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CryIA(c)和gna融合基因植物表达载体的构建 被引量：5
1
作者 冯翠莲 张树珍 《热带作物学报》 CSCD 2010年第2期224-228,共5页
采用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR),通过连接多肽FMDV2A序列将CryIA(c)和gna基因相融合,得到CryIA(c)-2A-gna抗虫融合基因。并进一步将玉米UBI启动子和融合基因(CryIA(c)-2A-gna)分别连接到植... 采用重叠延伸PCR技术(gene splicing by overlap extension PCR,简称SOE PCR),通过连接多肽FMDV2A序列将CryIA(c)和gna基因相融合,得到CryIA(c)-2A-gna抗虫融合基因。并进一步将玉米UBI启动子和融合基因(CryIA(c)-2A-gna)分别连接到植物表达载体pCAMBIA3300上,构建成由玉米UBI启动子驱动抗虫融合基因的植物表达载体pNUBG。经过限制性酶切分析鉴定,结果表明,含有融合基因的植物表达载体构建成功。 展开更多
关键词 重叠延伸PCR fmdv2a 融合基因 表达载体
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颗粒溶素和穿孔素真核共表达及其对A549细胞的影响
2
作者 王晚霞 兰喜 +2 位作者 徐向红 居军 柳纪省 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期12-17,共6页
目的:克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pGNLY-2A-PFP,观察其在人肺癌A549细胞中的表达情况。方法:体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段,并将其分别插入pMD18-T进行测序,鉴定... 目的:克隆人颗粒溶素和穿孔素基因并构建真核表达载体pGNLY-2A-PFP,观察其在人肺癌A549细胞中的表达情况。方法:体外分离培养外周血单个核细胞并抽提总RNA,RT-PCR扩增人颗粒溶素和穿孔素的基因片段,并将其分别插入pMD18-T进行测序,鉴定正确后构建pIRES-GNLY、pIRES-PFP及pGNLY-2A-PFP并转染人肺癌A549细胞,RT-PCR和间接免疫荧光检测目的蛋白表达,流式细胞Annexin V/PI检测转染后细胞凋亡情况。结果:成功获取了人颗粒溶素和穿孔素cDNA,构建了真核表达载体pIRES-GNLY、pIRES-PFP、pGNLY-2A-PFP,转染A549细胞后检测出了目的蛋白的表达,pGNLY-2A-PFP转染组细胞死亡率高于其他对照组(P<0.05),死亡细胞以凋亡为主。结论:人颗粒溶素和穿孔素基因可以在人肺癌A549细胞中表达,二者共表达能够促进细胞凋亡,这将有助于颗粒溶素和穿孔素在肿瘤治疗中应用的后续研究。 展开更多
关键词 颗粒溶素 穿孔素 人肺癌A549细胞 fmdv2a
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FMDV 2A介导的乳腺上皮细胞双基因表达载体构建及表达
3
作者 陈秋菊 王韵斐 +4 位作者 崔易虹 朱广琴 杨明明 宋宇轩 曹斌云 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期1396-1401,共6页
构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV ... 构建FMDV 2A介导的人白细胞介素2基因(hIL-2)和增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因双顺反子乳腺特异性表达载体,并验证其在乳腺上皮细胞中的表达。克隆奶山羊β-酪蛋白启动子序列,将hIL-2基因序列置于启动子之后,然后利用口蹄疫病毒2A(FMDV 2A)自剪切序列连接EGFP基因,构建出乳腺特异性的双顺反子表达载体pFIENβ,并利用脂质体转染山羊乳腺上皮细胞,然后用RT-PCR技术和Western blot检测hIL-2基因与EG-FP基因的表达。重组质粒pFIENβ经酶切鉴定后表明构建成功,转染质粒PFIENβ和pEGFP-C1的细胞均观察到绿色荧光;从转染pFIENβ的乳腺上皮细胞中扩增出hIL-2基因和EGFP基因,而转染pEGFP-C1的细胞中只扩增出EGFP基因;经Western blot检测,转染pFIENβ的细胞中均表达了hIL-2和EGFP蛋白。结果表明山羊β-酪蛋白启动子能同时启动hIL-2基因和EGFP基因在山羊乳腺上皮细胞中的表达,并且利用FMDV 2A元件实现了hIL-2基因和EGFP基因的非融合型表达。 展开更多
关键词 人白细胞介素2 EGFP fmdv2a 双顺反子
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