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人FRNK重组腺病毒的构建 被引量:1
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作者 曹俊 于皆平 +3 位作者 刘超红 刘启胜 齐元玲 于红刚 《武汉大学学报(医学版)》 CAS 2007年第3期265-269,共5页
目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用... 目的:应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建人FRNK基因重组腺病毒,并在HEK293细胞中扩增制备重组病毒。方法:把人FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pAdTrack-CMV中,构建腺病毒质粒pAdTrack-CMV-hFRNK,经PmeⅠ内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到HEK293细胞进行包装,获得人FRNK重组腺病毒pAdhFRNK。荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达。结果:经酶切和绿色荧光蛋白表达证明了hFRNK基因的重组腺病毒载体pAdhFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论:成功构建携带人FRNK基因的重组腺病毒pAdhFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 frnk 基因治疗 腺病毒 载体
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FRNK对人乳腺癌MDA-MB-435细胞迁移的抑制作用
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作者 秦瑾 刘正湘 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2006年第7期833-838,共6页
背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞... 背景与目的:粘着斑激酶(focaladhesionkinase,FAK)的高表达或过度激活与肿瘤迁移密切相关。粘着斑相关非激酶(FAKrelatednon-kinase,FRNK)是FAK内源性抑制剂,通过与FAK竞争粘着斑结合位点抑制FAK活性。本研究旨在探讨FRNK对人乳腺癌细胞MDA-MB-435迁移的抑制作用及相关机制。方法:RT-PCR法克隆目的基因FRNK,构建pcDNA3.1-FRNK重组质粒;利用脂质体转染MDA-MB-435细胞,经G418筛选抗性单细胞克隆,通过Westernblot鉴定稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞并检测其与野生型MDA-MB-435细胞中基质金属蛋白酶-9(matrixmetalloproteinase9,MMP-9)表达水平;采用体外划痕修复实验和Boyden趋化小室比较野生型和稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞的非定向及定向迁移运动能力。结果:成功构建真核表达重组质粒pcDNA3.1-FRNK,建立稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞。高表达FRNK的细胞较野生型MDA-MB-435细胞MMP-9蛋白表达降低73.1%。在划痕修复实验中,稳定高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞移行面积与空白面积之比为0.35±0.02,与野生型MDA-MB-435细胞(0.58±0.06)相比划痕修复能力明显减弱(P<0.05);在趋化小室实验中,高表达FRNK蛋白的MDA-MB-435细胞迁移数为65.15±8.56,仅为野生型MDA-MB-435细胞迁移数(97.86±5.44)的66.57%。结论:FRNK可抑制MDA-MB-435细胞迁移运动,该抑制作用与MDA-MB-435细胞中MMP-9表达下调有关。 展开更多
关键词 粘着斑相关非激酶 乳腺肿瘤 MDA-MB-435细胞 细胞迁移 基质金属蛋白酶-9
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FRNK negatively regulates liver fibrosis via attenuating activation of hepatic stellate cells
3
作者 Gaoliang Zou Xueke Zhao 《Cancer Biology & Medicine》 SCIE CAS CSCD 2018年第S01期17-17,共1页
Objective:This study was conducted to examine the effect of focal adhesion kinase-associated non-kinase(FRNK)overexpression or inhibition on hepatic stellate cell(HSC)-mediated liver fibrosis progression and to explor... Objective:This study was conducted to examine the effect of focal adhesion kinase-associated non-kinase(FRNK)overexpression or inhibition on hepatic stellate cell(HSC)-mediated liver fibrosis progression and to explore the role of FRNK in improving liver fibrosis.Methods:i)Using primary mouse HSCs and the human HSC cell line LX-2. 展开更多
关键词 frnk negatively regulates
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抑瘤细胞运动和侵袭的鼠FRNK重组腺病毒的构建
4
作者 曹俊 孙铁汉 +4 位作者 丁铭佑 陈颖 刘超红 于皆平 于红刚 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第12期1502-1504,共3页
目的应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建小鼠FRNK基因重组腺病毒,并在293HEK细胞中扩增制备重组病毒。方法把小鼠FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pad- Track-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FRNK,经Pme I内切酶酶切成线性化后... 目的应用AdEasy复制缺陷型腺病毒载体系统构建小鼠FRNK基因重组腺病毒,并在293HEK细胞中扩增制备重组病毒。方法把小鼠FRNK基因克隆入腺病毒穿梭载体pad- Track-CMV中,构建腺病毒穿梭质粒pAdTrack-CMV-FRNK,经Pme I内切酶酶切成线性化后,采用电穿孔转化将其转化到含有腺病毒骨架载体pAdEasy-1的感受态大肠杆菌BJ5183中,通过卡那霉素筛选获得阳性腺病毒重组质粒。再将获得的腺病毒重组质粒转染到293HEK细胞进行包装,获得FRNK重组腺病毒pAdFRNK。荧光显微镜下观察绿荧光的表达。结果经酶切和绿荧光表达证明了小鼠FRNK基因的重组腺病毒载体pAdFRNK构建成功,并制备出高滴度的重组病毒。结论成功构建携带小鼠FRNK基因的重组腺病毒pAdFRNK,为研究FRNK的基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 frnk基因 腺病毒载体 基因治疗
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FAK和ILK介导骨桥蛋白诱导的血管平滑肌细胞黏附和迁移 被引量:6
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作者 李菁菁 温进坤 韩梅 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期477-483,共7页
黏着斑激酶(FAK)和整合素偶联激酶(ILK)是整合素信号途径中的重要信号转导分子,为阐明两者在血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中的作用,以骨桥蛋白(OPN)作为VSMC黏附和迁移的诱导剂,检测其对FAK和ILK磷酸化以及对两者之间结合的影响.在... 黏着斑激酶(FAK)和整合素偶联激酶(ILK)是整合素信号途径中的重要信号转导分子,为阐明两者在血管平滑肌细胞(VSMC)黏附和迁移中的作用,以骨桥蛋白(OPN)作为VSMC黏附和迁移的诱导剂,检测其对FAK和ILK磷酸化以及对两者之间结合的影响.在此基础上,用FAK磷酸化特异性抑制剂黏着斑相关非激酶(FRNK)或ILK反义RNA分别阻断FAK磷酸化或ILK表达,进一步探讨两者在VSMC黏附和迁移中所起的作用.结果显示,OPN诱导可促进FAK磷酸化,诱导10min后FAK磷酸化水平升高到对照组的2·4倍;与此同时,ILK的磷酸化受到抑制,30min降至对照细胞的44·6%.OPN诱导FAK磷酸化的同时使FAK与ILK的结合减少.外源性FRNK在VSMC中的过表达显著降低FAK的磷酸化水平,促进ILK磷酸化和FAK与ILK之间的结合,抑制VSMC的黏附和迁移.用ILK反义RNA抑制ILK表达使VSMC在OPN上的黏附增加1·8倍,迁移细胞数降低45·5%.结果提示,FAK和ILK介导OPN诱导的VSMC黏附和迁移过程,两者通过对同一刺激信号产生不同的磷酸化变化而对VSMC的黏附和迁移产生不同的影响. 展开更多
关键词 FAK ILK frnk 黏附 迁移 血管平滑肌细胞
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黏着斑激酶相关非激酶在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义
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作者 王朝阳 吴文艺 +5 位作者 朱世泽 杨维群 蔡玉梅 潘明孟 周仙颖 林新恭 《中国美容医学》 CAS 2016年第4期38-41,共4页
目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(facol adhesion kinase-ralated nonkinase,FRNK)在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义。方法:利用Western-blot及反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测10例瘢痕疙瘩及10例相应周围正常... 目的:探讨黏着斑激酶相关非激酶(facol adhesion kinase-ralated nonkinase,FRNK)在瘢痕疙瘩组织中的表达及意义。方法:利用Western-blot及反转录聚合酶链式反应(reverse transcription-PCR,RT-PCR)检测10例瘢痕疙瘩及10例相应周围正常皮肤组织中FRNK蛋白及m RNA表达水平并进行统计学分析。结果:瘢痕疙瘩组织中的FRNK蛋白表达明显低于正常皮肤(0.12±0.06比0.32±0.04),差异有统计学意义(P<0.01);瘢痕疙瘩组织中FRNK m RNA表达明显低于正常皮肤(0.27±0.03比1.10±0.05),差异有统计学意义(P<0.01)。结论:FRNK蛋白及m RNA在瘢痕疙瘩组织中低表达,导致其对成纤维细胞凋亡作用减弱,对瘢痕疙瘩的形成可能起重要作用,通过调节FRNK的表达,有望为瘢痕的治疗提供新的靶点。 展开更多
关键词 黏着斑激酶相关非激酶(frnk) 瘢痕疙瘩 成纤维细胞 凋亡
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FAK and Pyk2 in disease
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作者 James M. Murphy Hyeonsoo Park Ssang-Taek Steve Lim 《Frontiers in Biology》 CAS CSCD 2016年第1期1-9,共9页
Focal adhesion kinase (FAK) and proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2) are non-receptor protein tyrosine kinases that are involved in cell proliferation, migration and survival. Current research of FAK and Pyk2 is ... Focal adhesion kinase (FAK) and proline-rich tyrosine kinase 2 (Pyk2) are non-receptor protein tyrosine kinases that are involved in cell proliferation, migration and survival. Current research of FAK and Pyk2 is greatly focused in cancer biology and several small molecule inhibitors are being tested under clinical development. Like cancer, certain chronic diseases such as cardiovascular disease, bone disease, fibrosis, rheumatoid arthritis, and neurological disorders, share malignant characteristics of cancer. Accumulating evidence has demonstrated that FAK and Pyk2 contribute to other proliferative and degenerative diseases. Thus, the goal of this review is to briefly highlight studies that have implicated FAK and Pyk2 as players in disease progression. 展开更多
关键词 FAK PYK2 frnk DISEASE
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