O型口蹄疫病毒磁微粒化学发光抗体检测方法的建立

1

作者 耿玉静 白晶晶 +5 位作者 刘慧芳 李长印 张鹏翼 原小燕 吴彬 李玉婉 《中国动物检疫》 2025年第6期87-91,共5页

为建立一种高通量全自动磁微粒化学发光O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)免疫抗体检测方法,利用O型FMDV-VP1结构蛋白和酶标单抗,通过各反应条件优化,建立O型FMDV免疫抗体磁微粒化学发光检测方法。结果显示:当所建方法... 为建立一种高通量全自动磁微粒化学发光O型口蹄疫病毒(foot and mouth disease virus,FMDV)免疫抗体检测方法,利用O型FMDV-VP1结构蛋白和酶标单抗,通过各反应条件优化,建立O型FMDV免疫抗体磁微粒化学发光检测方法。结果显示:当所建方法检测临界值(S/N)≤0.8时,O型FMDV抗体阳性;当S/N>0.8时,O型FMDV抗体阴性。与5种常见病原的免疫血清不存在交叉反应,特异性良好;对敏感性质控血清的最低检出量为1:1 024,批间批内变异系数均在10%以内,与标准方法的符合率达到95.9%。结果表明该方法具有较高的敏感性和特异性、重复性。本研究为O型FMDV免疫抗体检测提供一种高效的检测方法。 展开更多

关键词 O型FMDV 磁微粒化学发光 酶标抗体 敏感性 特异性

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猪源SIRT5促进O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制

2

作者 陈国辉 史喜绢 +11 位作者 别鑫恬 杨行 赵思越 张大俊 赵登率 闫文倩 陈玲玲 赵美玉 何路 郑海学 刘霞 张克山 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期421-429,共9页

目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特... 目的探究猪源SIRT5对O型口蹄疫病毒(Foot and mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制的影响及其调控FMDV-O复制的初步机制。方法利用Western Blotting和RT-qPCR检测FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5表达情况;设计合成3对SIRT5特异性siRNA,通过Western Blotting和RT-qPCR检测SIRT5、FMDV-O蛋白水平、转录水平及病毒拷贝数的变化情况;构建SIRT5真核表达质粒转染至PK-15细胞,运用Western Blotting、RT-qPCR实验方法探究过表达SIRT5对FMDV-O复制的影响,同时利用RT-qPCR检测过表达SIRT5对SeV、FMDV-O诱导的I型干扰素刺激基因mRNA表达水平的影响。结果FMDV-O感染PK-15细胞后内源性SIRT5的表达上调;siRNA干扰SIRT5抑制FMDV-O的复制;过表达SIRT5促进FMDV-O复制;过表达SIRT5降低了SeV、FMDV-O诱导的干扰素刺激基因mRNA的表达水平。结论FMDV-O感染刺激宿主SIRT5表达,而猪源SIRT5通过抑制I型干扰素刺激基因的产生进而促进FMDV-O复制。本研究为进一步探究猪源SIRT5促进FMDV-O复制的机制提供参考依据。 展开更多

关键词 猪源SIRT5 fmdv-o 干扰素刺激基因 PK-15细胞

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猪源组织蛋白酶S抑制O型口蹄疫病毒在PK-15细胞复制 被引量：1

3

作者 史喜绢 刘原子 +10 位作者 张大俊 侯景 申超超 杨博 张婷 袁兴国 任瑞瑞 杜晓华 张克山 郑海学 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期1652-1661,共10页

前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞... 前期研究数据表明组织蛋白酶S(cathepsin S,CTSS)在猪初乳中表达水平显著高于常乳,且CTSS有抑制病毒复制的作用,本研究旨在探究猪源CTSS对O型口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus serotype O,FMDV-O)复制及对FMDV诱导的抗病毒细胞因子的影响。FMDV-O感染PK-15细胞,利用RT-qPCR和Western blot分别在转录和翻译水平探究FMDV-O感染对内源性CTSS表达的影响;使用CTSS活性检测试剂盒测定FMDV-O感染对CTSS酶活性的影响;根据GenBank公布的 CTSS 基因序列(XM_021089893.1)构建CTSS真核表达质粒,利用脂质体方法转染PK-15细胞,通过Western blot检测CTSS表达情况,并在此基础上通过Western blot和RT-qPCR检测过表达CTSS对FMDV-O复制及FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子mRNA水平的影响;进一步针对CTSS设计合成3对特异性siRNA,利用Western blot和RT-qPCR检测CTSS和FMDV-O的变化。结果表明,FMDV-O感染PK-15细胞能显著上调猪源CTSS表达并增强CTSS酶活性;过表达CTSS能抑制FMDV-O在 PK-15 细胞中复制,这种抑制作用可能是通过促进FMDV-O诱导的抗病毒细胞因子产生而发挥功能的;干扰序列siRNA-2947下调内源性CTSS表达进而促进FMDV-O的复制。猪源CTSS促进宿主抗病毒细胞因子产生可能是抑制FMDV-O复制的原因之一,本研究为深入探究宿主CTSS在抗FMDV天然免疫应答中的作用及机制提供依据。 展开更多

关键词 组织蛋白酶S fmdv-o PK-15细胞 抗病毒功能

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新疆部分地区猪口蹄疫病毒O型抗体检测与分析 被引量：5

4

作者 常军帅 李娜 +4 位作者 王紫阳 屈勇刚 梁晏 赵玉 陈宁 《养猪》 2021年第5期112-114,共3页

为了解新疆部分地区2019-2020年猪口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗体水平,笔者采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对采自7家规模化猪场不同类别猪群的414份血清样品进行FMDV-O型抗体检测与分析。结果显示,在414份样品中,81.88%(339/414)的血清有FMD... 为了解新疆部分地区2019-2020年猪口蹄疫病毒O型(FMDV-O)抗体水平,笔者采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法对采自7家规模化猪场不同类别猪群的414份血清样品进行FMDV-O型抗体检测与分析。结果显示,在414份样品中,81.88%(339/414)的血清有FMDV-O型的抗体存在,平均OD值为0.54。A~G猪场的阳性率分别为83.87%(52/62)、89.29%(50/56)、95.31%(61/64)、73.96%(71/96)、87.50%(42/48)、75.00%(36/48)、67.50%(27/40);C猪场的平均OD值与A、D、F、G存在显著差异(P<0.05);B猪场的平均OD值与C、D、E、F、G场差异不显著(P>0.05)。各类别猪群中,其中保育猪的平均OD值最高,为0.79,繁殖母猪的平均OD值最低,为0.34;种公猪的平均OD值与哺乳仔猪、保育猪存在显著差异(P<0.05);肥育猪的平均OD值与后备猪、繁殖母猪差异显著(P<0.05)。该结果可为新疆地区FMDV-O型的防控提供帮助。 展开更多

关键词 fmdv-o 抗体检测 酶联免疫吸附试验

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口蹄疫病毒O、A、AsiaⅠ型定型诊断胶体金免疫层析方法的建立 被引量：28

5

作者 蒋韬 梁仲 +5 位作者 陈涓 何继军 吕律 马维民 刘在新 刘湘涛 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期3801-3808,共8页

【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/... 【目的】建立一种从田间样品中快速、灵敏、简便检测O、A、AsiaI型口蹄疫病毒抗原的胶体金免疫层析方法(GICA)。【方法】采用柠檬酸三钠还原制备胶体金颗粒,标记纯化的标准株O、A、AsiaI型口蹄疫抗体。将纯化的口蹄疫流行株O/China99,A/AF72and AsiaⅠ/China05抗体和羊抗豚鼠抗体分别包被在硝酸纤维素膜上,作为检测带与质控带。经试验条件优化,组装形成胶体金定型诊断试剂盒。【结果】本试验研制的口蹄疫定型试剂盒具有良好的灵敏度,可检测到7.8×104LD50(1﹕128倍稀释乳鼠毒)的病毒量。同时对阳性及阴性样品进行3次重复检测结果完全相同,说明其有较好的重复性;特异性试验证实该方法在检测口蹄疫临床症状相似病原,如猪水疱病抗原(SVD)、水泡性口炎(VS)、水泡性疹(VES)等病毒时无交叉反应;试剂盒对206份已知血清型田间及实验室样品的符合率试验,O、A、AsiaⅠ型和阴性样本的符合率分别为92.45%、91.66%、92.75%、100%定型准确率94.58%。试剂盒在4℃下可保存6个月。【结论】本试验研发的口蹄疫病毒胶体金定型诊断试剂盒是一种快速、灵敏、特异的FMD抗原检测方法,对基层现场具有广泛应用价值。 展开更多

关键词 O、A、AsiaI型口蹄疫病毒 胶体金 免疫层析法

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O型口蹄疫泛亚毒株单克隆抗体的制备及抗原表位差异分析 被引量：12

6

作者 鲁会军 金宁一 +5 位作者 韩松 郑敏 王凯 贾雷立 尹革芬 金扩世 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第5期494-496,共3页

用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160～1... 用纯化的O型口蹄疫泛亚毒株免疫BALB/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞进行融合,经3次克隆和间接ELISA筛选,获得了ⅢA11、ⅢC3和ⅢF10 3株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株.通过间接ELISA测定,单抗效价为:细胞培养上清1:160～1:640,腹水为1:5×104～1:4×105;经ELISA法测定,3株单克隆抗体均与泛亚株VP1蛋白反应,而不与A型口蹄疫病毒VP1蛋白反应;单抗的亚类鉴定结果表明,ⅢA11和ⅢF10分泌的抗体为IgG1亚类,ⅢC3分泌的抗体为IgG2b亚类.单克隆抗体抗原识别位点分析结果表明,ⅢA11与另外2种单克隆抗体的识别位点不同,而ⅢC3和ⅢF10的识别位点相近. 展开更多

关键词 口蹄疫 O型 泛亚毒株 单克隆抗体 识别位点

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O型口蹄疫病毒VP1嵌合基因的构建及原核表达 被引量：11

7

作者 郑敏 金宁一 +3 位作者 鲁会军 韩松 金扩世 李昌 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期561-563,共3页

首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,... 首先合成我国O型口蹄疫病毒2个疫苗毒株VP 1基因的3个抗原表位,与另外扩增的流行毒株VP 1基因末端273 bp片段相连,构建出O型VP 1嵌合基因片段(VP 1O)。然后,将VP 1O基因连接到原核表达载体pET 28a上,构建了重组表达质粒pET 28a-VP 1O,转化大肠杆菌BL 21(DE 3)进行诱导表达。SDS-PAGE电泳表明,VP 1O基因在大肠杆菌中获得表达。W estern b lotting检测证实表达的VP 1O蛋白具有良好的生物学活性。对表达蛋白通过包涵体洗涤的方法进行初步纯化,获得了较高纯度的VP 1O蛋白。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 O型 VP1基因 克隆 表达

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O型口蹄疫病毒免疫层析试纸条检测方法的建立 被引量：18

8

作者 蒋韬 梁仲 +6 位作者 陈涓 何继军 吕律 马维民 田宏 刘在新 刘湘涛 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期60-65,共6页

为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒(FMDV)抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标... 为建立一种快速、准确检测O型口蹄疫病毒(FMDV)抗原的胶体金免疫层析方法,将兔、豚鼠抗O型FM-DV多抗用DEAE-Sephose层析柱纯化。胶体金标记O型豚鼠口蹄疫抗体,形成金标探针并将其喷涂于玻璃纤维上。兔抗O型FMDV抗体和羊抗豚鼠IgG分别标记于硝酸纤维素膜上作为检测带和质控带,各部件按顺序装配形成快速诊断试纸条。如果待检样品中含有O型FMDV,它将与玻璃纤维上的胶体金探针和兔抗O型FMDV抗体形成夹心复合物,并在检测带被固定,沉集反应形成肉眼可见的红色条带。在田间试验中,53份试验样本分别用试纸条和反向间接血凝试验进行检测,2种方法的阳性率分别为95.45%和90.91%。评价试验证实,本研究建立的胶体金免疫层析方法简便、快速,具有良好的特异性和敏感性,非常适于基层兽医实验室诊断时使用。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 试纸条 胶体金免疫层析法

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O型口蹄疫抗体金标检测试纸条判定标准的确立 被引量：3

9

作者 智晓莹 任维维 +3 位作者 祁光宇 吕建亮 梁仲 蒋韬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期1415-1421,共7页

本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫... 本试验旨在迅速、准确检测口蹄疫阴性血清和阳性血清,确立O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准。通过3批次O型口蹄疫抗体金标检测试纸条,对180份猪、牛、羊口蹄疫阴性血清,197份猪、牛O型口蹄疫弱阳性血清,317份猪、牛、羊O型口蹄疫阳性血清,223份牛Asia 1、A型口蹄疫阳性血清,600份田间血清样品进行检测,同时用O型口蹄疫液相阻断ELISA和O型口蹄疫正向间接血凝2种方法检测相同的血清样品。对3种方法检测的结果进行分析,并且将试纸条的检测线和质控线的显色情况与O型口蹄疫液相阻断ELISA的抗体滴度相比较。确立了试纸条的诊断标准:试纸条抗体滴度1∶2-为口蹄疫抗体阴性;试纸条抗体滴度1∶8+为O型口蹄疫阳性血清。根据试纸条的显色结果与液相阻断ELISA的结果的关系,绘制了比色卡。试纸条的判定标准检测血清结果与液相阻断ELISA和正向间接血凝结果分别进行统计学分析,试纸条与液相阻断ELISA和正向间接血凝相关性分别为y=1.142x+0.7421,y=1.1845x+0.8623;相关系数(r)分别为0.9221和0.9033。结果显示,O型口蹄疫抗体金标检测试纸条的判定标准的确立和比色卡的绘制,实现半定量分析,更加迅速、准确,适于实验室、基层兽医站和养殖场使用。 展开更多

关键词 O型口蹄疫抗体金标检测试纸条 O型口蹄疫液相阻断ELISA O型口蹄疫正向间接血凝 判定标准 比色卡

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CpG DNA重组质粒对猪O型口蹄疫病毒抗原的免疫佐剂效应 被引量：8

10

作者 景志忠 蒙学莲 +7 位作者 窦永喜 陈国华 房永祥 黄银君 王超英 刘西兰 张军 才学鹏 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期862-866,共5页

作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促... 作者应用含CpG基序序列的重组质粒（即CpG DNA）作为免疫佐剂,评价其对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗的免疫增强效果。结果表明：CpG DNA重组质粒与猪口蹄疫灭活病毒抗原疫苗配伍免疫小鼠,CpG DNA重组质粒对小鼠具有较强的免疫佐剂效应,能促进口蹄疫病毒抗原诱导产生较高水平的特异性抗体,其抗体滴度是空载体疫苗对照的2倍。CpG DNA重组质粒与商品化猪口蹄疫灭活疫苗配伍免疫试验猪,其增强抗原诱导的特异性抗体滴度最高可达标准疫苗的4倍以上,也显著高于空载体疫苗对照 与病毒纯化抗原配伍免疫动物,攻毒后其免疫保护效力的PD50高达13.00,远高于标准疫苗对照（PD504.69）。在CpG DNA重组质粒剂量选择试验中,含低剂量的CpG DNA疫苗（50、200μg.头份-1）都比高剂量组（500μg.头份-1）诱导的抗体滴度高,其中50和200μg.头份-1的CpG DNA剂量,在接种后14~32 d诱导的抗体滴度高达1∶1500,是标准疫苗的4~5倍,而500μg.头份-1剂量诱导的抗体仅是标准疫苗的2倍,说明CpG DNA重组质粒在低剂量时即可发挥强烈的佐剂效应。研究表明CpG DNA对猪O型口蹄疫病毒抗原疫苗有较强的免疫佐剂效应,且使用剂量低,应用前景广阔。 展开更多

关键词 CPGDNA O型口蹄疫病毒 抗原 佐剂效应

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口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段的克隆及其基因特征 被引量：2

11

作者 郑敏 金宁一 +6 位作者 张洪勇 刘棋 韦婷 郭建刚 李华明 尹革芬 鲁会军 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期124-130,共7页

采用RT—PCR方法对口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/NY00株基因组L片段长7805nt,其中包括715at的5’非编码区和6999nt的多聚蛋白编码区。将O/NY00株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示:O/N... 采用RT—PCR方法对口蹄疫病毒O/NY00株基因组L片段进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/NY00株基因组L片段长7805nt,其中包括715at的5’非编码区和6999nt的多聚蛋白编码区。将O/NY00株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示:O/NY00株与O/SKR/2000、O/UKG/3/2001遗传关系最近,而与其它毒株遗传关系较远,属于O型口蹄疫ME-SA拓扑型PanAsia株的成员。与Cathay拓扑型的代表毒株O/TAW/97比较,两者在主要抗原位点1和位点3呈现出明显的以拓扑型为特征的氨基酸差别,提示两拓扑型毒株之间有较高的抗原差异。 展开更多

关键词 毒株 口蹄疫病毒 遗传关系 基因组 非编码区 抗原位点 序列比较 基因特征 RT—PCR方法 SA

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口蹄疫病毒O/LZ株的分子特性分析 被引量：2

12

作者 马鸣潇 金宁一 +9 位作者 李昌 刘慧娟 郑敏 金明兰 贾雷立 张林 鲁会军 沈国顺 王瑞林 金扩世 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第10期1027-1035,共9页

采用RT-PCR方法对口蹄疫病毒O/LZ株基因组序列进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/LZ株除poly(C)和poly(A)外基因组序列长8 104nt,其中包括1 042nt的5′非编码区和6 969nt的多聚蛋白编码区。将O/LZ株与其它参考毒株进行序列比... 采用RT-PCR方法对口蹄疫病毒O/LZ株基因组序列进行了分子克隆和序列测定。结果表明:获得的O/LZ株除poly(C)和poly(A)外基因组序列长8 104nt,其中包括1 042nt的5′非编码区和6 969nt的多聚蛋白编码区。将O/LZ株与其它参考毒株进行序列比较,结果显示O/LZ株与O/HNK/2002、O/ES/2001、O/CHP/TW/97等遗传关系最近,而与其它毒株遗传关系较远,属于O型口蹄疫Cathay拓扑型。与ME-SA拓扑型PanAsia株的毒株比较,两者在主要抗原位点1和位点3呈现出明显的以拓扑型为特征的氨基酸差别,提示两拓扑型毒株之间有较高的抗原差异。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒(FMDV) O/LZ株 基因组 分子生物学特性 序列分析

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O型口蹄疫病毒单克隆抗体的制备和鉴定 被引量：3

13

作者 宋帅 林彤 +4 位作者 邵军军 丛国正 独军政 高闪电 常惠芸 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期325-328,共4页

利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1... 利用O型口蹄疫病毒(FMDV)免疫BALB/c小鼠,取其脾细胞与Sp2/0细胞进行融合,经间接ELISA方法筛选和7次亚克隆后获得2株能稳定分泌单克隆抗体(McAb)的杂交瘤细胞株。经间接ELISA检测,2株杂交瘤细胞株(3E1、7E6)的腹水效价分别为1∶25600、1∶102400。间接免疫荧光试验和特异性试验表明2株McAb可与不同株的O型FMDV反应,而不与其他血清型的FMDV反应。Western blot和叠加试验表明2株单抗可识别O型FMDV结构蛋白VP1上的同一个抗原表位。此特异性McAb的获得将为O型FMDV疫苗的研制和诊断方法的建立奠定基础。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 单克隆抗体 间接ELISA

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口蹄疫病毒O型Cathay毒株的分离鉴定 被引量：4

14

作者 葛淑敏 金宁一 尹革芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第35期15489-15490,共2页

[目的]研究FMD疑似组织病料,为口蹄疫相关研究工作提供试验参考。[方法]应用细胞培养、电镜观察、反向间接血凝试验、RT-PCR及测序技术对FMD疑似组织病料进行分离鉴定,确定其血清型及基因型。[结果]结果显示,分离鉴定的FMD疑似组织病料... [目的]研究FMD疑似组织病料,为口蹄疫相关研究工作提供试验参考。[方法]应用细胞培养、电镜观察、反向间接血凝试验、RT-PCR及测序技术对FMD疑似组织病料进行分离鉴定,确定其血清型及基因型。[结果]结果显示,分离鉴定的FMD疑似组织病料为O型Cathay口蹄疫病毒株。[结论]为口蹄疫的诊断、防治、流行病学调查及疫苗的研究使用奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 O型 CATHAY 鉴定

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抗O型口蹄疫病毒单克隆抗体相对亲和力的测定 被引量：4

15

作者 宋帅 林彤 +1 位作者 邵军军 常惠芸 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期333-335,共3页

目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定。方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3... 目的:对3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力进行测定。方法:用纯化的O型口蹄疫病毒作为包被抗原建立一种检测方法,将3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)制备腹水并纯化,并用建立的检测方法测定3株单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力。结果:检测方法中抗原、酶标抗体的最佳稀释度分别为1∶800和1∶10000,单抗的相对亲和力分别为:4A9约在5.242μg/ml(1∶600),4C3约在0.763μg/ml(1∶5000),9F12约在0.127μg/ml(1∶40000),即9F12>4C3>4A9。结论:用建立的ELISA方法测定了3株O型口蹄疫病毒单克隆抗体(4A9、4C3、9F12)的相对亲和力,将为进一步研究口蹄疫病毒而选取合适的单抗提供理论依据。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 单克隆抗体 相对亲和力

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采用泊洛沙姆为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对大鼠脾细胞的增值作用 被引量：3

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作者 王霄旸 王米 +1 位作者 张可煜 薛飞群 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2015年第2期74-77,共4页

为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/... 为研究泊洛沙姆作为佐剂的O型口蹄疫多肽疫苗对小鼠脾淋巴细胞增殖的影响,采用四甲基偶氮唑盐法(MTT)检测不同浓度的泊洛沙姆407、FMDV-O型泊洛沙姆佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)、FMDV O型多肽抗原液(7.06 mg/m L,用PBS稀释至50μg/m L)及FMDV O型油乳佐剂多肽疫苗(多肽浓度50μg/m L)对伴刀豆球蛋白A(Concanavalin A,Con A)处理淋巴细胞的增殖率。结果表明,与空白对照组相比较,泊洛沙姆各浓度对脾细胞均有增殖作用,多肽疫苗在高浓度的时候对细胞有抑制作用,随着作用浓度的降低,又进而转为细胞增殖作用。 展开更多

关键词 细胞增殖 泊洛沙姆 O型口蹄疫多肽疫苗

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两种O型口蹄疫ELISA检测试剂盒的对比 被引量：6

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作者 吕晓丽 姚晓韵 +6 位作者 何奇松 冯淑萍 马军 覃雨阳 李雪梅 熊毅 颜健华 《中国动物检疫》 CAS 2016年第3期71-73,共3页

为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄... 为比较哪种ELISA试剂盒能够更准确、简便、快捷地检测出口蹄疫病毒抗体,本研究使用液相阻断酶联免疫吸附试验(LB-ELISA)试剂盒和固相竞争酶联免疫吸附试验(SPC-ELISA)试剂盒,对2014年广西各市县动物疫病预防控制中心送检的已免疫过口蹄疫疫苗的猪、牛、羊血清共计1121份进行了检测,对比两种试剂盒的特异性、敏感性、阳性检出率及符合率。检测结果表明,两种口蹄疫ELISA试剂盒的阳性检出率不同,LB-ELISA的阳性检出率比SPC-ELISA高2.4%;LB-ELISA试剂盒对血清抗体滴度水平的要求相比SPC-ELISA试剂盒要低,因此LB-ELISA试剂盒更适合于口蹄疫病毒感染的检测。 展开更多

关键词 O型口蹄疫 抗体 液相阻断酶联免疫吸附试验 固相竞争酶联免疫吸附试验 比较

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O型和Asia1型口蹄疫病毒感染RT-PCR鉴别诊断方法的建立 被引量：8

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作者 涂亚斌 周国辉 +4 位作者 张亚科 王志国 张守红 王海伟 于力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期561-564,568,共5页

根据GenBank中O型和Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的vp3、vp1和2A基因序列,并与其它血清型FMDV的对应基因序列进行比较,设计用于扩增O型和Asia1型FMDV vp1基因的特异性引物,建立O型和Asia1型FMDV RT-PCR鉴别诊... 根据GenBank中O型和Asia1型口蹄疫病毒(Foot-and-mouth disease virus,FMDV)的vp3、vp1和2A基因序列,并与其它血清型FMDV的对应基因序列进行比较,设计用于扩增O型和Asia1型FMDV vp1基因的特异性引物,建立O型和Asia1型FMDV RT-PCR鉴别诊断方法。本方法首先用通用型引物进行RT-PCR,确定是否为FMDV感染,然后用特异性引物鉴别O型或Asia1型FMDV的感染。用vp1基因序列分析进行符合性试验,验证了该方法所具有的特异性和敏感性。本方法可用于O型和Asia1型FMD的快速诊断及流行病学调查。 展开更多

关键词 O型口蹄疫病毒 ASIA1型口蹄疫病毒 RT-PCR 鉴别诊断方法

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口蹄疫病毒(FMDV)O型与Asia1型联合RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 葛淑敏 金宁一 尹革芬 《现代预防医学》 CAS 北大核心 2008年第15期2942-2944,2949,共4页

[目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法。[方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asia1型FMDV二联PCR引物。[结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了... [目的]建立针对O型与Asial型FMDV的二联RT-PCR检测方法。[方法]在大量比较国内外口蹄疫病毒(FMDV)流行毒株序列的基础上自行设计了检测O型与Asia1型FMDV二联PCR引物。[结果]本试验确定了单项RT-PCR反应条件范围,在此基础上建立、优化了二联RT-PCR反应体系和反应条件,建立了有效、特异、敏感的检测O型FMDV与Asia1型FMDV的二联RT-PCR方法。[结论]本试验为口蹄疫的诊断、防制、流行病学调查及疫苗的使用奠定了基础。 展开更多

关键词 口蹄疫病毒 O型 Asia1型 RT-PCR

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O型口蹄疫病毒VP1基因及其多表位基因的原核表达与纯化鉴定 被引量：1

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作者 何奇松 陈磊 +7 位作者 颜健华 许瑞胜 易春华 韦达有 冯淑萍 黄胜斌 梁晟 熊毅 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期472-477,共6页

【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因... 【目的】通过原核表达并纯化获得O型口蹄疫病毒(FMDV)VP1基因及其多表位基因的重组蛋白,为建立O型FMDV抗体ELISA检测试剂盒及制备动物高免血清提供技术支持。【方法】以O型FMDV VP1全基因重组质粒p MD18-T-T-VP1及串联的VP1多表位基因重组质粒p MD18-T-O-VP1为模板,通过特异性引物扩增并回收目的基因,构建重组质粒p ET-32a-VP1和p GEX-6p-1-VP1,然后转入大肠杆菌BL211(DE3)中诱导表达,并以SDS-PAGE和Western blotting对融合蛋白进行分析鉴定。【结果】O型FMDV的VP1基因及其多表位基因在大肠杆菌BL21(DE3)中得到正确表达,表达的两种融合蛋白主要以包涵体形式存在,纯度较高,且均能与猪抗O型FMDV阳性血清发生特异性结合,具有良好的反应原性。【结论】表达获得的融合蛋白具有良好的反应原性,可作为包被抗原应用于O型FMDV抗体检测试剂盒研发。 展开更多

关键词 O型FMDV VP1基因 多表位基因 原核表达 纯化 鉴定

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