乳腺癌中FTO高表达,其高表达与肿瘤进展[肿瘤大小(P<0.001)、核分级(P=0.001)、癌旁淋巴及血管浸润(P<0.001)、淋巴结转移(P=0.002)及TNM分期(P=0.001)]及不良预后相关。另外,体外实验证实FTO可增强乳腺癌细胞的迁移及侵袭。在机制方面,RNA测序和进一步的验证实验均表明,FTO可通过抑制miR-181b-3p上调ARL5B的表达。我们进一步证实了ARL5B在乳腺癌细胞中发挥了致癌活性。结论本研究证实了FTO可通过FTO/miR181b-3p/ARL5B通路促进乳腺癌细胞的迁移及侵袭。 展开更多
关键词 ARL5B 乳腺癌 无病生存 脂肪量与肥胖相关(fat mass and obesity-associated fto)酶 人表皮生长因子受体2 m^(6)A修饰 miR-181b-3p 总生存
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