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过表达FGL1慢病毒包装及稳转A549细胞株构建
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作者 丁立新 刘淑媛 +1 位作者 拓飞 丁库克 《标记免疫分析与临床》 2026年第1期97-101,共5页
目的旨在构建可高效表达FGL1的慢病毒载体,并利用该载体建立稳定过表达FGL1的A549细胞株。方法根据FGL1基因的编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成特异性引物,采用PCR方法扩增目标DNA片段。将目标DNA克隆至经酶切的LV5载体中,构... 目的旨在构建可高效表达FGL1的慢病毒载体,并利用该载体建立稳定过表达FGL1的A549细胞株。方法根据FGL1基因的编码区(coding sequence,CDS)序列设计并合成特异性引物,采用PCR方法扩增目标DNA片段。将目标DNA克隆至经酶切的LV5载体中,构建LV5-FGL1重组慢病毒质粒。采用共转染策略,制备慢病毒颗粒。感染A549细胞,嘌呤霉素筛选抗性克隆。通过RT-qPCR和Western blot鉴定FGL1的表达。结果酶切与测序分析表明LV5-FGL1重组质粒正确构建。进行慢病毒包装,获得滴度为1.5×108TU/mL的高浓度慢病毒颗粒。感染A549细胞并经筛选后,FGL1在mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.001)。结论本研究成功构建了可高效表达FGL1的慢病毒载体,并获得稳定过表达FGL1的A549细胞株,为后续研究FGL1在肺癌免疫微环境中的调控机制提供了实验工具与研究基础。 展开更多
关键词 A549细胞 慢病毒载体 fgl1基因 稳转细胞株
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胃窦癌组织中LAG-3 FGL1 MHC-Ⅱ的表达与预后的关系 被引量：2
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作者 戚颖 黄子祺 +2 位作者 别鸿宇 颜次慧 任秀宝 《中国肿瘤临床》 CAS CSCD 北大核心 2024年第2期64-69,共6页
目的:探索新型免疫检查点淋巴细胞激活基因3(lymphocyte-activation gene 3,LAG-3)、纤维蛋白原样蛋白1(fibrinogenlike protein 1,FGL1)、主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡ,MHC-Ⅱ)在胃窦癌(gas... 目的:探索新型免疫检查点淋巴细胞激活基因3(lymphocyte-activation gene 3,LAG-3)、纤维蛋白原样蛋白1(fibrinogenlike protein 1,FGL1)、主要组织相容性复合体Ⅱ类分子(major histocompatibility complex classⅡ,MHC-Ⅱ)在胃窦癌(gastric antral cancer,GAC)中的表达情况与预后的相关性。方法:收集2012年1月至2014年12月于天津医科大学肿瘤医院诊断为GAC的67例患者病理标本,分别进行石蜡切片制作,采用免疫组织化学法检测LAG-3、FGL1、MHC-Ⅱ三个指标的表达情况,并用统计学方法分析组间差异。采用Kaplan-Meier法评估LAG-3、FGL1、MHC-Ⅱ的表达水平与GAC患者预后之间的关系并绘制生存曲线。结果:GAC患者中,肿瘤大小<4 cm的患者和无淋巴结转移的患者LAG-3免疫细胞阳性率更高(P<0.05);女性患者MHC-Ⅱ免疫细胞阳性率更高(P<0.05)。免疫细胞中LAG-3、MHC-Ⅱ高表达的患者总生存期(overall survival,OS)较好(P<0.05);肿瘤细胞中MHC-Ⅱ高表达的患者OS、无病生存期(disease-free survival,DFS)较差(P<0.05);而FGL1在免疫细胞和肿瘤细胞中的表达与OS、DFS无显著相关性(P>0.05)。结论:GAC患者LAG-3、MHC-Ⅱ在不同区域的表达量存在差异,GAC患者LAG-3及其配体在免疫细胞的表达对预后产生积极影响,提示免疫细胞中LAG-3/MHC-Ⅱ可以作为GAC患者预后标志物,为临床个体化免疫治疗提供新的依据。 展开更多
关键词 胃窦癌 淋巴细胞激活基因3 纤维蛋白原样蛋白1 主要组织相容性复合体Ⅱ类分子 生存 预后
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