目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)...目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细胞;以计数法测定细胞粘附率,以损伤实验测定细胞迁移速度,以Western blot检测FIP200和FAK蛋白表达水平;以免疫共沉淀检测FIP200和FAK结合情况和FAK磷酸化程度。结果与40 mg/L FN组相比,经脂质体转染了FIP200反义寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高,FIP200表达水平显著降低,FAK表达水平无明显变化,与FIP200结合的FAK显著降低,FAK酪氨酸磷酸化程度明显增高。结论内源性FIP200和FAK的结合抑制FAK的活化,从而抑制呼吸道上皮细胞的粘附和迁移,内源性FIP200作为FAK的抑制剂而存在;FN能够促使FAK和FIP200结合的解离而活化FAK,从而促进细胞粘附和迁移。展开更多
目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:利用MTT法研究CSE对气道上皮细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析气道上皮细胞细胞周期的影响,以RT-PCR和W estern b lot检测气道上皮细胞FIP200 mRN...目的:研究香烟烟雾提取物(CSE)对气道上皮细胞增殖和细胞周期的影响及其作用机制.方法:利用MTT法研究CSE对气道上皮细胞增殖的影响,采用流式细胞术分析气道上皮细胞细胞周期的影响,以RT-PCR和W estern b lot检测气道上皮细胞FIP200 mRNA和蛋白表达,以免疫共沉淀检测FIP200与局灶粘着斑激酶(FAK)连接状况.结果:CSE干预的气道上皮细胞MTT吸光度比对照组明显降低,G1期细胞增多,S和G2期细胞明显减少(P<0.01),FIP200 mRNA,FIP200的表达水平以及FIP200与FAK的连接均显著增高(P<0.01),且随CSE干预时间和CSE浓度而增大;气道上皮细胞FIP200表达水平和FIP200与FAK连接的增高均与G1期细胞增多呈正相关(P<0.01),与S和G2期细胞减少呈负相关(P<0.01).结论:CSE显著抑制气道上皮细胞的增殖,FIP200的高表达可能是其作用机制之一.展开更多
Autophagy plays a pivotal role in diverse biological processes,including the maintenance and differentiation of neural stem cells(NSCs).Interestingly,while complete deletion of Fip200 severely impairs NSC maintenance ...Autophagy plays a pivotal role in diverse biological processes,including the maintenance and differentiation of neural stem cells(NSCs).Interestingly,while complete deletion of Fip200 severely impairs NSC maintenance and differentiation,inhibiting canonical autophagy via deletion of core genes,such as Atg5,Atg16l1,and Atg7,or blockade of canonical interactions between FIP200 and ATG13(designated as FIP200-4A mutant or FIP200 KI)does not produce comparable detrimental effects.This highlights the likely critical involvement of the non-canonical functions of FIP200,the mechanisms of which have remained elusive.Here,utilizing genetic mouse models,we demonstrated that FIP200 mediates non-canonical autophagic degradation of p62/sequestome1,primarily via TAX1BP1 in NSCs.Conditional deletion of Tax1bp1 in fip200hGFAP conditional knock-in(cKI)mice led to NSC deficiency,resembling the fip200hGFAP conditional knockout(cKO)mouse phenotype.Notably,reintroducing wild-type TAX1BP1 not only restored the maintenance of NSCs derived from tax1bp1-knockout fip200hGFAP cKI mice but also led to a marked reduction in p62 aggregate accumulation.Conversely,a TAX1BP1 mutant incapable of binding to FIP200 or NBR1/p62 failed to achieve this restoration.Furthermore,conditional deletion of Tax1bp1 in fip200hGFAP cKO mice exacerbated NSC deficiency and p62 aggregate accumulation compared to fip200hGFAP cKO mice.Collectively,these findings illustrate the essential role of the FIP200-TAX1BP1 axis in mediating the non-canonical autophagic degradation of p62 aggregates towards NSC maintenance and function,presenting novel therapeutic targets for neurodegenerative diseases.展开更多
目的通过免疫组化法检测舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)患者癌组织及癌旁组织中的200 kDA的家族相互作用蛋白(family interacting protein of 200 kDA,FIP200)、自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)的表...目的通过免疫组化法检测舌鳞状细胞癌(tongue squamous cell carcinoma, TSCC)患者癌组织及癌旁组织中的200 kDA的家族相互作用蛋白(family interacting protein of 200 kDA,FIP200)、自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)的表达,并分析FIP200、ATG7在不同分组的TSCC中的表达情况,为TSCC的靶向治疗提供前期实验依据。方法选取2012年~2019年就诊的36例TSCC手术患者的石蜡标本用于FIP200免疫组化染色;34例TSCC手术患者的石蜡标本用于ATG7免疫组化染色。以癌组织作为实验组,同一切片的癌旁组织作为对照组,随机选取镜下视野求出面密度值作为FIP200、ATG7的表达情况。收集对应患者的临床资料并分析FIP200、ATG7表达与患者临床病理特征的关系。使用STRING网站构建蛋白质-蛋白质相互作用网络,分别分析与ATG7、FIP200相互作用最为密切的10个蛋白,使用生物信息学分析软件FunRich对2个基因集分别进行生物信息学富集分析。结果 ATG7及FIP200在TSCC组织中的表达高于癌旁组织(P<0.05);ATG7在不同分化等级的癌组织中的表达水平不同,分化等级越高,ATG7的表达水平越低(P<0.05);与ATG7相互作用的10个蛋白分别是GABARAPL2、MAP1LC3B、BECN1、ATG10、GABARAP、ATG12、GABARAPL1、ATG3、MAP1LC3A和ATG5,ATG7作为RIG-I/MDA5信号通路的负调节因子发挥作用(P<0.05);与FIP200相互作用的10个蛋白分别是BECN1、ULK2、ULK1、PIK3C3、ATG101、ATG13、ATG16L1、ATG14、PIK3R4和ATG5,FIP200主要参与细胞中ULK1-ATG13-FIP200复合体以及自噬小体的组成(P<0.001)。结论 ATG7及FIP200在TSCC组织中的表达高于癌旁正常组织;ATG7表达与TSCC的恶性程度有关;ATG7作为RIG-I/MDA5信号通路的负调节因子在生物学过程中发挥作用;FIP200参与ULK1-ATG13-FIP200复合体以及自噬小体的组成,对细胞自噬产生影响。展开更多
自噬(autophagy)是一种细胞分解代谢过程,可以通过溶酶体降解系统维持细胞内稳态。自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)、200 kDa的家族相互作用蛋白(family interacting protein of 200 kDa,FIP200)与自噬关系密切,并具有调...自噬(autophagy)是一种细胞分解代谢过程,可以通过溶酶体降解系统维持细胞内稳态。自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)、200 kDa的家族相互作用蛋白(family interacting protein of 200 kDa,FIP200)与自噬关系密切,并具有调控自噬功能,可以控制肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭。自噬与口腔癌的发生发展密切相关,ATG7、FIP200在口腔癌中的作用及可能的机制的详细研究有望为口腔癌预后和靶向治疗提供新的方向。该文就自噬相关基因ATG7、FIP200在口腔癌中的研究进展进行综述。展开更多
目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of200kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞增殖和细胞周期演进的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(FN)诱导培养呼吸道上皮细胞增殖,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细...目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of200kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞增殖和细胞周期演进的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(FN)诱导培养呼吸道上皮细胞增殖,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细胞;利用四唑盐(MTT)比色实验研究呼吸道上皮细胞增殖情况;采用流式细胞术分析呼吸道上皮细胞细胞周期各期分布情况;以Western blot检测FIP200和FAK蛋白表达水平;以免疫共沉淀检测FIP200和FAK结合情况和FAK磷酸化程度。结果FN诱导的呼吸道上皮细胞MTT吸光度明显增强,G1期细胞数量明显减少,S期和G2期细胞数量明显增多,同时FAK表达水平及其酪氨酸磷酸化程度显著增高,FIP200表达有降低趋势,FAK与FIP200的结合程度显著减低;与40mg/L FN组相比,经脂质体转染了反义FIP200寡核苷酸的气道上皮细胞MTT吸光度值显著增高,G1期细胞数明显减少,S期和G2期细胞数显著增多,FIP200表达水平显著降低,FAK表达水平无明显变化,与FIP200结合的FAK显著降低,FAK酪氨酸磷酸化程度明显增高。结论内源性FIP200和FAK的结合抑制FAK的活化,从而抑制呼吸道上皮细胞增殖和细胞周期演进,内源性FIP200作为FAK的抑制剂而存在;FN能够促使FAK和FIP200结合的解离而活化FAK,从而促进细胞增殖。展开更多
文摘目的研究FIP200(FAK-family interacting protein of 200 kDa)对细胞外基质成份诱导的呼吸道上皮细胞粘附和迁移的影响及其作用机制。方法通过纤连接蛋白(finbronectin,FN)诱导培养呼吸道上皮细胞的粘附迁移,以FIP200反义寡核苷酸(ODN)经脂质体转染细胞;以计数法测定细胞粘附率,以损伤实验测定细胞迁移速度,以Western blot检测FIP200和FAK蛋白表达水平;以免疫共沉淀检测FIP200和FAK结合情况和FAK磷酸化程度。结果与40 mg/L FN组相比,经脂质体转染了FIP200反义寡核苷酸的气道上皮细胞粘附率和迁移速度明显增高,FIP200表达水平显著降低,FAK表达水平无明显变化,与FIP200结合的FAK显著降低,FAK酪氨酸磷酸化程度明显增高。结论内源性FIP200和FAK的结合抑制FAK的活化,从而抑制呼吸道上皮细胞的粘附和迁移,内源性FIP200作为FAK的抑制剂而存在;FN能够促使FAK和FIP200结合的解离而活化FAK,从而促进细胞粘附和迁移。
基金National Natural Science Foundation of China(U2004138,81773132,81820108021)University Excellent Teaching Team of“Qinglan Project”in Jiangsu Province(2022-25)+1 种基金Henan Province Key Research and Development Project(232102521028)Excellent Youth Foundation of Henan Scientific Committee(21230040016)。
文摘Autophagy plays a pivotal role in diverse biological processes,including the maintenance and differentiation of neural stem cells(NSCs).Interestingly,while complete deletion of Fip200 severely impairs NSC maintenance and differentiation,inhibiting canonical autophagy via deletion of core genes,such as Atg5,Atg16l1,and Atg7,or blockade of canonical interactions between FIP200 and ATG13(designated as FIP200-4A mutant or FIP200 KI)does not produce comparable detrimental effects.This highlights the likely critical involvement of the non-canonical functions of FIP200,the mechanisms of which have remained elusive.Here,utilizing genetic mouse models,we demonstrated that FIP200 mediates non-canonical autophagic degradation of p62/sequestome1,primarily via TAX1BP1 in NSCs.Conditional deletion of Tax1bp1 in fip200hGFAP conditional knock-in(cKI)mice led to NSC deficiency,resembling the fip200hGFAP conditional knockout(cKO)mouse phenotype.Notably,reintroducing wild-type TAX1BP1 not only restored the maintenance of NSCs derived from tax1bp1-knockout fip200hGFAP cKI mice but also led to a marked reduction in p62 aggregate accumulation.Conversely,a TAX1BP1 mutant incapable of binding to FIP200 or NBR1/p62 failed to achieve this restoration.Furthermore,conditional deletion of Tax1bp1 in fip200hGFAP cKO mice exacerbated NSC deficiency and p62 aggregate accumulation compared to fip200hGFAP cKO mice.Collectively,these findings illustrate the essential role of the FIP200-TAX1BP1 axis in mediating the non-canonical autophagic degradation of p62 aggregates towards NSC maintenance and function,presenting novel therapeutic targets for neurodegenerative diseases.
文摘自噬(autophagy)是一种细胞分解代谢过程,可以通过溶酶体降解系统维持细胞内稳态。自噬相关基因7(autophagy related gene 7,ATG7)、200 kDa的家族相互作用蛋白(family interacting protein of 200 kDa,FIP200)与自噬关系密切,并具有调控自噬功能,可以控制肿瘤细胞的增殖、凋亡、迁移、侵袭。自噬与口腔癌的发生发展密切相关,ATG7、FIP200在口腔癌中的作用及可能的机制的详细研究有望为口腔癌预后和靶向治疗提供新的方向。该文就自噬相关基因ATG7、FIP200在口腔癌中的研究进展进行综述。
