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草鱼呼肠孤病毒HZ08株FQ-PCR检测方法的建立及应用 被引量：13
1
作者 刘宝芹 曾伟伟 +4 位作者 王庆 张乐生 王英英 石存斌 吴淑勤 《中国水产科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第2期329-335,共7页
草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhagevirus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株。为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研... 草鱼出血病是危害中国淡水养殖最为重要的病害之一,其病原为草鱼呼肠孤病毒(grass carp hemorrhagevirus,GCRV),其中,HZ08株是当前引起草鱼出血病的主要流行毒株。为建立一种快速、灵敏、特异的草鱼呼肠孤病毒主要流行株检测方法,本研究利用草鱼呼肠孤病毒HZ08株S7基因保守区,设计了一对能特异性扩增154 bp片段的引物和TaqMan探针,用含有S7基因全长的重组质粒PAVX1-S7作为标准品,构建质粒拷贝数与CT值的标准曲线,并对该方法的特异性、可重复性、敏感度进行评价。结果显示:标准曲线在6.0×1010～6.0拷贝数之间有很好的线性关系(r=0.999);实时荧光定量PCR最少可检测到6个阳性质粒,有较高的敏感性;试验内及试验间变异系数分别为0.82%与0.41%～0.52%,重复性强;对水生动物其他病毒均无扩增反应,具有很好的特异性。应用该方法对采集的32份草鱼出血病样品进行检测,其中28份为阳性,而以常规RT-PCR检测同样的样品,仅23份为阳性。本研究建立的草鱼呼肠孤病毒流行株实时荧光定量PCR检测方法在特异性、灵敏度、重复性方面具有较好的测试结果,在GCRV的快速检测和病毒初步定量中应用前景乐观。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 HZ08株 fq-PCR 检测方法
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氮素胁迫下强、弱化感水稻萜类代谢途径中关键酶基因差异表达的FQ-PCR分析 被引量：19
2
作者 王海斌 熊君 +4 位作者 方长旬 邱龙 吴文祥 何海斌 林文雄 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第8期1329-1334,共6页
运用实时荧光定量PCR技术研究低氮条件下化感与非化感水稻异戊二烯代谢途径中关键酶基因的表达差异。结果表明,与正常氮条件下相比,低氮条件下化感和非化感水稻与萜类物质合成相关的12个关键酶基因表达发生了不同程度的变化,其中,化感水... 运用实时荧光定量PCR技术研究低氮条件下化感与非化感水稻异戊二烯代谢途径中关键酶基因的表达差异。结果表明,与正常氮条件下相比,低氮条件下化感和非化感水稻与萜类物质合成相关的12个关键酶基因表达发生了不同程度的变化,其中,化感水稻PI312777有6个基因表达下调,6个基因则上调;而非化感水稻Lemont有7个基因表达下调,5个基因表达上调。在供氮条件从高向低改变的过程中,两水稻中有11个基因的表达行为(上调或下调)相同,从分子水平上,证实了它们萜类代谢相关基因在响应供氮环境变化的行为生态上是相同或相似的。低氮引起两水稻催化生成与化感物质相关的单萜、倍半萜、二萜、三萜类物质的合成酶基因表达量均显著下降,从而认为营养胁迫引起水稻化感抑草作用增强与萜类物质代谢变化无关。还讨论了营养胁迫引起萜类物质代谢变化与内源激素合成和生长速率减缓的关系,认为水稻甲羟戊酸代谢途径支路中3-羟基-3-甲基戊二单酰CoA合酶、3-羟基-3-甲基戊二单酰CoA还原酶和甲羟戊酸激酶相关基因表达量不同程度的上调,维持了生长所必需的激素水平。 展开更多
关键词 水稻 异戊二烯途径 fq-PCR 氮素
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草鱼呼肠孤病毒JX-0901株FQ-PCR检测方法的建立及其在定量分析中的应用 被引量：5
3
作者 刘宝芹 曾伟伟 +5 位作者 王庆 张乐生 王英英 石存斌 李华 吴淑勤 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2012年第11期139-143,共5页
根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。... 根据GCRV JX-0901株S7基因保守区设计特异性引物和TaqMan探针,建立了针对GCRV JX-0901株病毒的TaqMan实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测方法,并利用FQ-PCR方法对该毒株在不同鱼类细胞中的增殖情况和不同温度条件下的稳定性进行了定量分析。结果显示,建立的FQ-PCR方法的Ct值与标准品在1.0×101～1.0×108拷贝/μL浓度范围呈良好的线性关系,R2高达0.999;该方法有较好的敏感性和特异性,最低模板检出量为10个拷贝,只能特异地检测出GCRV JX-0901,不能检出其他鱼类常见病毒。该毒株能在10种常见鱼类细胞中增殖,其中在L8824细胞中的增殖量最大,含量达到4.1933×107拷贝/μL;此外,该毒株对温度敏感性较弱,病毒在48、56℃条件下放置96 h后才失去对CIK细胞感染性,而在4、15、28、37℃条件下放置32d,-20℃条件下储存2年仍具有较高的含量和较强的感染性。 展开更多
关键词 草鱼呼肠孤病毒 JX-0901株 fq-PCR 定量分析
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肠炎沙门氏菌种特异性FQ-PCR快速检测方法的建立 被引量：4
4
作者 邓树轩 程安春 +5 位作者 汪铭书 曹平 尹念春 曹省艳 张振华 颜彬 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 北大核心 2008年第5期537-542,共6页
根据肠炎沙门氏菌（SE）种特异性DNA序列，设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针，首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系；检... 根据肠炎沙门氏菌（SE）种特异性DNA序列，设计合成了一对能特异性扩增130bp片段的引物和TaqMan探针，首次建立了SE的种特异性荧光定量聚合酶链式反应（FQ-PCR）诊断方法。该法在SEDNA含量为9×10^8-9X104拷贝有较好的线性关系；检测SEDNA模板的灵敏度为4拷贝／μL，检测SE细菌数的灵敏度为6CFU／mL；特异性试验表明只对SE基因组呈阳性反应。分别应用该技术和传统细菌分离法检测60份来自人工感染鸭、小白鼠和肉兔的心、肝、脑和直肠粪便，结果显示两种方法对心、肝、直肠粪便的阳性检测结果符合率为100％，而FQ-PCR对脑的阳性检测率极显著（P〈0．01）高于细菌分离。研究结果表明，该方法快速、灵敏、特异、重复性好且能实时定量检测，可用于SE分离鉴定、SE感染疑似病例检测、SE体内动态分布规律研究及其分子流行病学调查。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌(SE) 荧光定量聚合酶链式反应(fq-PCR) 种特异性
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LAMP与FQ-PCR技术检测HBV DNA的特异性和灵敏度比较 被引量：2
5
作者 邓正华 晏丽 +2 位作者 黄远帅 彭瑛 温先勇 《成都医学院学报》 CAS 2013年第5期525-528,共4页
目的采用环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术与实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术检测HBV DNA,并对LAMP方法的反应条件进行优化,比较两种方法检测HBV DNA的灵敏... 目的采用环介导等温扩增反应(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术与实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative PCR,FQ-PCR)技术检测HBV DNA,并对LAMP方法的反应条件进行优化,比较两种方法检测HBV DNA的灵敏度及特异性。方法选取经医院确诊的乙肝患者的血清,提取血清中的HBV DNA作为扩增模板,同时对LAMP方法的各种条件进行优化,并分别采用LAMP和FQ-PCR两种方法对同一HBV DNA模板做10倍梯度稀释的标本进行HBV DNA的检测,比较其灵敏度;分别用两种方法对乳头瘤病毒(HPV)、EB病毒、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌以及正常人血清基因组DNA在相同条件下进行实验,观察两种方法在检测中是否出现假阳性结果,以确定两种方法的特异性。结果对同一HBV DNA模板进行10倍梯度稀释后,FQ-PCR技术在待测血清标本(2.38×107 copy/mL)被稀释到10-5,就难以进行准确检测,而LAMP方法在待测血清标本被稀释到10-7时,仍能获得较好的扩增结果;对HPV、EB病毒、大肠埃希氏菌、金黄色葡萄球菌、鲍曼不动杆菌、铜绿假单胞菌以及正常人血清基因组DNA进行LAMP和FQ-PCR检测,结果均为阴性。结论采用LAMP方法可以成功、快速、高效、特异地扩增HBV DNA,与FQ-PCR方法比较,都能特异地检测HBV DNA,但LAMP方法具有更高的灵敏性,操作更为简单、方便,且不需要昂贵的仪器,更适合基层检测机构推广使用。 展开更多
关键词 LAMP fq-PCR HBV DNA 特异性 灵敏度
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TRFIA、FQ-PCR方法联合检测乙肝标志物的应用探讨 被引量：8
6
作者 赵东岩 陈弟 刘春林 《昆明医科大学学报》 CAS 2014年第10期57-60,共4页
目的探讨检测乙肝标志物联合使用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法的应用价值.方法 2008年1月至2014年5月云南省第二人民医院检验科对门诊疑似乙肝患者2 476例,分别行TRFIA检测其血清学标志物HBV(HBV-M)... 目的探讨检测乙肝标志物联合使用时间分辨荧光免疫分析(TRFIA)和荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法的应用价值.方法 2008年1月至2014年5月云南省第二人民医院检验科对门诊疑似乙肝患者2 476例,分别行TRFIA检测其血清学标志物HBV(HBV-M)和行FQ-PcR方法检测其HBv.DNA含量,并对2种方法的阳性检出率进行比较.结果 2 476例受检者中,FQ-PcR检测其HBv-DNA阳性1 656份,总阳性率为66.9%,其中TRFIA法HBsAg、HBeAg、HBcAb均阳性861份,使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性816份,占94.8%;TRFIA法HBsAg、HBeAb、HBcAb均阳性1 023例,使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性674份,占65.9%;HBsAg、HBeAg均阳性27份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性26份,占96.3%;HBsAg、HBcAb均阳性148份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性117份,占79.1%;HBsAb、HBeAb均阳性55份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占3.64%;HBsAb、HBeAb、HBcAb均阳性123份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性11份,占8.94%;HBeAb阳性22份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占9.09%;HBeAb、HBcAb均阳性43份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性3份,占6.98%;HBcAb阳性37份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占5.41%;HBsAb阳性89份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性2份,占2.22%;均阴性48份,其中使用FQ-PCR法检测HBV-DNA的含量阳性1份,占2.08%.结论 TRFIA法用来排查机体有无感染乙肝病毒,对于乙肝传染性强弱仅能做一个初步的估计指标,不能准确检测出血清HBV-DNA低滴度者,故靠TRFIA法诊断和判断病情是不够的;FQ-PCR法检查乙肝患者体内的乙肝病毒数量、复制指标,能够能为精确的判断出乙肝病毒在体内的复制、传染强弱情况,是对TRFIA法不足的补充.而FQ-PCR法在检测时也容易受到一些人为或非人为因素的影响.二者联合检测可提高其准确性,有利于病情的判断和诊治. 展开更多
关键词 TRFIA法 fq-PCR法 乙肝标志物
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支气管肺泡灌洗液FQ-PCR检测TB-DNA与TB培养在肺结核诊断中的价值 被引量：10
7
作者 李春梅 施旭东 +1 位作者 邵吉宝 董慧霞 《临床肺科杂志》 2018年第3期396-398,共3页
目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测TB-DNA与TB培养两种方法在肺结核诊断中的临床价值。方法回顾分析南京市胸科医院2016年4月到12月收治的587例初次住院患者标本,其中肺结核组525例,非肺结核组62例,收集... 目的评价支气管肺泡灌洗液(BALF)荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测TB-DNA与TB培养两种方法在肺结核诊断中的临床价值。方法回顾分析南京市胸科医院2016年4月到12月收治的587例初次住院患者标本,其中肺结核组525例,非肺结核组62例,收集所有患者的BALF标本,同时做TB-DNA(FQ-PCR法)检测和TB培养,比较两方法的阳性率差异和性能指标。结果 (1)BALF的TB-DNA(FQ-PCR法)和TB培养的阳性率分别为41.40%和31.86%,两种方法阳性率比较差异有统计学意义(P<0.01)。(2)两种方法在肺结核诊断中的灵敏度分别为46.1%和35.62%,特异度分别为98.39%和100%,阳性预测值分别为99.59%和100%,阴性预测值分别为17.73%和15.50%、诊断效率分别为51.62%和42.42%。(3)两种方法联合检测在肺结核诊断中的灵敏度为52.19%,特异度为98.39%,阳性预测值为99.64%,阴性预测值为19.55%,诊断效率为57.07%。结论 BALF的TB-DNA(FQ-PCR法)和TB培养两方法在肺结核的诊断上均有较好的临床应用价值,BALF的FQ-PCR检测TB-DNA和TB培养联合检测,能更有效的提高肺结核诊断率。 展开更多
关键词 支气管肺泡灌洗液 fq-PCR TB培养 方法
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应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆EB病毒DNA定量分析及其临床意义 被引量：6
8
作者 李冰 司勇锋 +1 位作者 覃扬达 张政 《实用癌症杂志》 2017年第2期200-203,共4页
目的应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆中游离EB病毒DNA拷贝,探讨血浆EB病毒DNA定量测定的临床意义。方法选取132例鼻咽癌患者,取其外周血样本,其中84例治疗前血样,48例治疗后血样(放疗或加化疗)。另收集60例健康血样作为正常对照。使... 目的应用FQ-PCR技术测定鼻咽癌患者血浆中游离EB病毒DNA拷贝,探讨血浆EB病毒DNA定量测定的临床意义。方法选取132例鼻咽癌患者,取其外周血样本,其中84例治疗前血样,48例治疗后血样(放疗或加化疗)。另收集60例健康血样作为正常对照。使用广州中山医科大学达安基因诊断中心提供(Cat.#DA-061)的EB病毒DNA-PCR试剂盒,测定鼻咽癌患者血浆中游离EB病毒DNA拷贝,阴性对照为空白PCR反应液,阳性对照为10~6、10~4、10~2拷贝/ul的阳性模板。结果鼻咽癌组治疗前84例样本,阳性率为67.86%,鼻咽癌组治疗后48例样本阳性率为35.42%,正常对照者30例样本阳性率仅为8.33%,鼻咽癌组治疗前血浆游离EB病毒DNA的阳性率显著高于对照组,差异显著(χ~2=11.497,P=0.001);鼻咽癌组治疗后与对照组血浆游离EB病毒DNA的阳性率比较,差异较显著(χ~2=6.782,P=0.018);鼻咽癌组治疗前血浆中游离EB病毒-DNA阳性率约是治疗后的2倍,差异显著(χ~2=6.271,P=0.023)。鼻咽癌组治疗前血浆游离EB病毒DNA拷贝中位数为522.0 copies/ml,治疗后中位数为0.0,对照组中位数为0.0,鼻咽癌组治疗前的血浆游离EB病毒DNA拷贝数显著高于治疗后,两者差异具有统计学意义(U=350.0,P=0.029),而且与正常对照组拷贝数比较,差异亦显著(U=274.0,P=0.001)。Ⅰ~Ⅱ期患者的血浆游离EB病毒DNA水平显著低于Ⅲ~Ⅳ期患者(U=141.0,P=0.039)。N_0+N_1期患者的血浆EB病毒DNA水平显著低于N_2+N_3期患者(U=147.0,P=0.031)。结论 FQ-PCR技术具有快速、精确和高灵敏性的特点,比其它传统检测手段更实用。血浆EB病毒DNA的定量PCR分析对鼻咽癌的筛选检查具有应用价值。 展开更多
关键词 fq-PCR技术 鼻咽癌 EB病毒 DNA定量分析
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鉴别猪圆环病毒2型和3型双重TaqMan MGB探针FQ-PCR检测方法研究 被引量：2
9
作者 赵雪丽 闫若潜 +8 位作者 王华俊 王淑娟 马震原 谢彩华 柴茂 杨海波 王翠 刘影 王东方 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2024年第2期165-173,共9页
建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性... 建立一种快速、特异鉴别检测猪圆环病毒2型(PCV2)和猪圆环病毒3型(PCV3)的双重TaqMan MGB探针FQ-PCR方法,本研究以PCV2的Rep蛋白和PCV3的Cap蛋白基因作为靶基因,各设计1对特异性引物和1条TaqMan MGB探针,经优化各反应条件和进行敏感性、特异性、重复性和干扰性试验,建立鉴别检测PCV2/PCV3的双重FQ-PCR方法。结果显示:该方法可特异性扩增PCV2、PCV3核酸,与猪伪狂犬病病毒(PRV)等8种病原及阴性对照无交叉反应,特异性较强;对PCV2和PCV3阳性质粒标准品的最低检出限均可达10 copies/μL,敏感性较高;PCV2/PCV3批内/批间重复试验变异系数(CV)值均在3%以下,表明方法稳定性、重复性较好;干扰性试验表明在两种病毒阳性质粒起始模板相差较大时该方法不会影响对其中任一病毒核酸的检出和准确定量。对42份临床疑似PCV感染样品检测结果与PCV2、PCV3基因测序结果符合率100%。本研究建立的双重FQ-PCR方法具有敏感性高达10 copies/μL、特异性强、在同一反应体系中能同时快速鉴别检测PCV2、PCV3等优点,可用于临床PCV2/PCV3感染的快速鉴别检测。 展开更多
关键词 猪圆环病毒2型 rep基因 猪圆环病毒3型 cap基因 双重TaqMan MGB fq-PCR
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运用FQ-PCR技术监测亚甲蓝光化学法对血浆丙型肝炎病毒的灭活效果 被引量：2
10
作者 郑岚 黄宇闻 +6 位作者 莫琴 王迅 许莉萍 陆萍 凌冰 钱开诚 曹文俊 《诊断学理论与实践》 2002年第2期102-104,共3页
目的:通过荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对血浆病毒灭活前后丙型肝炎病毒RNA（HCV-RNA）浓度的测定,判断亚甲蓝（MB）光化学法灭活血浆丙型肝炎病毒的效果,为临床判别病毒灭活效果提供直接和客观依据。方法:4份经证实为HCV-RNA阳性的血浆... 目的:通过荧光定量PCR（FQ-PCR）技术对血浆病毒灭活前后丙型肝炎病毒RNA（HCV-RNA）浓度的测定,判断亚甲蓝（MB）光化学法灭活血浆丙型肝炎病毒的效果,为临床判别病毒灭活效果提供直接和客观依据。方法:4份经证实为HCV-RNA阳性的血浆分别加入MB,终浓度为1μmol/L,经可见光（大于30000Lux）照射不同时间（0、5、10、15和30min）后,分别用FQ-PCR测定这些血浆的HCV-RNA浓度,并与未用MB处理的血浆作比较,判断随照射时间不同,HCV被灭活的效果。结果:4份HCV-RNA阳性病人的血浆未经处理时其病毒核酸浓度分别为8.0X105拷贝/ml、1.7X106拷贝/ml、1.6X106拷贝/ml和 3.1X105拷贝/ml,加入MB未经照射时HCV-RNA浓度即明显下降,可见光照射5 min后HCV-RNA浓度分别下降为未经任何处理时浓度的18.75％、23.36％、4.66％和1.27％,随照射时间延长,病毒核酸浓度逐渐下降,照射30min后,HCV-RNA浓度均下降为零。结论:用MB加光照30min处理,可达到将血浆丙肝病毒灭活的效果;FQ-PCR可定量检测MB光化学法灭活丙肝病毒的过程。 展开更多
关键词 fq-PCR技术 亚甲蓝光化学法 血浆 丙型肝炎病毒 病毒灭活
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FQ-PCR方法检测腹泻仔猪肠道内乳酸杆菌和双歧杆菌试验 被引量：1
11
作者 赵娟 王志宇 +5 位作者 段昌学 王志俊 刘一飞 赵敏 韩洁茹 李正莉 《养猪》 2021年第5期123-125,共3页
为了建立一种更有效的动物肠道微生态检测方法,试验设计了对各血清型乳酸菌和双歧杆菌引物序列进行测序。分3批次采集样本,每批分别采集健康和腹泻仔猪新鲜粪样20份。提取每个粪便样本的总DNA。并对解冻后的粪便样本进行荧光定量PCR分... 为了建立一种更有效的动物肠道微生态检测方法,试验设计了对各血清型乳酸菌和双歧杆菌引物序列进行测序。分3批次采集样本,每批分别采集健康和腹泻仔猪新鲜粪样20份。提取每个粪便样本的总DNA。并对解冻后的粪便样本进行荧光定量PCR分析发现,与健康仔猪相比,腹泻仔猪粪便样品中的乳酸杆菌和双歧杆菌mRNA数量有所减少,说明腹泻仔猪肠道中益生菌数量下降,腹泻影响仔猪肠道内环境的健康和微生态平衡。 展开更多
关键词 fq-PCR方法 腹泻仔猪 肠道微生态
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FQ-PCR溶解曲线技术分析白血病患者PBMC中T细胞TCRα/βCDR3谱系特征 被引量：3
12
作者 孙永苹 石彬 +3 位作者 朱红倩 汤贤英 马锐 姚新生 《合肥医学院学报》 2014年第1期39-47,共9页
目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的C... 目的采用FQ-PCR溶解曲线技术分析临床白血病患者外周血单个核细胞(PBMC)中T细胞TRAV和TRBV基因各家族的CDR3谱系特征。方法提取4例健康志愿者和15例临床白血病患者PBMC中mRNA,逆转录成cDNA,FQ-PCR扩增32个TRAV基因和24个TRBV基因家族的CDR3区,FQ-PCR溶解曲线技术分析CDR3谱系特征,并测序分析单克隆家族CDR3区氨基酸序列的组成。结果 4例健康志愿者PBMC中α/βT细胞的CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,均表现为多峰图;而15例白血病患者PBMC中α/βT细胞CDR3谱系FQ-PCR溶解曲线峰型图,多数患者出现寡或偏峰型图、低或无峰型图、典型的单峰型图;不同白血病患者异常峰的频率不一致;单峰型图TRAV和TRBV PCR产物基因测序,未发现不同患者存在完全相同的CDR3区。结论FQ-PCR溶解曲线技术能很好的分析白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3谱系的单、寡、多克隆性增殖;非T细胞白血病患者PBMC中TCRα/βCDR3的单峰(或寡峰)家族T细胞,可能来源于机体对肿瘤应答的T细胞,而在T细胞白血病患者,可能为肿瘤T细胞或机体抗肿瘤T细胞。本实验可为进一步研究白血病的免疫应答机制和个体化治疗提供基础。 展开更多
关键词 白血病 TCR CDR3 fq-PCR 溶解曲线
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FQ-PCR检测肌注小鹅瘟病毒VP3基因疫苗在雏鹅体内的动态分布
13
作者 黎敏 程安春 +5 位作者 汪铭书 韩新锋 刘晓东 卢菲 车茜 陈孝跃 《四川农业大学学报》 CSCD 2007年第4期462-467,共6页
将30日龄四川白鹅分别肌肉注射接种50μg、100μg和200μg的GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3),以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧... 将30日龄四川白鹅分别肌肉注射接种50μg、100μg和200μg的GPV-VP3基因疫苗(pcDNA-GPV-VP3),以生理盐水和空载体质粒pcDNA3.1(+)为对照,于免疫接种后1h、12h、1d、3d、7d、21d、35d、63d、105d和217d采集全血以及各组织器官,用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)检测pcDNA-GPV-VP3在雏鹅体内的动态分布。结果表明:①pcDNA-GPV-VP3各剂量免疫雏鹅1h即可在各组织中被检测到,其中注射部位含量最高,肝、淋巴器官(脾、法氏囊、胸腺、哈氏腺)含量较高;②到217d时,50μg组免疫雏鹅各个组织器官内仍检测到pcDNA-GPV-VP3的存在,但多数组织器官中的含量比1h时约少了103～104;③血液中pcDNA-GPV-VP3的含量较少,且1h～217d各时间点的差异不显著(P≥0.05);④不同剂量pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅各组织中的含量呈现的总体规律为200μg组>100μg组>50μg组,但差异不显著(P≥0.05)。因此,pcDNA-GPV-VP3免疫雏鹅后1h时可分布至雏鹅体内各组织器官中并持续存在217d以上。 展开更多
关键词 fq-PCR pcDNA-GPV-VP3 肌肉注射 雏鹅 动态分布
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FQ-PCR法对丙肝病毒RNA载量、抗-HCV、ALT异常的相关性探讨 被引量：1
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作者 宋予娟 《中外医疗》 2016年第3期48-49,共2页
目的应用FQ-PCR法观察丙肝病毒RNA载量、抗-HCV、ALT异常之间相关性。方法整群选择该院2012年7月—2015年7月收治95例丙型肝炎病毒感染患者作为研究对象,分别进行抗-HCV抗体、丙氨酸转氨酶(ALT)检测,计算HCV-RNA阳性率、抗-HCV阳性率、... 目的应用FQ-PCR法观察丙肝病毒RNA载量、抗-HCV、ALT异常之间相关性。方法整群选择该院2012年7月—2015年7月收治95例丙型肝炎病毒感染患者作为研究对象,分别进行抗-HCV抗体、丙氨酸转氨酶(ALT)检测,计算HCV-RNA阳性率、抗-HCV阳性率、ALT异常率。结果 95例患者中HCV-RNA阳性率为64.2%(61/95),抗-HCV阳性率为69.5%(66/95)。抗-HCV阳性率随HCV-RNA载量的增加而升高,二者呈正相关。95例患者中ALT异常率为50.5%(48/95),且异常率随HCV-RNA载量的增加而升高,二者呈正相关。结论 FQ-PCR法在丙型肝炎检测中的应用显示HCV-RNA载量与抗-HCV及ALT浓度之间均有明显相关,可作为重要检测手段应用于该病临床诊断及预后判断。 展开更多
关键词 丙肝病毒 fq-PCR法 抗-HCV ALT
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FQ-PCR法检测合肥地区由EV71感染引起儿童手足口病临床特征研究
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作者 林牧 龚亚东 +2 位作者 高绍莹 丁政 马庆庆 《吉林医学》 CAS 2017年第6期1094-1097,共4页
目的:了解合肥地区各型肠道病毒感染引起手足口病的流行病学特征,为预防和诊断合肥地区的手足口病提供理论依据。方法:采用FQ-PCR的方法对咽拭子进行肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型和Cox A16的检测,并采集疑似手足口病患儿和血液样本,... 目的:了解合肥地区各型肠道病毒感染引起手足口病的流行病学特征,为预防和诊断合肥地区的手足口病提供理论依据。方法:采用FQ-PCR的方法对咽拭子进行肠道病毒通用型、肠道病毒EV71型和Cox A16的检测,并采集疑似手足口病患儿和血液样本,进行辅助检查的结果对比。结果:获得各种类型肠道病毒的患儿,无性别差异,而就诊方式和年龄的大小与感染肠道病毒的类型存在有统计学意义的差异。结论:在手足口病大规模流行时,通过采集咽拭子进行RT-PCR检测,对手足口病的诊断有重要意义。 展开更多
关键词 肠道71型病毒 手足口病 fq-PCR 流行特征
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FQ-PCR技术在小儿患者巨细胞病毒感染检测中的应用
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作者 刘金禄 卢成 +1 位作者 何晓峰 李采青 《河北北方学院学报（医学版）》 2010年第6期16-17,共2页
目的:探讨荧光定量检测在小儿患者巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断价值。方法:对102例小儿患者,取尿液用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测。结果:102例标本中28例阳性,阳性率为27.5%。结论:荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、特异等优点,在H... 目的:探讨荧光定量检测在小儿患者巨细胞病毒(HCMV)感染中的诊断价值。方法:对102例小儿患者,取尿液用荧光定量PCR(FQ-PCR)技术检测。结果:102例标本中28例阳性,阳性率为27.5%。结论:荧光定量PCR检测方法具有快速、灵敏、特异等优点,在HCMV感染的早期诊断、治疗方案选择以及疗效观察方面具有广泛的应用前景。 展开更多
关键词 fq-PCR 技术检测 小儿 患者 巨细胞病毒 感染检测 HCMV感染 Children 荧光定量检测 治疗方案选择 PCR检测方法 诊断价值 早期诊断 应用前景 阳性率 疗效观察 尿液 面具 结果 标本
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FQ-PCR检查性罪错妇女阴道和宫颈分泌物沙眼衣原体比较
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作者 洪福昌 周华 +2 位作者 李永双 曾序春 杨帆 《岭南皮肤性病科杂志》 2004年第1期9-10,共2页
目的 :采用荧光定量PCR(FluorescentQuantitativePCR ,FQ -PCR)检测比较深圳市妇教所的性罪错妇女宫颈分泌物和阴道分泌物沙眼衣原体 (CT)阳性率的异同。方法 :研究对象为深圳市 2 0 0 2年1 0月～ 1 1月因卖淫而收容教育的 1 2 0例性罪... 目的 :采用荧光定量PCR(FluorescentQuantitativePCR ,FQ -PCR)检测比较深圳市妇教所的性罪错妇女宫颈分泌物和阴道分泌物沙眼衣原体 (CT)阳性率的异同。方法 :研究对象为深圳市 2 0 0 2年1 0月～ 1 1月因卖淫而收容教育的 1 2 0例性罪错妇女 ,用FQ -PCR检测宫颈分泌物和阴道分泌物CT感染。结果 :1 2 0例性罪错妇女宫颈分泌物FQ -PCR检查CT感染率为 3 0 8%。阴道分泌物的CT感染率为 2 9 2 % ;阴道分泌物与宫颈分泌物检测CT阳性率的差异无显著性。结论 :阴道分泌物与宫颈分泌物检测CT阳性率的差异无显著性。应用荧光定量PCR检测时可用阴道拭子取材。 展开更多
关键词 fq-PCR检查 性罪错 妇女 阴道分泌物 宫颈分泌物 沙眼衣原体感染 诊断
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荧光定量巢式逆转录PCR(FQ-nRT-PCR)在检测HCV-RNA中的意义
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作者 唐翠连 姚能云 《医学理论与实践》 2008年第6期636-639,共4页
目的:采用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测丙型肝炎患者外周血清HCV-RNA,探讨HCV-RNA的临床应用价值。方法:用FQ-nRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测192例HCV感染患者血清,比较HCV-RNA和抗-HCV的临床意义。结果:... 目的:采用荧光定量巢式逆转录聚合酶链反应(FQ-nRT-PCR)检测丙型肝炎患者外周血清HCV-RNA,探讨HCV-RNA的临床应用价值。方法:用FQ-nRT-PCR和酶联免疫吸附试验(ELISA)分别检测192例HCV感染患者血清,比较HCV-RNA和抗-HCV的临床意义。结果:192例丙型肝炎患者血清标本中,HCV-RNA检出率为75.53%(145/192),抗-HCV检出率为91.66%(176/192)。急性丙型肝炎患者HCV-RNA定量均值达5.21×106拷贝/ml,慢性肝炎次之,肝硬化相对偏低,为5.14×103拷贝/ml。结论:192例丙型肝炎患者抗-HCV检出率高于HCV-RNA检出率,但HCV-RNA对丙型肝炎的早期诊断具有灵敏度高、定量准、假阳性率低等优点,此外在病毒复制水平及抗病毒治疗的疗效评估方面具有重要的临床价值。 展开更多
关键词 肝炎病毒 丙型 RNA病毒 fq-nRT-PCR ELISA 肝炎抗体
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FQ-PCR技术分析葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌属的影响 被引量：10
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作者 刘茜明 杨光勇 +6 位作者 何光志 田维毅 蔡琨 王平 黄高 梁建东 王文佳 《时珍国医国药》 CAS CSCD 北大核心 2016年第8期1820-1823,共4页
目的探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌在不同肠管内的动态的影响。方法采用氨苄青霉素灌胃制备巴马猪抗生素性腹泻动物模型,然后用葛根芩连汤进行治疗,采用实时荧光定量PCR检测葛根芩连汤治疗前后十二指肠、空肠、回... 目的探讨葛根芩连汤对抗生素相关性腹泻模型肠道双歧杆菌在不同肠管内的动态的影响。方法采用氨苄青霉素灌胃制备巴马猪抗生素性腹泻动物模型,然后用葛根芩连汤进行治疗,采用实时荧光定量PCR检测葛根芩连汤治疗前后十二指肠、空肠、回肠、盲肠、结肠中双歧杆菌的数量,分析其动态变化。结果与正常对照组比较,模型组肠道内双歧杆菌数量显著减低(P<0.01),而用药组7d与之相比亦有差异(P<0.05);与模型组比较,葛根芩连汤治疗组双歧杆菌属在各个肠段中数量显著上升(P<0.05)。结论氨苄青霉素灌胃会减少肠道优势菌双歧杆菌数量,葛根芩连汤对抗生素对腹泻模型肠道双歧杆菌具有调理作用。 展开更多
关键词 fq-PCR 葛根芩连汤 抗生素性相关性腹泻 双歧杆菌
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FQ-PCR技术在饮用水微生物监测中的应用
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作者 丁清波 戴浩 +1 位作者 吴敬波 方东明 《黑龙江环境通报》 2009年第4期75-76,共2页
阐述了实时荧光定量PCR技术的原理、特点及其在水源微生物检测中的应用与研究进展,探讨了存在的问题,以及其发展和应用前景。
关键词 fq-PCR技术 饮用水 环境监测
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