目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head ...目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head box protein 4,FOXP4)的相关性及可能的结合位点。方法:应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学SP法检测LSCC组织及其相应癌旁正常组织中FOXP4 mRNA和蛋白的表达情况。应用在线网站预测与FOXP4有调控作用的miRNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-4476在LSCC组织与其相应癌旁正常组织及4种人喉癌细胞系中的表达情况,并检测其与FOXP4表达的相关性。采用染色体免疫共沉淀技术检测FOXP4与miR-4476启动子区的结合情况。将pcDNA3.1-FOXP4与报告基因载体pGL3-miR-4476启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因荧光信号活性分析FOXP4对miR-4476启动子区的影响。将miR-4476模拟物及抑制物分别转染人喉癌TU177和AMC-HN-8细胞,用实时荧光定量PCR法检测转染效率,然后采用MTS实验、细胞克隆形成实验、Transwell小室迁移及侵袭实验分别检测miR-4476表达调控对喉癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:在LSCC组织中FOXP4 mRNA的表达水平(P<0.05)及蛋白阳性表达率(P<0.01)均高于正常组织,且蛋白表达阳性率与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期相关(P值均<0.05)。LSCC组织中miR-4476表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01),与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移相关(P值均<0.05)。LSCC组织中miR-4476与FOXP4的表达呈正相关(R=0.455,P<0.01),而且FOXP4与miR-4476的启动子区结合(P<0.01),可能具有促进miR-4476启动子活性的作用(P<0.01)。喉癌细胞中miR-4476表达均高于对照组(P<0.05),转染miR-4476模拟物后TU177细胞中miR-4476表达水平明显升高(P<0.01),而转染miR-4476抑制物后AMC-HN-8细胞中miR-4476表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组相比,转染miR-4476模拟物可增强喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均<0.01),转染miR-4476抑制物可减弱喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均<0.05)。结论:miR-4476可能是FOXP4的调控分子,其高表达可能与LSCC的发生和发展相关。上调或下调miR-4476表达可以增强或抑制喉癌细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力。展开更多
目的近年来,转录因子叉头框家族在肿瘤防治研究中越来越受到重视,但其在食管胃结合部腺癌(adenocarcinomas of the esophagogastric junction,AEG)中的研究相对较少。本研究旨在探讨转录因子叉头框蛋白P4(forkhead box protein 4,FOXP4)...目的近年来,转录因子叉头框家族在肿瘤防治研究中越来越受到重视,但其在食管胃结合部腺癌(adenocarcinomas of the esophagogastric junction,AEG)中的研究相对较少。本研究旨在探讨转录因子叉头框蛋白P4(forkhead box protein 4,FOXP4)在AEG组织和胃癌细胞系中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法选取2014-06-19-2016-12-21河北医科大学第四医院生物标本库采集的50例AEG手术患者的癌及癌旁组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FOXP4的表达水平;同时应用qRT-PCR法检测胃癌细胞系(BGC-823、SGC-7901、MGC-803和HGC-27)中FOXP4的表达水平。选取FOXP4表达量最高的胃癌细胞系进行实验,将si-FOXP4转染细胞作为实验组,si-NC转染细胞和空白培养细胞作为对照组,细胞增殖实验(MTS法)、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测转染前后胃癌细胞生物学行为变化;流式细胞术检测转染前后细胞周期改变;qRT-PCR及蛋白印迹法检测转染前后上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA及蛋白的表达情况。计量资料2组样本比较采用独立样本t检验和近似t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,多组内两两比较为SNK检验。结果50例AEG组织中FOXP4表达量为1.917(0.976,2.908),高于癌旁正常组织的0.734(0.320,1.836),差异有统计学意义(Z=-2.093,P=0.036),并且FOXP4的表达水平与AEG患者临床分期(Z=-2.722,P=0.006)和淋巴结转移(Z=-2.744,P=0.006)有关。FOXP4在胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823和HGC-27中的表达分别为5.183±0.870、2.615±0.308、4.696±0.792和2.059±0.569,与正常细胞对照1.055±0.444相比升高。与对照组相比,敲低FOXP4抑制胃癌细胞的增殖(F=114.848,P<0.001)、侵袭(F=21.183,P<0.001)和迁移(F=68.134,P<0.001)能力。间充质细胞标志物N-cadherin(t=4.958,P=0.008)、Vimentin(t=9.555,P=0.001)、Twist(t=12.608,P<0.001)和β-catenin(t=2.968,P=0.041)的mRNA及蛋白水平表达降低,E-cadherin的mRNA(t=5.420,P=0.006)及蛋白水平表达升高;G0/G1期细胞比例增加,S^G2/M期细胞比例降低,t=7.050,P=0.002。结论FOXP4在AEG组织及胃癌细胞系中表达上调,异常表达的FOXP4与胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT相关。展开更多
文摘目的:检测微RNA(microRNA,miRNA,miR)-4476在喉鳞状细胞癌(laryngeal squamous cell carcinoma,LSCC)组织及人喉癌细胞系中的表达水平,以及其对喉癌细胞体外增殖、迁移及侵袭能力的影响,并检测miR-4476与转录因子叉头框蛋白4(fork head box protein 4,FOXP4)的相关性及可能的结合位点。方法:应用实时荧光定量PCR法和免疫组织化学SP法检测LSCC组织及其相应癌旁正常组织中FOXP4 mRNA和蛋白的表达情况。应用在线网站预测与FOXP4有调控作用的miRNA,采用实时荧光定量PCR法检测miR-4476在LSCC组织与其相应癌旁正常组织及4种人喉癌细胞系中的表达情况,并检测其与FOXP4表达的相关性。采用染色体免疫共沉淀技术检测FOXP4与miR-4476启动子区的结合情况。将pcDNA3.1-FOXP4与报告基因载体pGL3-miR-4476启动子区共转染至293T细胞中,通过检测荧光素酶报告基因荧光信号活性分析FOXP4对miR-4476启动子区的影响。将miR-4476模拟物及抑制物分别转染人喉癌TU177和AMC-HN-8细胞,用实时荧光定量PCR法检测转染效率,然后采用MTS实验、细胞克隆形成实验、Transwell小室迁移及侵袭实验分别检测miR-4476表达调控对喉癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。结果:在LSCC组织中FOXP4 mRNA的表达水平(P<0.05)及蛋白阳性表达率(P<0.01)均高于正常组织,且蛋白表达阳性率与肿瘤的淋巴结转移和TNM分期相关(P值均<0.05)。LSCC组织中miR-4476表达水平明显高于癌旁正常组织(P<0.01),与肿瘤的TNM分期及淋巴结转移相关(P值均<0.05)。LSCC组织中miR-4476与FOXP4的表达呈正相关(R=0.455,P<0.01),而且FOXP4与miR-4476的启动子区结合(P<0.01),可能具有促进miR-4476启动子活性的作用(P<0.01)。喉癌细胞中miR-4476表达均高于对照组(P<0.05),转染miR-4476模拟物后TU177细胞中miR-4476表达水平明显升高(P<0.01),而转染miR-4476抑制物后AMC-HN-8细胞中miR-4476表达水平明显降低(P<0.05)。与对照组相比,转染miR-4476模拟物可增强喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均<0.01),转染miR-4476抑制物可减弱喉癌细胞的体外增殖、迁移和侵袭能力(P值均<0.05)。结论:miR-4476可能是FOXP4的调控分子,其高表达可能与LSCC的发生和发展相关。上调或下调miR-4476表达可以增强或抑制喉癌细胞的体外增殖、迁移与侵袭能力。
文摘目的近年来,转录因子叉头框家族在肿瘤防治研究中越来越受到重视,但其在食管胃结合部腺癌(adenocarcinomas of the esophagogastric junction,AEG)中的研究相对较少。本研究旨在探讨转录因子叉头框蛋白P4(forkhead box protein 4,FOXP4)在AEG组织和胃癌细胞系中的表达及其对胃癌细胞生物学行为的影响。方法选取2014-06-19-2016-12-21河北医科大学第四医院生物标本库采集的50例AEG手术患者的癌及癌旁组织,应用实时荧光定量聚合酶链反应(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)检测FOXP4的表达水平;同时应用qRT-PCR法检测胃癌细胞系(BGC-823、SGC-7901、MGC-803和HGC-27)中FOXP4的表达水平。选取FOXP4表达量最高的胃癌细胞系进行实验,将si-FOXP4转染细胞作为实验组,si-NC转染细胞和空白培养细胞作为对照组,细胞增殖实验(MTS法)、划痕实验和Transwell小室侵袭实验检测转染前后胃癌细胞生物学行为变化;流式细胞术检测转染前后细胞周期改变;qRT-PCR及蛋白印迹法检测转染前后上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关分子mRNA及蛋白的表达情况。计量资料2组样本比较采用独立样本t检验和近似t检验,多组间均数比较采用单因素方差分析,多组内两两比较为SNK检验。结果50例AEG组织中FOXP4表达量为1.917(0.976,2.908),高于癌旁正常组织的0.734(0.320,1.836),差异有统计学意义(Z=-2.093,P=0.036),并且FOXP4的表达水平与AEG患者临床分期(Z=-2.722,P=0.006)和淋巴结转移(Z=-2.744,P=0.006)有关。FOXP4在胃癌细胞系SGC-7901、MGC-803、BGC-823和HGC-27中的表达分别为5.183±0.870、2.615±0.308、4.696±0.792和2.059±0.569,与正常细胞对照1.055±0.444相比升高。与对照组相比,敲低FOXP4抑制胃癌细胞的增殖(F=114.848,P<0.001)、侵袭(F=21.183,P<0.001)和迁移(F=68.134,P<0.001)能力。间充质细胞标志物N-cadherin(t=4.958,P=0.008)、Vimentin(t=9.555,P=0.001)、Twist(t=12.608,P<0.001)和β-catenin(t=2.968,P=0.041)的mRNA及蛋白水平表达降低,E-cadherin的mRNA(t=5.420,P=0.006)及蛋白水平表达升高;G0/G1期细胞比例增加,S^G2/M期细胞比例降低,t=7.050,P=0.002。结论FOXP4在AEG组织及胃癌细胞系中表达上调,异常表达的FOXP4与胃癌细胞的增殖、迁移、侵袭和EMT相关。
