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大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白融合蛋白的生物信息学分析及原核表达
1
作者 陈洪 车业贵 +6 位作者 陈长春 丁小丽 邱树磊 陆辉 王永娟 温洪伟 周子祥 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4894-4903,共10页
【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基... 【目的】构建并表达大肠杆菌FliC蛋白D0/D1结构域与Pal蛋白的融合蛋白,为开发新型禽致病性大肠杆菌(avian pathogenic Escherichia coli,APEC)疫苗提供研究基础。【方法】分析GenBank数据库中大肠杆菌O1血清型菌株的FliC及Pal蛋白氨基酸序列特征,选择FliC蛋白的D0/D1结构域(N-端5-140位氨基酸和C-端499-583位氨基酸)及Pal蛋白主要结构(21-173位氨基酸)构建“三明治型”融合蛋白。对融合蛋白进行理化性质、二级结构、三级结构、抗原性、致敏性及线性和不连续表位预测。通过分子对接和免疫模拟分别评估融合蛋白与免疫受体的结合能力及免疫效果。合成融合蛋白碱基序列并使用pET-28a(+)进行载体构建,采用大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行融合蛋白表达,利用镍-琼脂糖凝胶6FF纯化融合蛋白并进行复性,通过Western blotting验证融合蛋白的反应原性。【结果】融合蛋白分子质量为42.72 ku,是亲水蛋白;α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲分别占48.79%、14.25%、6.76%和30.19%,其中α-螺旋主要处于FliC蛋白D0/D1结构域;三级结构拉氏图显示,优势区域中含有的残基数占96.9%。该融合蛋白具有良好的抗原性,无致敏性,含有8个线性表位和5个不连续表位。该融合蛋白与Toll样受体2、4、5均能进行分子对接,且免疫模拟结果显示,该蛋白能引起良好的体液免疫和细胞免疫。经PCR鉴定和测序确定嵌合基因FliCN-Pal-FliCC阳性单克隆并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,成功表达纯化出融合蛋白FliCN-Pal-FliCC。融合蛋白能与大肠杆菌O1血清型阳性小鼠的血清发生反应。【结论】本研究成功构建并表达了以APEC O1血清型的FliC和Pal蛋白为基础的“三明治”型融合蛋白FliCN-Pal-FliCC,为研发APEC疫苗候选抗原提供研究基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 flic蛋白 结构域 Pal蛋白 融合蛋白 生物信息学分析
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肠炎沙门菌fliC基因的原核表达及其间接ELISA方法的建立 被引量：2
2
作者 赵东旭 蔡梦雷 +6 位作者 苏士炫 刘逸洋 闫雪敏 张政钢 薛晓阳 闫金坤 崔国林 《中国兽医科学》 北大核心 2025年第1期65-72,共8页
建立一种基于肠炎沙门菌鞭毛蛋白FliC的间接ELISA方法。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达肠炎沙门菌FliC截短蛋白,将其作为包被抗原建立间接ELISA方法;采用52份临床阴性鸡血清测定该方法的阴阳性阈值,采用沙门菌阳性鸡血清测定该方法的特异性... 建立一种基于肠炎沙门菌鞭毛蛋白FliC的间接ELISA方法。在大肠杆菌BL21(DE3)中表达肠炎沙门菌FliC截短蛋白,将其作为包被抗原建立间接ELISA方法;采用52份临床阴性鸡血清测定该方法的阴阳性阈值,采用沙门菌阳性鸡血清测定该方法的特异性、敏感性和重复性,采用135份临床血清样品测定该方法与BioChek公司禽沙门菌D群ELISA试剂盒检测结果的符合性和临床适用性。结果显示:截短表达的FliC蛋白在BL21(DE3)中呈可溶性表达,可与H:g抗体特异性结合,与H:i和H:m抗体不反应;基于截短表达的FliC蛋白的间接ELISA方法包被抗原最优质量浓度为4 ng/μL、待检血清最优稀释度为1∶40、HRP标记的第二抗体的最优稀释度为1∶2000;该方法的阴性阈值为0.82,阳性阈值为0.94,可检出80倍稀释的肠炎沙门菌阳性血清抗体,未检出鸡白痢沙门菌、鼠伤寒沙门菌、姆班达卡沙门菌、汤姆森沙门菌和肯塔基沙门菌阳性血清抗体,批间和批内重复检测变异系数分别为0.43%~5.13%和0.50%~2.68%,与禽沙门菌D群ELISA试剂盒的检测符合率为94.1%。本研究通过原核表达获得FliC截短蛋白,并基于该蛋白成功建立了一种检测肠炎沙门菌抗体的间接ELISA检测方法。 展开更多
关键词 肠炎沙门菌 flic 原核表达 间接ELISA
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FliC蛋白佐剂对伪狂犬病病毒Bartha-K61株弱毒疫苗的黏膜免疫作用
3
作者 梁力荣 柯海意 +8 位作者 臧莹安 翟少伦 康桦华 蒋智勇 李艳 张昆丽 周霞 勾红潮 李春玲 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第10期4864-4873,共10页
【目的】探讨FliC蛋白作为黏膜佐剂对伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Bartha-K61弱毒疫苗株的免疫增强作用,为PRV黏膜疫苗的研发奠定基础。【方法】将鼠伤寒沙门菌FliC基因克隆连接至原核表达载体pET-28a(+),连接产物转化大肠杆菌... 【目的】探讨FliC蛋白作为黏膜佐剂对伪狂犬病病毒(Pseudorabies virus,PRV)Bartha-K61弱毒疫苗株的免疫增强作用,为PRV黏膜疫苗的研发奠定基础。【方法】将鼠伤寒沙门菌FliC基因克隆连接至原核表达载体pET-28a(+),连接产物转化大肠杆菌Trans10感受态细胞,提取质粒后进行双酶切鉴定并测序;将FliC-pET-28a转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,诱导表达FliC蛋白,通过考马斯亮蓝染色和Western blotting对纯化后的FliC蛋白进行鉴定。设置Bartha-K61病毒液组和商品化Bartha-K61疫苗组作为对照,将FliC蛋白作为黏膜佐剂与Bartha-K61病毒液混合,滴鼻2次免疫BALB/c小鼠,测定免疫前(0 d)、免疫后7、14、21、28和35 d小鼠血清IgG和IgA水平,免疫后第35天对各组小鼠分别滴鼻PRV GD-WH病毒液10^(4.5) TCID_(50),攻毒后每日观察并记录小鼠生存状况。【结果】成功获得重组质粒FliC-pET-28a,实现了FliC蛋白的可溶性表达,纯化后的FliC蛋白大小约为58 ku。小鼠免疫试验结果显示,二免后Bartha-K61病毒液+FliC蛋白组血清IgG和IgA抗体均显著高于Bartha-K61病毒液组和商品化Bartha-K61疫苗组(P<0.05)。攻毒保护试验结果显示,Bartha-K61病毒液+FliC蛋白免疫能给小鼠提供100%的保护力,抵抗PRV GD-WH的致死性攻击,具有高于Bartha-K61病毒液单独免疫的保护力。【结论】FliC蛋白佐剂对PRV Bartha-K61弱毒疫苗株具有黏膜免疫增强作用,并使小鼠获得一定的免疫保护效力。 展开更多
关键词 flic蛋白 伪狂犬病病毒弱毒疫苗 黏膜免疫
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motB和fliC基因在大肠杆菌运动中的作用
4
作者 黄承允 刘健 王芳彬 《合肥工业大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第7期938-944,950,共8页
周身含有鞭毛的细菌可通过鞭毛马达带动鞭毛转动,为自身运动提供动力。文章以大肠杆菌为模式生物,通过CRISPR-Cas9基因编辑技术对大肠杆菌基因组进行改造,分别构建motB和fliC基因缺失的大肠杆菌菌株;利用明场显微技术研究单个鞭毛马达... 周身含有鞭毛的细菌可通过鞭毛马达带动鞭毛转动,为自身运动提供动力。文章以大肠杆菌为模式生物,通过CRISPR-Cas9基因编辑技术对大肠杆菌基因组进行改造,分别构建motB和fliC基因缺失的大肠杆菌菌株;利用明场显微技术研究单个鞭毛马达的转动,利用暗场显微技术研究单个细菌的游动,利用软琼脂平板研究细菌的群体游动。结果表明:motB和fliC基因缺失的大肠杆菌失去了马达转动和细胞运动的能力;通过质粒pJY7和pKAF131分别回补motB和fliC基因,恢复了大肠杆菌的运动能力,进一步明确了motB和fliC基因在大肠杆菌运动中的作用。 展开更多
关键词 大肠杆菌 鞭毛 鞭毛马达 motB基因 flic基因 CRISPR-Cas9基因编辑技术
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基于生物信息学方法设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗
5
作者 刘意 张喜悦 +7 位作者 李昕 向祝 郎雨辰 宋时萍 赵格 曲志娜 刘立恒 王君玮 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2024年第18期104-109,116,135,136,共9页
为了设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,试验在NCBI网站的Protein数据库中获取OmpC和FliC蛋白的氨基酸序列,采用Expasy服务器分析其理化性质,通过在线工具AllerTopV.2.0和Vexijen分析其抗原性和致敏性,应用NPS~@服务器分析二级结构... 为了设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,试验在NCBI网站的Protein数据库中获取OmpC和FliC蛋白的氨基酸序列,采用Expasy服务器分析其理化性质,通过在线工具AllerTopV.2.0和Vexijen分析其抗原性和致敏性,应用NPS~@服务器分析二级结构,应用IEDB在线工具分析OmpC和FliC的B、T细胞表位。选取优势表位设计鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗,对其理化性质、抗原性、致敏性及三级结构进行预测。结果表明:OmpC和FliC均是亲水性蛋白,无致敏性,抗原性较高;OmpC和FliC蛋白均筛选出3个B细胞优势表位,2个细胞毒性T细胞(CTL细胞)优势表位,1个辅助T细胞(Th细胞)优势表位。设计的多表位疫苗为亲水性的稳定蛋白,抗原性预测的分数为1.1422分,且为非致敏原,预测三级结构模型的可信度大。说明鼠伤寒沙门氏菌OmpC-FliC多表位疫苗对动物无致敏性,且具有良好的抗原性。 展开更多
关键词 沙门氏菌 生物信息学 OMPC flic 表位 疫苗
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大肠杆菌O_(157):H_7 rfbE基因和fliC基因的克隆与序列分析 被引量：3
6
作者 朱文冠 杨德胜 郭霄峰 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2005年第9期22-24,共3页
根据已发表的E.coliO_(157):H_7EDL933株的rfbE基因和fliC基因,设计了两对引物,分别对两个O_(157):H_7菌株的rfbE基因和一个菌株的fliC基因进行PCR,并将PCR产物克隆于pMD18-T载体质粒。测序结果表明,获得到了与理论相符的582bprfbE基因... 根据已发表的E.coliO_(157):H_7EDL933株的rfbE基因和fliC基因,设计了两对引物,分别对两个O_(157):H_7菌株的rfbE基因和一个菌株的fliC基因进行PCR,并将PCR产物克隆于pMD18-T载体质粒。测序结果表明,获得到了与理论相符的582bprfbE基因片段和802bpfliC基因片段。一株菌的rfbE基因存在无意义突变(两个)。而另一株菌fliC基因有一个有意义突变(aac→gac) 展开更多
关键词 E.COLI O157:H7 rtbE基因 flic基因 克隆 大肠杆菌O157:H7 flic E基因 序列分析 O157:H7
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FLIC、SF-36和QOL-LC量表在肝癌患者生活质量测定中的应用比较 被引量：80
7
作者 祝葆华 万崇华 +3 位作者 王坤 苑进凯 许传志 孟琼 《中国循证医学杂志》 CSCD 2012年第10期1175-1179,共5页
目的比较癌症患者生活功能指标量表(FLIC)、健康调查简表(SF-36)和肝癌患者生活质量测定量表(QOL-LC)在肝癌患者生活质量测定中的应用效果。方法以2010～2011年选定的调查医院肝癌住院患者105例为研究对象,采用FLIC、SF-36和QOL-LC量表... 目的比较癌症患者生活功能指标量表(FLIC)、健康调查简表(SF-36)和肝癌患者生活质量测定量表(QOL-LC)在肝癌患者生活质量测定中的应用效果。方法以2010～2011年选定的调查医院肝癌住院患者105例为研究对象,采用FLIC、SF-36和QOL-LC量表分别进行3次纵向测定,计算和比较各量表的信度、效度和反应度。结果 QOL-LC的效度、信度比FLIC和SF-36量表好;在反应度方面,QOL-LC及FLIC量表均显示躯体功能与总生命质量的变化差异有统计学意义(QOL-LC:t=5.08;P=0.000;t=3.16;P=0.002;FLIC:t=4.02;P=0.000;t=2.21;P=0.030)。SF-36量表除一般健康状况和心理健康两个领域外,其余领域的治疗前后得分变化均有统计学意义(躯体功能t=5.94;P=0.000;躯体角色t=3.07;P=0.003;身体疼痛t=3.21;P=0.002;生命力t=3.22;P=0.002;社会角色t=2.60;P=0.012;情绪角色t=3.28;P=0.002)。结论 QOL-LC是测定肝癌患者生活质量的特异量表,在评估肝癌患者生活质量时是首选,而SF-36和FLIC量表能反映肝癌患者生命质量的共性部分,在缺少特异性量表的情况下,可用于测评肝癌患者的生活质量。 展开更多
关键词 肝癌 生活质量评估 SF-36量表 QOL—LC量表 flic量表
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鞭毛素fliC基因的缺失对肠炎沙门氏菌生物膜形成的影响 被引量：6
8
作者 朱春红 董立伟 +4 位作者 张江英 谢静 李芙蓉 陆广富 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期303-306,共4页
为研究肠炎沙门氏菌鞭毛素对其生物膜形成的影响,本研究利用构建的肠炎沙门氏菌鞭毛素编码基因fliC缺失株,检测其缺失性修饰后的生长表型变化及其对生物膜形成的影响。结果显示在表型检测试验中,fliC缺失株在电镜下观察呈无鞭毛形态,在... 为研究肠炎沙门氏菌鞭毛素对其生物膜形成的影响,本研究利用构建的肠炎沙门氏菌鞭毛素编码基因fliC缺失株,检测其缺失性修饰后的生长表型变化及其对生物膜形成的影响。结果显示在表型检测试验中,fliC缺失株在电镜下观察呈无鞭毛形态,在半固体培养基上缺乏运动性,并且不能与肠炎沙门氏菌鞭毛单克隆抗体发生可见的凝集反应。生物膜形成能力定性试验结果表明,肠炎沙门氏菌fliC缺失株生物膜形成大量减少,并且生物膜脆弱,而其回补株能够较好地恢复生物膜的形成;生物膜定量结果进一步证明,鞭毛素fliC基因缺失后肠炎沙门氏菌形成生物膜的能力下降50%左右,以上结果显示鞭毛在肠炎沙门氏菌体外生物膜形成中具有重要作用。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 鞭毛素 flic基因 生物膜
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鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的表达纯化及其生物学特性的研究 被引量：7
9
作者 田文静 廖成水 +7 位作者 王晓利 郁川 余祖华 张梦珂 李婧 张春杰 李银聚 程相朝 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期810-816,共7页
为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的生物学特性,利用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC基因,构建重组表达质粒p ET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重组蛋白与巨噬细... 为研究鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC的生物学特性,利用PCR方法扩增鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC基因,构建重组表达质粒p ET-32a-FliC,经大肠杆菌Rosetta(DE3)表达、镍离子亲和层析法纯化后用SDS-PAGE和Western-blot方法分析。重组蛋白与巨噬细胞RAW264.7共孵育,ELISA和CCK-8法分别检测巨噬细胞细胞因子和巨噬细胞增殖情况。重组蛋白免疫小鼠后不同时间点检测血清抗体效价和细胞因子水平。结果显示,鼠伤寒沙门菌鞭毛蛋白FliC在大肠杆菌中呈可溶性表达,且可获得纯度较高的重组鞭毛蛋白。50 ng/m L和500 ng/m L重组鞭毛蛋白可刺激巨噬细胞增殖,同时促进巨噬细胞分泌IL-1、IL-4、IL-6、IL-8、IFN-γ和TNF-α。重组蛋白免疫小鼠后效价在第3周达到1∶128 000,同时小鼠血清细胞因子的分泌量呈倒V型变化。研究结果为后续进一步研究FliC蛋白在细菌感染、侵袭和免疫方面的作用研究提供了参考数据。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门菌 鞭毛蛋白 flic 巨噬细胞
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肠出血性大肠杆菌O157：H7 rfbE与fliC基因的表达及鉴定 被引量：7
10
作者 潘群兴 王永山 +3 位作者 刘洁 夏兴霞 何孔旺 张雪寒 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2009年第3期568-571,共4页
利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在E.coliBL21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在E.coliBL21(D... 利用PCR技术将肠出血性大肠杆菌O157∶H7的rfbE与fliC基因片段分别克隆到pET原核表达系统,在E.coliBL21(DE3)中表达。结果显示rfbE、fliC以包涵体形式表达,表达产量高达总菌体蛋白的40%左右,经His-Bind镍柱纯化目的蛋白,在E.coliBL21(DE3)中表达的rfbE、fliC具有良好的免疫活性。 展开更多
关键词 肠出血性大肠杆菌 rfbE flic 免疫活性
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鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白FliC的原核表达、纯化及其多克隆抗体的制备 被引量：10
11
作者 陈明 徐幸莲 +3 位作者 周光宏 汤晓艳 袁飞 陈爱亮 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第9期180-184,共5页
利用PCR扩增出鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fliC,连接到原核表达载体pET28a(+)上,测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建了原核表达系统。经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导及Ni-NTA纯化后,得到了带6×... 利用PCR扩增出鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白基因fliC,连接到原核表达载体pET28a(+)上,测序鉴定后转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS感受态细胞中,构建了原核表达系统。经1mmol/L异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导及Ni-NTA纯化后,得到了带6×His纯化标签的分子质量大小约为54.6kD的表达产物,和预测蛋白大小一致,且大部分表达产物以可溶形式存在利用Western-blotting进一步鉴定,结果表明,该蛋白能与抗His标签的单抗发生特异性反应。用纯化的融合蛋白免疫BALB/c小鼠,获得多克隆抗体,并对抗血清的效价和特异性进行检测,结果表明,多抗的效价较高,特异性较好。 展开更多
关键词 鼠伤寒沙门氏菌 鞭毛蛋白flic 原核表达 纯化 鉴定 多克隆抗体
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FLIC量表用于肝癌患者生命质量测定的对比研究 被引量：16
12
作者 万崇华 方积乾 +3 位作者 张灿珍 汤学良 罗艳敏 林颖 《中国行为医学科学》 CSCD 2000年第5期321-322,共2页
目的　探讨 FL IC量表用于测定肝癌患者生命质量的效果。方法　用 FL IC和 QOL - L C两个量表同时测定 10 5例肝癌患者并对比分析其信度、效度和反应度。结果　 QOL- L C的效度、信度和反应度均较好 ;FL IC的效度、信度尚可 ,反应度较... 目的　探讨 FL IC量表用于测定肝癌患者生命质量的效果。方法　用 FL IC和 QOL - L C两个量表同时测定 10 5例肝癌患者并对比分析其信度、效度和反应度。结果　 QOL- L C的效度、信度和反应度均较好 ;FL IC的效度、信度尚可 ,反应度较好。结论　 FL IC量表能反映肝癌患者生命质量的共性部分 ,而且反应度较好 ,在没有特异性量表的情况下 。 展开更多
关键词 生命质量 肝癌 flic量表
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迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC原核表达及免疫试验 被引量：6
13
作者 张志强 杨楠 +7 位作者 李永慧 王洪彬 吴同垒 康元环 莘余 史秋梅 高桂生 王春凤 《动物医学进展》 北大核心 2018年第7期23-27,共5页
为了解迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC的免疫特性,从迟缓爱德华菌基因组中克隆出鞭毛基因fliC,并将其构建到原核表达载体上,用原核表达的方法获得大量重组蛋白,将蛋白纯化后,通过动物模型确定该蛋白的免疫特性。结果表明,迟缓爱德华菌鞭毛蛋... 为了解迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC的免疫特性,从迟缓爱德华菌基因组中克隆出鞭毛基因fliC,并将其构建到原核表达载体上,用原核表达的方法获得大量重组蛋白,将蛋白纯化后,通过动物模型确定该蛋白的免疫特性。结果表明,迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC具有较强的免疫原性,对免疫动物应对强毒株感染具有一定保护效果。将FliC与牛血清白蛋白(BSA)混合免疫小鼠能够刺激机体产生较高水平抗BSA抗体,说明其佐剂特性。研究表明,迟缓爱德华菌鞭毛蛋白FliC具有优良的免疫原性和佐剂特性,是迟缓爱德华菌的保护性抗原,具有潜在的应用价值。 展开更多
关键词 迟缓爱德华菌 鞭毛蛋白 flic 佐剂 免疫保护力
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马流产沙门菌鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌SeM蛋白免疫效应分析 被引量：3
14
作者 赵亚南 杨康 +2 位作者 张宝江 李斌 苏艳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期1020-1026,共7页
为研究马流产沙门菌(Salmonella abortus equi)鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)SeM蛋白免疫效果的增强效应,为马腺疫新型高效疫苗的研发奠定基础。本研究构建并诱导表达了FliC,经亲和层析纯化目的蛋白,Weste... 为研究马流产沙门菌(Salmonella abortus equi)鞭毛蛋白FliC对马腺疫链球菌(Streptococcus equi subsp.equi)SeM蛋白免疫效果的增强效应,为马腺疫新型高效疫苗的研发奠定基础。本研究构建并诱导表达了FliC,经亲和层析纯化目的蛋白,Western blot检测其免疫原性。将该纯化后FliC与SeM蛋白联合免疫C57BL/6小鼠,免疫后对小鼠进行抗体水平、抗体类型和攻毒保护力的检测。结果表明,成功表达、纯化了FliC重组蛋白,SDSPAGE电泳检测显示该蛋白质为52ku。抗体分型检测结果显示产生的抗体主要以IgG1为主;免疫30d后FliC+SeM免疫组的攻毒保护率为87%,高于SeM免疫组的保护率67%。马流产沙门菌来源的鞭毛蛋白FliC能够增强SeM蛋白的免疫保护效果,该结果为进一步更好地利用SeM蛋白奠定了基础。 展开更多
关键词 马流产沙门菌 flic 马腺疫链球菌 SEM 免疫效应 免疫保护力
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肠炎沙门氏菌hfq缺失株的构建和对fliC基因的调控分析 被引量：2
15
作者 孟霞 孟宪臣 +4 位作者 朱春红 王亨 王金秋 聂佳佳 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期720-724,共5页
Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株... Hfq是一种介导细菌非编码小RNA(sRNA)与其靶标mRNA结合的伴侣蛋白,可协助多种sRNA在转录后水平调控基因表达。本研究通过λ噬菌体的Red同源重组系统构建了肠炎沙门氏菌hfq缺失突变株SE50336△hfq。利用荧光定量PCR技术分析了hfq突变株中鞭毛主要结构蛋白fliC的表达情况。结果表明与野生株相比,hfq突变株fliC的表达量明显下降,只有野生株的3.7%。细菌运动性试验表明突变株在半固体培养基上的运动能力减弱。以上结果表明Hfq蛋白可调节鞭毛结构蛋白FliC的表达,造成FliC蛋白表达量明显下降,鞭毛的合成受到抑制,从而导致肠炎沙门氏菌的运动能力减弱。 展开更多
关键词 肠炎沙门氏菌 HFQ flic 运动性
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马流产沙门氏菌新疆分离株FliC基因的克隆及分子特征分析 被引量：4
16
作者 李阳 杨康 +1 位作者 张宝江 苏艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第11期20-24,共5页
为了解马流产沙门氏菌新疆分离株的分子特征及其鞭毛蛋白FliC基因的结构与功能,本试验运用PCR技术扩增了分离鉴定的2株马流产沙门氏菌新疆株FliC基因,克隆测序并对其进行了生物信息学分析。分析结果显示,成功获得了626bp的FliC基因（Gen... 为了解马流产沙门氏菌新疆分离株的分子特征及其鞭毛蛋白FliC基因的结构与功能,本试验运用PCR技术扩增了分离鉴定的2株马流产沙门氏菌新疆株FliC基因,克隆测序并对其进行了生物信息学分析。分析结果显示,成功获得了626bp的FliC基因（GenBank登录号：KJ486797、KJ486798）。对分离的2株马流产沙门氏菌FliC基因的核苷酸序列同源性分析结果显示,FliC基因新疆分离株与GenBank登录的其他沙门氏菌分离株的核苷酸序列同源性为49.6%～100.0%。该结果表明马流产沙门氏菌的FliC基因在该菌进化和流行的过程中是保守的,本研究将为分析该病的分子流行和进一步利用FliC基因防制该菌引起的感染提供试验基础。 展开更多
关键词 马流产沙门氏菌 flic基因 克隆 分子特征分析
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利用改进FLIC算法进行重力矢量场可视化 被引量：2
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作者 李振海 罗志才 +1 位作者 汪海洪 李琼 《武汉大学学报（信息科学版）》 EI CSCD 北大核心 2011年第3期276-279,379,共4页
针对固定滤波长度公式得到的LIC图像显示效果不理想的缺点,利用纹理流线上所有点亮度值的统计方差来衡量可视化精度,提出了一种滤波长度随矢量变化的改进FLIC算法。用颜色信息表示重力异常大小或者真实垂线偏差大小,纹理方向表示重力方... 针对固定滤波长度公式得到的LIC图像显示效果不理想的缺点,利用纹理流线上所有点亮度值的统计方差来衡量可视化精度,提出了一种滤波长度随矢量变化的改进FLIC算法。用颜色信息表示重力异常大小或者真实垂线偏差大小,纹理方向表示重力方向,基于改进FLIC算法实现了重力矢量场的可视化,结果表明,重力矢量场的可视化具有表达多维信息和矢量方向细节、图形直观易读等优势。 展开更多
关键词 改进flic算法 重力矢量场 可视化 滤波长度
原文传递
福建省O157大肠杆菌的rfb及fliC基因的研究 被引量：2
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作者 林杰 郭维植 +2 位作者 徐海滨 谢一俊 陈亢川 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2004年第3期244-246,共3页
目的　对福建省分离的O15 7大肠杆菌的O抗原编码基因 (rfb基因 )及H抗原编码基因 (fliC基因 )进行研究分析 ,以明了福建省O15 7大肠杆菌的抗原特征。方法　应用聚合酶链反应 (PCR) ,以O15 7抗原编码基因 (rfbO157基因 )、H7抗原编码基因... 目的　对福建省分离的O15 7大肠杆菌的O抗原编码基因 (rfb基因 )及H抗原编码基因 (fliC基因 )进行研究分析 ,以明了福建省O15 7大肠杆菌的抗原特征。方法　应用聚合酶链反应 (PCR) ,以O15 7抗原编码基因 (rfbO157基因 )、H7抗原编码基因 (fliCH7基因 )为靶基因进行检测。将rfbO157基因PCR扩增产物进行DNA测序 ,使用NCBIgenBank进行DNA序列相似性比较。结果　rfbO157基因PCR扩增产物经DNA测序 ,片段序列与O15 7∶H7大肠杆菌国际参考株EDL933完全一致。福建省分离的 80株O15 7大肠杆菌的rfbO157基因均为阳性。fliCH7基因仅 6 2 5 % (5 / 80 )阳性。结论　福建省分离的O15 7大肠杆菌少部分 (6 2 5 % )为O15 7∶H7,并携带毒力基因 ;大部分为O15 7非H7,且未检测到毒力基因。 展开更多
关键词 福建 O157 大肠杆菌 rfb flic基因 聚合酶链反应
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GM-CSF和FliC作为新型复合生物佐剂对猪圆环病毒疫苗的免疫增强效果 被引量：3
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作者 任桂萍 张腾 +1 位作者 吴超 李德山 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第10期70-78,共9页
研究成功制备猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC),与猪圆环病毒疫苗共同作用形成高效佐剂效应,为进一步应用复合生物佐剂奠定基础。GM-CSF在37℃下经终浓度0.25 mmol·L-1IPTG诱导4 h大瓶培养,... 研究成功制备猪粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白(FliC),与猪圆环病毒疫苗共同作用形成高效佐剂效应,为进一步应用复合生物佐剂奠定基础。GM-CSF在37℃下经终浓度0.25 mmol·L-1IPTG诱导4 h大瓶培养,以包涵体形式表达,变性、复性后,经Ni-NTA柱亲和层析,最终得到GM-CSF蛋白,大小约13 ku。FliC在25℃下经终浓度0.25 mmol·L-1IPTG诱导6 h发酵培养,以可溶形式表达,经纯化、蛋白酶酶切后,最终得到约46 ku FliC蛋白。将制备蛋白与猪圆环病毒疫苗共同注射小鼠,经ELISA检测发现GM-CSF、FliC均可单独作为生物佐剂有效提高抗体效价,促进免疫。与单独佐剂组相比,复合佐剂组起效更迅速,作用时间更持久,作为一种新型复合生物佐剂应用前景良好。 展开更多
关键词 复合生物佐剂 GM-CSF flic 猪圆环病毒疫苗
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