FHV-1和FCV双重TaqMan实时荧光定量PCR方法的建立和应用 被引量：1

1

作者 静争 金红岩 +4 位作者 王春艳 王文杰 沈佳宇 范志坚 侯绍华 《中国兽医杂志》 北大核心 2025年第5期58-64,共7页

为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV),本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC)基因(Gen Bank登录号:OR504662)和FCV的衣壳蛋白1(VP1)基因(Gen Bank登录号:OP904215)以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针,构... 为了快速、便捷、准确诊断猫疱疹病毒1型(FHV-1)和猫杯状病毒(FCV),本试验选取FHV-1的糖蛋白C(GC)基因(Gen Bank登录号:OR504662)和FCV的衣壳蛋白1(VP1)基因(Gen Bank登录号:OP904215)以及一段猫外源性内标序列设计并合成引物和探针,构建重组阳性质粒标准品p MD19-T-G、p MD19-T-P和p MD19-T-C,建立了双重Taq Man实时荧光定量PCR方法。以重组阳性质粒标准品绘制标准曲线,验证该方法的特异性、灵敏性和重复性,利用建立的方法检测33份临床样本评估该方法的可行性,并对泰州市292份流浪猫眼口鼻分泌物样本进行检测。结果显示,本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR方法具有良好的线性关系,对其他病原无交叉反应,对FHV-1和FCV的最低检测限均为1×10^(1)copies/μL,组内和组间的变异系数均小于2%;对33份临床样本的检测结果显示,FHV-1和FCV的阳性符合率为100%,FHV-1总符合率为93.9%,FCV总符合率为90.9%;292份流浪猫眼口鼻分泌物样本中,FHV-1阳性率为20.9%,FCV阳性率为46.2%,FHV-1和FCV混合阳性率为12.0%。结果表明,本试验建立的双重Taq Man实时荧光定量PCR,特异性强、灵敏度高、重复性好,为临床猫呼吸系统疾病病原鉴别诊断和宠物健康监测提供了技术支持。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒1型(fhv-1) 猫杯状病毒(FCV) 实时荧光定量PCR

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哈尔滨圈养东北虎FHV-1的巢式PCR检测及gD基因序列分析 被引量：1

2

作者 石龙艳 黄舒萍 +9 位作者 郭琳 李祥 王贤 陆雨欣 苏雨晴 徐海涛 周晓禹 李大鹏 宫明 王亚君 《野生动物学报》 北大核心 2022年第3期810-815,共6页

东北虎(Panthera tigris altaica)是世界上体型较大的猫科(Felidae)动物,是我国一级保护动物。疾病防控对东北虎保护与繁育工作至关重要,目前关于东北虎重要病毒病的流行病学资料寥寥无几。传染性鼻气管炎是由猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline her... 东北虎(Panthera tigris altaica)是世界上体型较大的猫科(Felidae)动物,是我国一级保护动物。疾病防控对东北虎保护与繁育工作至关重要,目前关于东北虎重要病毒病的流行病学资料寥寥无几。传染性鼻气管炎是由猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type 1,FHV-1)感染引起的一种上呼吸道疾病,且现有疫苗免疫后多出现再感染现象,对猫科动物健康造成一定危害。本研究采集50只东北虎全血样本,利用巢式PCR进行FHV-1检测,结果有10份样本扩增出明显目的条带,阳性率为20%;随机选取其中2株扩增FHV-1 gD基因全序列,获取的1125 bp序列与FHV-1参考株同源性为99.16%~99.56%,相比FHV-1参考株,获取序列有5个碱基位点发生了突变。研究结果丰富了圈养东北虎FHV-1流行病学数据,为圈养大型猫科动物的FHV-1监测提供了参考,有利于提高东北虎种群的保护成效。 展开更多

关键词 东北虎 fhv-1 GD基因 巢式PCR

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猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)抗体ELISA检测方法的建立与初步应用 被引量：5

3

作者 王吉 卫礼 +5 位作者 付瑞 李晓波 王淑菁 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《实验动物科学》 2014年第4期1-5,共5页

目的建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FHV-1抗体的检测。方法培养猫肾传代细胞(CRFK),接种FHV-1病毒,制备CRFK正常抗原和FHV-1特异抗原,滴定山羊抗猫IgG-HRP和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、稳... 目的建立猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)抗体ELISA检测方法,应用于临床样品中FHV-1抗体的检测。方法培养猫肾传代细胞(CRFK),接种FHV-1病毒,制备CRFK正常抗原和FHV-1特异抗原,滴定山羊抗猫IgG-HRP和抗原最佳工作浓度,并进行特异性、敏感性、稳定性及精密性实验。结果正常抗原、特异抗原和酶结合物最佳工作浓度分别为0.05μg/mL、10μg/mL和1∶5 000;正常抗原、特异抗原批内变异系数分别为8.7%和5.8%,批间平均变异系数分别为11.9%和6.6%;检测灵敏度为1∶6 400;与猫细小病毒(FPV)、猫杯状病毒(FCV)均无交叉反应。稳定性试验相对偏差小于25%。结论建立的ELISA方法重复性、稳定性好,特异性、敏感性强,可用于猫FHV-1抗体的检测。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒1型 ELISA 猫

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FHV-1阳性猫角膜腐骨病不同手术方式治疗效果的比较 被引量：1

4

作者 毕静文 达举云 +1 位作者 史金莲 张勇 《动物医学进展》 北大核心 2022年第10期126-131,共6页

为探究猫角膜腐骨病最佳治疗方式,试验选取了患猫角膜腐骨病的病例共90例,应用PCR方法对患猫眼、鼻、口拭子样本进行猫疱疹病毒1型(FHV-1)检测。对检出的26例FHV-1阳性患猫采取了不同的手术方式进行治疗。术后1个月通过裸眼观察对比角... 为探究猫角膜腐骨病最佳治疗方式,试验选取了患猫角膜腐骨病的病例共90例,应用PCR方法对患猫眼、鼻、口拭子样本进行猫疱疹病毒1型(FHV-1)检测。对检出的26例FHV-1阳性患猫采取了不同的手术方式进行治疗。术后1个月通过裸眼观察对比角膜透明度,发现采用生物补片修补术的优于自体角膜结膜板层移植术的,采用自体角膜结膜板层移植术的优于结膜瓣遮盖术的。为了探究治疗效果更好的手术方式,进行了异种角膜移植治疗猫角膜腐骨的尝试。对1例角膜腐骨患猫进行了兔角膜板层移植,1周后拆除第三眼睑遮盖,发现眼部毛细血管网沿角膜缘向角膜爬行速度较正常时间快1倍,3周后角膜基本透明仅有少量瘢痕。结果表明生物补片修补术治疗效果好于其他方法,兔角膜板层植片方式可尝试但还需要进一步验证。 展开更多

关键词 猫 角膜腐骨 猫疱疹病毒1型 手术治疗 异种角膜板层移植术

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猫疱疹病毒多表位纳米颗粒疫苗的制备及免疫原性评价

5

作者 杨丹丹 刘冰 +6 位作者 赵维昊 赵亚楠 张玉蝶 郭巾玲 刘冬禹 殷玉和 吴丛梅 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第9期4260-4272,共13页

【目的】设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗,为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】本研究利用多种生物信息学工具对FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点... 【目的】设计并开发针对猫疱疹病毒1型(FHV-1)gB、gD蛋白的多表位纳米颗粒疫苗,为FHV-1多表位纳米颗粒疫苗的抗原筛选与优化提供理论依据。【方法】本研究利用多种生物信息学工具对FHV-1 gB、gD蛋白的理化性质、跨膜结构、N-糖基化位点、二级结构、B细胞抗原表位、免疫原性和保守性进行分析。构建重组质粒pET20b-FBDF,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。经Ni柱亲和层析纯化及透析浓缩处理后得到重组蛋白FBDF,通过SDS-PAGE进行鉴定,BCA法测定蛋白含量,透射电子显微镜(TEM)和动态光散射(DLS)观察自组装纳米颗粒的形态和粒径大小。将制备的FHV-1表位纳米颗粒疫苗皮下免疫BALB/c小鼠,评价其免疫原性。【结果】FHV-1 gB、gD蛋白的多个氨基酸域均表现出优异的亲水性、抗原性、结构柔韧性和表面可及性特征。FHV-1 gB、gD蛋白分别存在11和5个潜在的糖基化位点;蛋白二级结构均主要由α-螺旋、β-折叠、β-转角及无规则卷曲组成,其中无规则卷曲占比最高;分别产生17和6个B细胞线性表位。筛选出3个高抗原性和保守性的优势抗原表位:gB_(1):197-208,gB_(2):314-325,gD:221-232。将表位使用柔性连接子(GGGGS)与Ferritin相连,经密码子优化后,构建pET20b-FBDF重组质粒。SDS-PAGE结果显示,重组蛋白FBDF在30℃、0.5 mmol/L IPTG诱导16 h时成功可溶性表达。TEM和DLS结果显示,纯化后的FBDF蛋白可自组装成直径为16.55 nm的纳米颗粒。小鼠免疫结果显示,三免后14 d小鼠血清中抗体滴度达到峰值,其中FBDF+Al(OH)_(3)、FBDF+CpG、FRCPV组抗体滴度分别为1∶680000、1∶15600、1∶3500,显著高于PBS和Ferritin组(P<0.05)。接种FBDF可诱导小鼠产生较高水平的γ-干扰素(IFN-γ)、白细胞介素-4(IL-4)和中和抗体,中和抗体水平最高可达1∶2^(5)。【结论】本研究构建的多表位纳米颗粒疫苗FBDF具有较好的免疫原性,可诱导BALB/c小鼠产生体液免疫和细胞免疫应答,为FHV-1多表位疫苗的研究奠定基础。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒(fhv) gB蛋白 gD蛋白 抗原表位预测 多表位疫苗

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猫上呼吸道疾病四重荧光定量PCR检测方法的建立与应用

6

作者 惠宇韬 胡文佳 +5 位作者 孙亚琪 于永乐 杨海燕 薄惠文 马清霞 张传美 《病毒学报》 北大核心 2025年第4期1217-1225,共9页

本研究旨在建立一种四重荧光定量PCR的检测方法,用于鉴别和诊断猫上呼吸道疾病(Feline upper respiratory tract disease,FURTD)中四种常见的病原。针对猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)的VP1基因、猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesviru... 本研究旨在建立一种四重荧光定量PCR的检测方法,用于鉴别和诊断猫上呼吸道疾病(Feline upper respiratory tract disease,FURTD)中四种常见的病原。针对猫杯状病毒(Feline calicivirus,FCV)的VP1基因、猫疱疹病毒Ⅰ型(Feline herpesvirus type-1,FHV-1)的TK基因、衣原体(Chlamydophila felis,C.felis)的OmpA基因和支原体(Mycoplasma felis,M.felis)的16s rDNA的特异性序列,设计并合成引物和探针。采用矩阵法优化引物探针的浓度和退火温度;根据优化好的反应条件建立标准曲线,并对该检测方法进行敏感性、特异性和重复性检验。用建立的方法检测128份猫上呼吸道感染样本,并对检出的结果做病原感染情况分析。结果表明:建立的PCR标准曲线的相关系数(R2)>0.98,具有良好的线性关系。能特异性检出FCV、FHV-1、C.felis、M.felis,其他病原均未检出。FCV、FHV-1、C.felis的最低检测限为10拷贝/μL,M.felis的最低检测限为100拷贝/μL。重复性试验结果的变异系数均<2%。128份有上呼吸道症状的拭子中,有76份样本存在混合感染,占比59.38%,二重感染和三重感染构成主要感染模式,表明猫上呼吸道病原感染以混合感染为主要特征。本研究所建立的方法对四种病原的鉴别诊断和早期筛查提供了可靠的技术支持。 展开更多

关键词 FCV fhv-1 C.felis M.felis 荧光定量PCR 检测方法

原文传递

猫疱疹病毒Ⅰ型gIgE基因缺失毒株的构建及生物学特性分析 被引量：1

7

作者 张晶晶 孙慧敏 +1 位作者 宋家升 鲍恩东 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期515-521,共7页

[目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sg... [目的]为了开发一种能够预防感染、阻止潜伏期建立的猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)弱毒疫苗,利用同源重组以及CRISPR/Cas9技术将FHV-1的gIgE基因替换为红色荧光蛋白基因(RFP)。[方法]构建针对gIgE基因的3条sgRNA及表达Cas9蛋白的质粒,将含有sgRNA及Cas9蛋白的质粒与含有RFP的转移载体共转染到猫肾细胞(F81),通过噬斑纯化以及有限稀释方法进行病毒纯化,以重组病毒感染F81细胞连续10代验证其遗传稳定性,通过测定重组病毒以及亲本病毒H07的病毒滴度、一步生长曲线以及判断噬斑大小评价其生物学特性。[结果]成功构建了FHV-1 gIgE基因缺失毒株并将其命名为FHV-ΔgIgE-RFP;提取重组病毒DNA,通过PCR验证gIgE基因无目的条带,表明重组病毒纯化成功,再通过PCR验证RFP基因有目的条带,表明重组病毒成功插入外源基因。病毒滴度测定结果显示,与亲本病毒相比重组病毒的病毒滴度下降了90%;在F 1—F 10连续传代过程中RFP荧光表达且无减弱现象,表明重组病毒可稳定表达外源基因;测定FHV-ΔgIgE-RFP以及H07的生长曲线,重组病毒的生长趋势与亲本病毒大致相同,表明插入外源基因并不会改变病毒本身的生长特性;噬斑观察及染色结果显示,在病毒感染细胞前、后期,重组病毒的噬斑都小于亲本病毒,表明缺失gIgE基因后病毒毒力下降。[结论]成功构建并筛选出FHV-1 gIgE基因缺失致弱毒株,为开发疱疹病毒弱毒活载体疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型(fhv-1) 致弱毒株 重组病毒 病毒筛选

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猫疱疹病毒1型的检测及一株分离毒株的致病性

8

作者 邓梏男 张家祺 +8 位作者 保志鹏 陈涛云 喻琦胜 丁露 朱晨曦 王怡 任玉鹏 贺超 张斌 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期2253-2258,共6页

旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致... 旨在调查成都地区的猫疱疹病毒1型(feline herpesvirus-1, FHV-1)的流行及遗传变异情况。试验选取2020—2023年从成都地区采集的178份具有呼吸道症状猫的眼、鼻及口咽拭子进行FHV-1核酸检测、gE基因遗传进化分析、FHV-1的分离鉴定和致病性研究。结果发现,成都地区FHV-1阳性率为11.8%(21/178);其中宠物医院FHV-1阳性率为6.4%(7/110),猫舍FHV-1阳性率为20.6%(14/68),表明在猫舍中FHV-1感染率更高。FHV-1 gE基因的遗传进化分析结果表明,本研究扩增出的5株gE基因和疫苗株的核苷酸同源性在99.1%~100%,并发现PX-9株存在3个独特的氨基酸突变位点(L259Q、C294I、W295F)。通过CRFK细胞对5份阳性样本进行病毒的分离培养,结果PX-9毒株被成功分离鉴定。对PX-9毒株进行动物回归试验,结果表明攻毒组猫只表现出眼鼻分泌物增多,打喷嚏等临床症状,在接毒后第4天病毒拷贝数最高,为9.05×10^(7) copies·μL^(-1),且排毒期较长;攻毒猫只FHV-1病毒载量检测结果显示,气管及肺组织病毒拷贝数分别为1.7×10^(7)和3.5×10^(4) copies·μg^(-1),其它组织核酸阴性。综上表明,在成都地区仍然存在FHV-1流行,并且流行毒株有较强的致病性。 展开更多

关键词 fhv-1 流行情况 遗传变异 动物回归试验

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北京部分地区猫泛白细胞减少症病毒、疱疹病毒和杯状病毒流行病学调查分析 被引量：2

9

作者 张美华 张中华 +5 位作者 鲁锋 朱方超 赵俊鑫 苏煜智 武峥 石文达 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2024年第8期138-141,共4页

为了解北京地区猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、疱疹病毒(FHV)和杯状病毒(FCV)的流行情况,并统计分析年龄和疫苗免疫与FPV、FHV和FCV阳性率的相关性,本调查于2021年1月—2023年6月收集北京地区多家宠物医院疑似感染FPV(313份)、FHV(1869份)... 为了解北京地区猫泛白细胞减少症病毒(FPV)、疱疹病毒(FHV)和杯状病毒(FCV)的流行情况,并统计分析年龄和疫苗免疫与FPV、FHV和FCV阳性率的相关性,本调查于2021年1月—2023年6月收集北京地区多家宠物医院疑似感染FPV(313份)、FHV(1869份)或FCV(1638份)和体检动物样本,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)进行检测,并对结果进行统计分析。结果显示,FPV、FHV和FCV阳性率分别为57.51%、39.43%和42.31%;0~6月龄猫FPV阳性率显著高于>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~6月龄猫更易感染FPV;0~6月龄猫FHV阳性率显著高于>6~12月龄、>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~6月龄猫更易感染FHV;0~6月龄和>6~12月龄猫FCV阳性率显著高于>1~9岁和>9岁猫(P<0.05),说明0~12月龄猫更易感染FCV;免疫猫FPV、FHV和FCV阳性率极显著低于未免疫猫(P<0.01),说明疫苗免疫与FPV、FHV和FCV阳性率呈强相关性,进一步表明疫苗免疫可有效降低FPV、FHV和FCV阳性率。因此,建议在0~6月龄及时进行猫三联疫苗免疫,可有效降低猫感染FPV、FHV和FCV的风险,更有利于宠物健康。 展开更多

关键词 猫泛白细胞减少症病毒(FPV) 猫疱疹病毒(fhv) 猫杯状病毒(FCV) 流行病学调查

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猫常见传染病的防治研究进展

10

作者 熊霙 周含笑 +5 位作者 杨斌 王妙玮 单靖方 祖丽阿亚提·阿卜杜热西提 杨思远 王亚君 《黑龙江农业科学》 2024年第10期108-113,共6页

近年来,宠物饲养数量呈上升态势,宠物猫的养殖量增长速度尤为突出,在城市宠物猫中常见传染病的发病率也随之提高。猫泛白细胞减少症病毒(Feline Panleukopenia Virus,FPV)、猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)、猫疱疹病毒1型(Feline H... 近年来,宠物饲养数量呈上升态势,宠物猫的养殖量增长速度尤为突出,在城市宠物猫中常见传染病的发病率也随之提高。猫泛白细胞减少症病毒(Feline Panleukopenia Virus,FPV)、猫杯状病毒(Feline Calicivirus,FCV)、猫疱疹病毒1型(Feline Herpesvirus 1,FHV-1)、猫艾滋病毒(FIV)以及猫白血病病毒(Feline Leukemia Virus,FeLV)的发病率较高,这些病毒的传播速度快,传播途径广泛且一年四季均可发病,严重危害猫科动物尤其是宠物猫的健康。有效的疫苗免疫是控制上述疾病最经济、最直接的措施。本文对上述病毒的流行情况、临床治疗以及常用预防疫苗进行了全面的介绍和总结,通过比较现有各类疫苗的优势与不足,预测了疫苗未来发展趋势,以期对我国猫常见传染病的诊治与疫苗研发提供参考。 展开更多

关键词 猫泛白细胞减少症病毒 猫疱疹病毒1型 猫杯状病毒 猫艾滋病毒 猫白血病病毒 疫苗

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北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型的分离及鉴定 被引量：5

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作者 王吉 付瑞 +8 位作者 冯育芳 李晓波 王淑菁 王莎莎 李威 秦骁 巩薇 岳秉飞 贺争鸣 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期580-590,共11页

了解北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)毒株特点,为猫疱疹病毒Ⅰ型的进一步研究及对猫的感染预防控制奠定基础。经特异性PCR检测为FHV-1阳性临床猫眼鼻拭子,经过处理,接种CRFK细胞,通过细胞培养分离病毒。通过间接免疫荧光试验、电镜形态... 了解北京地区猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)毒株特点,为猫疱疹病毒Ⅰ型的进一步研究及对猫的感染预防控制奠定基础。经特异性PCR检测为FHV-1阳性临床猫眼鼻拭子,经过处理,接种CRFK细胞,通过细胞培养分离病毒。通过间接免疫荧光试验、电镜形态观察、病毒毒力测定及基因序列分析等对分离株进行鉴定。PCR检测FHV-1阳性的14只猫眼鼻拭子接种CRFK细胞,有6只猫样本能使CRFK细胞发生圆缩、拉网集聚等病变;6个样本接种的CRFK病变细胞滴片进行免疫荧光试验,均产生绿色荧光反应;经传代培养,有5株分离株能够稳定传代,其中有2株弱毒,3株强毒;电镜下5株分离株均可见直径100~160nm的球型病毒粒子;5株分离株与FHV-1标准株C-27及2个不同公司来源疫苗株gB、gD基因核苷酸比较同源性均为99%以上。实验室成功分离保存5株能稳定传代的FHV-1毒株,5株分离株与FHV-1标准株及2个疫苗株亲缘关系很近。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒Ⅰ型(fhv-1) 病毒分离 病毒鉴定

原文传递

HBV重组抗原表位抗原性的研究 被引量：1

12

作者 潘云华 周东霞 +1 位作者 李嘉琦 陈元鼎 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第2期163-165,171,共4页

目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pE... 目的在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达HBV抗原表位,并对其抗原性进行研究。方法人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。以表达产物为包被抗原对其抗原性进行研究。结果嵌和蛋白与抗-HBs血清可发生特异性结合反应。结论在外源抗原表位表达系统中表达的HBV抗原表位具有良好的抗原性。 展开更多

关键词 HBV 抗原表位 抗原性 fhv-RNA2载体系统

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乙型肝炎病毒重组抗原表位检测敏感性研究 被引量：1

13

作者 潘云华 周东霞 +1 位作者 李嘉琦 陈元鼎 《实用医技杂志》 2007年第5期529-531,共3页

目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点... 目的:在外源抗原表位表达载体系统中构建并表达乙型肝炎病毒(HBV)抗原表位,并对其诊断敏感性进行评价。方法:人工合成编码HBV“a”抗原决定簇表位中24个氨基酸(S124-147)的寡核苷酸序列,克隆入外源抗原表位表达载体系统FHV-RNA2-I3位点,构建重组质粒,在原核pET系统(BL21细胞)中表达。通过ELISA和West-ernblot检测表达产物的抗原性,并以表达产物为包被抗原,通过ELISA和Westernblot检测58份乙肝患者血清抗-HBs。结果:嵌和蛋白可与抗-HBs特异性结合,其ELISA检测抗-HBs阳性率为77.5%,Westernblot的为68%,而对照试剂盒的为62%。结论:在外源抗原表位表达系统中表达的HBV重组抗原表位具有良好的抗原性,有诊断应用价值。 展开更多

关键词 HBV 抗原表位 抗原性 fhv-RNA2载体系统

暂未订购

犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型转移载体的构建及真核表达

14

作者 郭焕平 张守发 +2 位作者 高洋 贾洪林 贾立军 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期829-832,共4页

为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型(FHV1)转移质粒pBS-TK-NcAMA1,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,扩增犬新孢子虫AMA1基因,并将其亚克隆至重组质粒pBS-TK。通过转染试剂PEI将pBS-TK-NcAMA1转移载体转染至293... 为构建犬新孢子虫AMA1基因重组猫疱疹病毒1型(FHV1)转移质粒pBS-TK-NcAMA1,并在真核细胞中表达,以重组质粒pVAX1-NcAMA1为模板,扩增犬新孢子虫AMA1基因,并将其亚克隆至重组质粒pBS-TK。通过转染试剂PEI将pBS-TK-NcAMA1转移载体转染至293T细胞,以制备的小鼠抗犬新孢子虫AMA1蛋白的特异性抗体为一抗,应用间接免疫荧光试验和Western-blot对基因的表达情况进行鉴定。结果显示,构建的病毒转移载体pBS-TK-NcAMA1可以在293T细胞内获得表达,表达蛋白的分子质量为68ku。这一研究成果为犬新孢子虫AMA1基因的重组猫疱疹病毒1型载体疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 犬新孢子虫 NcAMA1基因 猫疱疹病毒1型(fhv1)转移质粒 表达

原文传递

Ⅰ型猫疱疹病毒gB蛋白的截短表达及多克隆抗体的制备 被引量：2

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作者 李娜 王真真 +8 位作者 杜汉宇 贾楠楠 宋若楠 朱杰 李传峰 程松 梁留存 刘光清 孟春春 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期1531-1537,共7页

为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1)gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究,本试验截取gB蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体,构建原核表达质粒pET-30a-gB,测序正确后转... 为获得免疫原性好的Ⅰ型猫疱疹病毒(FHV-1)gB截短蛋白和制备特异性的多克隆抗体,以用于检测gB蛋白的表达水平变化及FHV-1的血清学诊断技术研究,本试验截取gB蛋白的优势抗原区并插入pET-30a载体,构建原核表达质粒pET-30a-gB,测序正确后转入BL21(DE3)感受态细胞进行诱导表达。通过亲和层析纯化蛋白,将获得的重组蛋白免疫6周龄雌性新西兰大白兔制备多克隆抗体。采用固定病毒-稀释血清法测定多抗中和效价,使用FHV-1感染后的细胞样本进行间接免疫荧光和West-blotting检测其反应性和特异性。结果显示,成功构建了表达FHV-1截短gB蛋白的重组质粒pET-30a-gB,在37℃诱导8 h后主要以包涵体形式表达。中和试验结果显示,制备FHV-1 gB截短蛋白多克隆抗体中和效价为1∶48。间接免疫荧光和West-blotting试验结果表明,所制备多克隆抗体具有良好的反应性和特异性,可特异性检测出FHV-1感染细胞中的gB蛋白。结果表明,原核表达的gB截短重组蛋白具有良好的免疫原性,制备的多克隆抗体具有较高的中和效价以及较好的反应性和特异性,为进一步解析gB蛋白的生物学功能和建立FHV-1血清学诊断方法提供了生物材料保障。 展开更多

关键词 Ⅰ型猫疱疹病毒(fhv-1) 原核表达 gB截短重组蛋白 多克隆抗体

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上海市门诊宠物猫和动物园流浪猫的猫疱疹病毒1型中和抗体检测 被引量：6

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作者 赵洪进 白艺兰 +8 位作者 杨显超 朱九超 卢军 陶田谷晟 于讳茹 葛杰 刘健 鞠厚斌 王建 《中国动物检疫》 CAS 2020年第10期127-130,共4页

为了解临床中猫疱疹病毒1型(FHV-1)疫苗的免疫效果和流浪猫的FHV-1感染状况,利用临床分离株建立了FHV-1中和抗体检测方法,并对20份宠物门诊FHV-1免疫猫血清和10份未免疫的动物园流浪猫血清进行中和抗体检测。结果显示,免疫宠物猫和未免... 为了解临床中猫疱疹病毒1型(FHV-1)疫苗的免疫效果和流浪猫的FHV-1感染状况,利用临床分离株建立了FHV-1中和抗体检测方法,并对20份宠物门诊FHV-1免疫猫血清和10份未免疫的动物园流浪猫血清进行中和抗体检测。结果显示,免疫宠物猫和未免疫流浪猫的抗体阳性率均为60%。结果表明,上海市FHV-1疫苗免疫效果不佳,未免疫流浪猫FHV-1感染较严重。结果提示,需加强猫科动物的FHV-1免疫抗体监测,及时补免,同时加强流浪猫的管理、收容、免疫和监测。本研究为防控猫科动物FHV-1感染提供了参考。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒1型 家养猫 流浪猫 中和抗体检测

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北京地区306例猫上呼吸道感染主要病原调查 被引量：19

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作者 郑思艳 吕艳丽 解启宝 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第12期18-21,共4页

为了了解引起猫上呼吸道感染的病原情况, 2016年5月至2017年2月,采集来自中国农业大学动物医院就诊的276例和北京某猫舍的30例具有上呼吸道感染症状的患猫的眼、鼻和口咽拭子,通过PCR/RT-PCR方法扩增猫疱疹病毒(FHV)、猫杯状病毒(FCV)... 为了了解引起猫上呼吸道感染的病原情况, 2016年5月至2017年2月,采集来自中国农业大学动物医院就诊的276例和北京某猫舍的30例具有上呼吸道感染症状的患猫的眼、鼻和口咽拭子,通过PCR/RT-PCR方法扩增猫疱疹病毒(FHV)、猫杯状病毒(FCV)、支原体和衣原体4种病原体的核酸段。结果显示,306份被检样本中,检出支原体111份(36.3%),猫杯状病毒102份(33.3%),猫疱疹病毒67份(21.9%),衣原体4份(1.3%)。其中FCV与支原体混合感染32例,FHV与支原体混合感染19例,FCV与FHV混合感染13例,支原体与衣原体混合感染1例,FCV、FHV、支原体混合感染8例。 展开更多

关键词 猫 猫疱疹病毒 猫杯状病毒 支原体 衣原体

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表达轮状病毒SA11株Vp4的抗原表位诱导病毒中和抗体生成 被引量：8

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作者 陈元鼎 刘名英 +3 位作者 邹永健 彭梅 戴长柏 FranciscoE.Baralle 《中国病毒学》 CSCD 1997年第2期125-131,共7页

以昆虫病毒Ｆｌｏｃｋｈｏｕｓｅｖｉｒｕｓ（ＦＨＶ）外壳蛋白为载体的外源抗原表位表达系统（ＦＨＶ－ＲＮＡ２载体系统），在重组杆状病毒和重组ｐＥＴ系统中构建和表达了ＳＡ１１Ｖｐ４胰酶切割位点两则和重叠切割位点３个抗原表位... 以昆虫病毒Ｆｌｏｃｋｈｏｕｓｅｖｉｒｕｓ（ＦＨＶ）外壳蛋白为载体的外源抗原表位表达系统（ＦＨＶ－ＲＮＡ２载体系统），在重组杆状病毒和重组ｐＥＴ系统中构建和表达了ＳＡ１１Ｖｐ４胰酶切割位点两则和重叠切割位点３个抗原表位氨基酸序列（抗原表位Ａ，ａａ２２３－２４２；抗原表位Ｂ，ａａ２４３－２６２，抗原表位，Ｃａａ２３４－２５１）并对其原免疫原性进行了研究。结果表明。 展开更多

关键词 轮状病毒Vp4 抗原表位 中和抗体 研制

暂未订购

3种猫疱疹病毒Ⅰ型检测方法的比较 被引量：9

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作者 萧晟 熊冉 +3 位作者 苑文涛 王广操 徐敏 陈文华 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2019年第3期394-400,共7页

比较传统PCR、荧光定量PCR以及胶体金速测卡对于猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)检测的敏感性及准确性。设计引物,优化反应条件并扩增目的片段,定向插入p MD-19T克隆载体,最后用建立的2种PCR检测方法及猫疱疹病毒1型快速检测卡对21份临床疑似猫... 比较传统PCR、荧光定量PCR以及胶体金速测卡对于猫疱疹病毒Ⅰ型(FHV-1)检测的敏感性及准确性。设计引物,优化反应条件并扩增目的片段,定向插入p MD-19T克隆载体,最后用建立的2种PCR检测方法及猫疱疹病毒1型快速检测卡对21份临床疑似猫疱疹病毒感染的分泌物进行检测。荧光定量PCR和传统PCR检测的最低拷贝数分别为20拷贝和207拷贝;荧光定量PCR、传统PCR以及胶体金快速检测卡的检出率分别为71%、57%和29%。传统PCR及荧光定量PCR检测方法均具有良好的特异性,其中荧光定量PCR特异性显著,相比猫疱疹病毒1型快速检测卡敏感性好,准确率更高。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒1型 传统PCR 荧光定量PCR 特异性 敏感性

原文传递

qPCR和胶体金试纸条方法检测猫疱疹病毒感染的比较 被引量：1

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作者 张君 李嘉林 +6 位作者 雷若萱 姚铭沁 莫韻怡 刘裕珊 邹俊 戴志亮 叶存栋 《现代畜牧科技》 2023年第3期91-93,共3页

本研究比较猫疱疹病毒(FHV-1)2种检测方法荧光探针qPCR和胶体金试纸在检测FHV-1时各自的优劣,并以PCR扩增FHV-1特异基因Glycoprotein B序列并测序的方法作为参比方法。采集107份疑似FHV-1感染样本,分别用3种方法进行检测,qPCR方法采用... 本研究比较猫疱疹病毒(FHV-1)2种检测方法荧光探针qPCR和胶体金试纸在检测FHV-1时各自的优劣,并以PCR扩增FHV-1特异基因Glycoprotein B序列并测序的方法作为参比方法。采集107份疑似FHV-1感染样本,分别用3种方法进行检测,qPCR方法采用的是冻干型PCR-荧光探针法,胶体金试纸方法采用的是市场成熟产品,参比方法测序结果与GeneBank数据进行比对,确认样本是否为FHV-1。qPCR检出89例FHV-1阳性,18例FHV-1阴性,胶体金试纸条检出51例FHV-1阳性,56例FHV-1阴性,参比方法检出89例阳性,且基因序列比对确认为FHV-1。通过对比实验结果的分析,qPCR方法灵敏度为100%,胶体金试纸条方法灵敏度为57.3%,qPCR检测灵敏度明显优于胶体金试纸。 展开更多

关键词 猫疱疹病毒 qPCR 胶体金试纸 测序

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