FGF5和FGF21对绒山羊毛乳头细胞增殖的影响

1

作者 王妞 史昕冉 +1 位作者 张卫东 王昕 《中国农业科学》 北大核心 2025年第4期819-830,共12页

【背景】绒山羊毛囊周期分为生长期、退行期和休止期。成纤维生长因子5(fibroblast growth factor5, FGF5)和成纤维生长因子21(fibroblast growth factor21, FGF21)是毛囊周期转换的重要调控因子。然而,FGF5和FGF21在皮肤组织中的定位... 【背景】绒山羊毛囊周期分为生长期、退行期和休止期。成纤维生长因子5(fibroblast growth factor5, FGF5)和成纤维生长因子21(fibroblast growth factor21, FGF21)是毛囊周期转换的重要调控因子。然而,FGF5和FGF21在皮肤组织中的定位以及调控毛囊周期转换的作用机制仍不清楚,而且FGF21在毛囊发育过程中的作用尚存在争议。毛乳头细胞(dermal papilla cells, DPCs)位于毛囊的毛乳头区域,当其功能缺失时,毛囊不能发育,使毛囊周期停滞在休止期,导致脱发。【目的】通过检测FGF5和FGF21在绒山羊皮肤组织中的表达定位,探究FGF5和FGF21对DPCs增殖的影响,并对其调控机制进行解析,丰富成纤维生长因子家族基因调控毛囊周期转换的机制,为进一步阐明绒山羊毛囊周期转换的分子机制提供理论依据。【方法】利用实时荧光定量PCR(real time quantitative PCR, RT-qPCR)和酶联免疫吸附试验(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测FGF5、FGF21及其受体1(fibroblast growth factor receptor1, FGFR1)在绒山羊生长期和休止期皮肤组织中的表达情况,结合单细胞转录组测序数据分析其在绒山羊皮肤组织中的表达定位,并利用组织免疫荧光技术进行验证;通过构建过表达腺病毒载体在绒山羊DPCs中过表达FGF5和FGF21,利用MTT、EdU、流式细胞周期等方法检测其对绒山羊DPCs增殖的影响,并利用RT-qPCR、细胞免疫荧光和Western blotting检测FGFR1及增殖相关基因的表达情况;进一步利用RT-qPCR、细胞免疫荧光和Western blotting等方法探究FGF5和FGF21影响绒山羊DPCs增殖的作用机制。【结果】FGF5、FGF21及其受体FGFR1在绒山羊生长期皮肤组织中的表达量显著高于休止期(P<0.05);FGF5、FGF21及其受体FGFR1均定位于绒山羊DPCs,提示FGF5和FGF21可能参与调控绒山羊DPCs的生物学功能;FGF5和FGF21过表达腺病毒在绒山羊DPCs中的过表达效果良好,其处理时间在84 h最佳(P<0.001);FGF5和FGF21能够显著降低绒山羊DPCs的细胞活力,减少EdU+细胞比率。过表达FGF5减少了绒山羊DPCs中S期和G2期的细胞比率,而FGF21仅影响绒山羊DPCs中G2期的细胞比率(P<0.05);过表达FGF5和FGF21促进其受体FGFR1的表达,并显著抑制增殖相关基因KI67和PCNA的表达(P<0.05)以及Wnt/β-catenin信号通路关键因子β-catenin的表达,其下游转录因子TCF3和JUN的表达也显著下降,而且Wnt/β-catenin信号通路中增殖相关基因MYC和CYCLIND1的表达也受到抑制(P<0.05)。【结论】FGF5、FGF21及其受体FGFR1均定位于绒山羊DPCs中,是调控绒山羊DPCs增殖的重要因子。研究证实FGF21和FGF5在绒山羊皮肤组织中的表达模式相近,通过调控Wnt/β-catenin信号通路抑制绒山羊DPCs的增殖。 展开更多

关键词 绒山羊 fgf5 FGF21 DPCs 增殖 WNT/Β-CATENIN信号通路

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沉默FGF5基因促进胰腺癌BxPC-3细胞自噬并抑制增殖的研究

2

作者 梁梓宇 陆才金 +5 位作者 潘志刚 苏娟 卢丽霞 黄忠向 苏东星 梁秀丽 《海南医学》 2025年第18期2585-2591,共7页

目的探讨沉默成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)在胰腺癌(pancreatic cancer)BxPC-3细胞系的细胞增殖与自噬变化。方法通过构建BxPC-3细胞中FGF5的siRNA沉默模型,采用RT-PCR和Western blot验证FGF5表达的下调效果,... 目的探讨沉默成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)在胰腺癌(pancreatic cancer)BxPC-3细胞系的细胞增殖与自噬变化。方法通过构建BxPC-3细胞中FGF5的siRNA沉默模型,采用RT-PCR和Western blot验证FGF5表达的下调效果,并结合CCK-8和EdU实验评估细胞增殖变化,同时通过Western blot和免疫荧光检测Beclin1、LC3和p62蛋白表达分析细胞自噬水平。结果siRNA转染后48 h检测,si-FGF5#1组和si-FGF5#2组的FGF5 mRNA分别为0.18±0.02和0.15±0.00,明显低于NC组的1.10±0.02,蛋白表达分别为0.22±0.01和0.17±0.02,明显低于NC组的0.71±0.01,差异均有显著统计学意义(P<0.001);si-FGF5#1组和si-FGF5#2组的CCK-8显示第5天细胞增殖OD450值分别为1.21±0.04和1.12±0.07,明显低于NC组的1.87±0.07,EdU阳性细胞率分别为(20.33±1.53)%和(13.33±1.53)%,明显低于NC组的(67.00±0.37)%,差异均有显著统计学意义(P<0.001);si-FGF5#1组和si-FGF5#2组的Beclin1表达分别为0.65±0.03和0.73±0.02,明显高于NC组的0.45±0.02,LC3表达分别为0.80±0.02和0.70±0.01,明显高于NC组的0.40±0.02,而p62表达(0.53±0.02和0.56±0.02)较NC组(0.92±0.03)明显降低,免疫荧光证实LC3信号增强,LC3阳性细胞率[(78.33±1.53)%和(85.67±1.58)%]较NC组的(16.67±1.16)%明显上升,差异均有显著统计学意义(P<0.001)。结论研究表明沉默FGF5基因促进胰腺癌BxPC-3细胞自噬激活并抑制增殖,具有作为潜在治疗靶点的研究价值。 展开更多

关键词 胰腺癌 fgf5 基因沉默 细胞增殖 自噬激活

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FGF5基因对内蒙古绒山羊绒毛性状的影响 被引量：17

3

作者 刘海英 杨桂芹 +2 位作者 张微 朱晓萍 贾志海 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期175-179,共5页

根据FGF5基因已知DNA序列设计了2对引物,采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术,在内蒙古绒山羊群体中进行基因多态性检测,结果发现FGF5基因外显子1存在限制性内切酶BglⅠ多态位点。对其不同基因型个体PCR回收产物进行测序,测序结果发现该SNP是由... 根据FGF5基因已知DNA序列设计了2对引物,采用PCR-SSCP和PCR-RFLP技术,在内蒙古绒山羊群体中进行基因多态性检测,结果发现FGF5基因外显子1存在限制性内切酶BglⅠ多态位点。对其不同基因型个体PCR回收产物进行测序,测序结果发现该SNP是由碱基序列C→T的突变而引起的。基因型和基因频率统计,该实验群体以等位基因A具有明显的优势,χ2检验表明该SNP位点的基因频率处于Hardy-Weinberg平衡状态;对该SNP与绒毛性状关联分析,表明该SNP对绒纤维伸直长度(P<0.01)和含绒量(P<0.05)有显著影响,而对其他各绒毛性状的影响不显著(P>0.05)。AB基因型个体绒纤维伸直长度(P<0.01)和含绒量(P<0.05)显著高于AA基因型个体。 展开更多

关键词 内蒙古绒山羊 fgf5 PCR—RFLP PCR—SSCP 绒毛性状

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兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因SNP及其与产毛量的相关分析 被引量：26

4

作者 李春笑 蒋美山 +1 位作者 陈仕毅 赖松家 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期893-899,共7页

通过PCR产物直接测序的方法,对荥经长毛兔、天府黑兔以及加利福尼亚兔的FGF5基因外显子1和外显子3进行单核苷酸多态性分析。在外显子1的217位(位点A)检测到由TCT三碱基插入引起的移码突变,在外显子3的59位(位点B)和3位(位点C)分别发生... 通过PCR产物直接测序的方法,对荥经长毛兔、天府黑兔以及加利福尼亚兔的FGF5基因外显子1和外显子3进行单核苷酸多态性分析。在外显子1的217位(位点A)检测到由TCT三碱基插入引起的移码突变,在外显子3的59位(位点B)和3位(位点C)分别发生了错义突变由T→C和同义突变由T→C。通过计算发现各位点不同的基因型和等位基因频率在3个兔品种中存在较大的差异,位点A、B在长毛兔和肉兔中均有各自的优势基因型和等位基因。各位点基因型与产毛量的最小二乘分析表明,位点A各基因型的个体在产毛量上差异不显著(P>0.05),位点B各基因型个体产毛量的差异极显著(P<0.01),位点C各基因型个体产毛量的差异显著(P<0.05)。初步推断FGF5基因可能是影响长毛兔产毛量潜在的主效基因或者与主效基因连锁,可作为长毛兔产毛性状连锁分析的候选遗传标记。 展开更多

关键词 兔 fgf5基因 单核苷酸多态性 产毛量

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褪黑素对绒山羊皮肤FGF5等绒毛生长相关基因的影响 被引量：8

5

作者 赵德超 付绍印 +6 位作者 吕晓曼 吴江鸿 张燕军 李金泉 王志新 张永斌 张文广 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期20-26,共7页

目的:旨在分析埋植褪黑素后对绒山羊皮肤绒毛生长相关基因表达的影响,进而探讨褪黑素促绒毛生长的机理。方法:以内蒙古白绒山羊为研究对象,选取体况相近的4月龄母羔羊10只,按试验要求随机分为2组,处理组按照2mg/kg BW(体重)的剂量每两... 目的:旨在分析埋植褪黑素后对绒山羊皮肤绒毛生长相关基因表达的影响,进而探讨褪黑素促绒毛生长的机理。方法:以内蒙古白绒山羊为研究对象,选取体况相近的4月龄母羔羊10只,按试验要求随机分为2组,处理组按照2mg/kg BW(体重)的剂量每两个月耳后皮下埋植褪黑素,对照组不埋植,试验时间为1年。实验开始后每月采集绒山羊体侧皮肤和毛样,利用荧光定量PCR技术检测9个绒毛生长相关基因的表达变化。结果:(1)埋植褪黑素后各个基因的平均表达水平都有所上调,其中显著上调FGF5(P<0.0001),而对β-catenin、MSX-2、Wnt10b、BMP2、BMPRIB、NTRK3、Delta1、hairless等无显著影响(P>0.05);(2)埋植褪黑素明显提高了FGF5与hairless的相关性,并且使FGF5与β-catenin、NTRK3的相关性由负相关变成正相关,与Wnt10b的相关性降低,FGF5与其余4个基因的相关性变化不大。结论:结果提示,褪黑素上调绒山羊皮肤FGF的表达,影响FGF5与hairless、β-catenin、NTRK3之间的相关性;山羊中FGF5基因对被毛表型的作用与其他动物不同;褪黑素对复杂组织和单个细胞的作用不同;MAPK信号通路是受褪黑素影响最大的一个信号途径。推测褪黑素可能通过调节绒山羊皮肤中RORα来发挥作用,影响FGF5与hairless、β-catenin、NTRK3和Wnt10b等的相关性,同时抑制MSX2和BMP2的功能,进而促进绒毛的生长。 展开更多

关键词 褪黑素 绒山羊 fgf5 绒毛生长机理

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miR-145-5p靶向FGF5对缺血/再灌注损伤诱导的神经细胞凋亡和氧化应激的调控作用 被引量：9

6

作者 闫海清 岳学静 +4 位作者 贵永堃 任瑞芳 王昊亮 赵君 张平 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2019年第6期887-893,共7页

目的研究miR-145-5p对体外缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞模型的调控作用,并探讨其机制。方法运用氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)建立脑缺血/再灌注损伤细胞模型。采用荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与FGF5的靶向关系;RT-PCR、流式细胞术、W... 目的研究miR-145-5p对体外缺血/再灌注(I/R)损伤神经细胞模型的调控作用,并探讨其机制。方法运用氧-葡萄糖剥夺/复氧(OGD/R)建立脑缺血/再灌注损伤细胞模型。采用荧光素酶报告实验验证miR-145-5p与FGF5的靶向关系;RT-PCR、流式细胞术、Western blot等方法检测miR-145-5p对神经细胞HT22的凋亡和氧化应激损伤的影响。结果结果表明,与未进行OGD/R处理组(Normoxia组)相比,OGD/R处理6 h、12 h、24 h组凋亡率和氧化应激损伤明显增加。在OGD/R环境下,miR-145-5p inhibitor转染减轻HT22细胞凋亡和氧化应激损伤。然而,转染FGF5 siRNA逆转了这一效应。在OGD/R模拟的脑I/R损伤过程中,miR-145-5p通过靶向FGF5促进神经细胞凋亡和损伤。结论研究结果为缺血性脑卒中的治疗提供了一种新的治疗靶点。 展开更多

关键词 miR-145-5p fgf5 缺血/再灌注损伤 OGD/R模型

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绵羊FGF5基因的克隆、表达及RNA干扰 被引量：6

7

作者 刘伍限 贾斌 +3 位作者 石国庆 任建功 刘卡 马润林 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2011年第9期982-988,共7页

根据牛的成纤维细胞内生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因cDNA序列设计引物,PCR扩增得到绵羊FGF5基因cDNA的开放阅读框序列,并比较和其他6种高等哺乳动物的序列同源性;同时研究该基因在绵羊多种组织的表达情况,以及研究以... 根据牛的成纤维细胞内生长因子5(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因cDNA序列设计引物,PCR扩增得到绵羊FGF5基因cDNA的开放阅读框序列,并比较和其他6种高等哺乳动物的序列同源性;同时研究该基因在绵羊多种组织的表达情况,以及研究以细胞模型RNA干扰下的表达情况。结果表明,绵羊FGF5基因ORF全长为813 bp,编码270个氨基酸,分子量约为29.58 kDa,理论等电点10.59。绵羊FGF5基因cDNA序列与牛、人、小鼠、大鼠、犬和猫的对应序列同源性高度保守,预测氨基酸序列同源性同样具有高度保守性。RT-PCR分析表明FGF5在绵羊皮肤、小肠、肾脏、心脏、肝脏、脾脏、胰脏和肺中均有表达,皮肤中表达量最高。构建该基因的原核表达载体和RNAi载体,IPTG诱导在大肠杆菌中融合表达获得55 kDa的蛋白条带,设计的RNA干扰片段能显著抑制FGF5基因的表达。文章为进一步阐明绵羊FGF5的功能尤其是在羊毛生长发育中的作用提供了理论和实验基础。 展开更多

关键词 绵羊 fgf5 基因克隆 表达 RNAI

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CRISPR/Cas9编辑绒山羊FGF5基因细胞株的建立 被引量：5

8

作者 阿力玛 高原 +1 位作者 苏小虎 周欢敏 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第7期41-47,共7页

拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶(T7E1)检测载体活性,选择活... 拟利用CRISPR/Cas9技术建立编辑FGF5基因的绒山羊细胞株。在FGF5基因的第一外显子设计靶点并合成gRNA靶点引物,构建2个编辑FGF5基因的Cas/gRNA真核表达质粒载体。电穿孔法转染绒山羊成纤维细胞后T7核酸内切酶(T7E1)检测载体活性,选择活性最高的载体转染细胞,单细胞接种并扩繁,提取基因组DNA,PCR及测序鉴定。经测序分析共获得20个FGF5基因敲除细胞株(包括FGF5+/-和FGF5-/-),总突变率为14.81%。双敲除突变细胞株可作为供体细胞进行重构胚构建,为创造高产绒性状的FGF5基因编辑绒山羊奠定基础。 展开更多

关键词 绒山羊 fgf5 CRISPR/Cas9 基因编辑

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绵羊FGF5基因Exon 3多态性对毛用性状的影响 被引量：6

9

作者 张立春 尹峰 +6 位作者 柳俭强 李梦姝 王春昕 曹阳 朴庆林 金海国 张明新 《中国草食动物科学》 CAS 2018年第6期1-5,共5页

为探寻不同细毛羊品种FGF5基因多态性及其对毛用性状的影响,采用PCR-SSCP方法对苏博美利奴羊和东北细毛羊两个群体的FGF5基因Exon 3区进行了多态性分析,并在苏博美利奴羊群体中对不同基因型个体与其毛用性状进行了差异显著性分析。结果... 为探寻不同细毛羊品种FGF5基因多态性及其对毛用性状的影响,采用PCR-SSCP方法对苏博美利奴羊和东北细毛羊两个群体的FGF5基因Exon 3区进行了多态性分析,并在苏博美利奴羊群体中对不同基因型个体与其毛用性状进行了差异显著性分析。结果表明:苏博美利奴羊群体FGF5基因Exon 3区存在5种基因型,分别是DD、EE、FF、DE和EF,而东北细毛羊群体只存在DD、EE和DE三种基因型;苏博美利奴羊F等位基因由CDs区c.618和c.733多态位点构成,其中c.733位点C->G突变导致E等位基因型个体氨基酸L->V变异。苏博美利奴羊群体只有FF基因型个体在产毛量指标上显著高于DD基因型个体(P<0.05)。不同毛用绵羊品种FGF5基因多态性及其与毛用性状相关性的研究可为利用FGF5基因进行毛用性状选育奠定基础。 展开更多

关键词 苏博美利奴羊 东北细毛羊 fgf5 羊毛性状 基因多态性

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獭兔KAP和FGF5基因的多态性与经济性状的关系 被引量：11

10

作者 宦霞娟 陈玉林 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期12-17,共6页

分析獭兔KAP基因和FGF5基因的多态性与经济性状的关系,为獭兔下一步的性状改良提供理论基础。利用PCR-SSCP技术对KAP基因的4个位点进行遗传变异检测,通过SPSS软件下的GLM程序分析150只獭兔KAP基因2个多态位点及FGF5基因2个多态位点不同... 分析獭兔KAP基因和FGF5基因的多态性与经济性状的关系,为獭兔下一步的性状改良提供理论基础。利用PCR-SSCP技术对KAP基因的4个位点进行遗传变异检测,通过SPSS软件下的GLM程序分析150只獭兔KAP基因2个多态位点及FGF5基因2个多态位点不同基因型的最小二乘均值(LSM)、最小二乘效应值(LSE)及其遗传方差;通过标记位点与胴体性状和毛皮性状的遗传相关预测了选择反应。结果表明:獭兔KAP3.2位点可作为胴体深和被毛密度的标记位点,KAP6-1位点可作为獭兔体质量,胴体质量和被毛长度性状的标记基因型的标记位点,FGF5-1位点可作为体质量、胴体质量、皮质量和被毛密度的标记位点。 展开更多

关键词 獭兔 KAP fgf5 经济性状 PCR-SSCP

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绵羊FGF5基因编码蛋白的生物信息学分析 被引量：9

11

作者 刘伍限 贾斌 石国庆 《石河子大学学报（自然科学版）》 CAS 2011年第3期296-300,共5页

为了应用生物信息学分析绵羊FGF5基因编码蛋白的结构与抗原表位,预测该蛋白的免疫原性。根据牛的FGF5基因cDNA保守区序列设计引物对绵羊FGF5基因cDNA进行扩增,将扩增片段进行克隆和测序,并与牛的FGF5基因序列进行同源性比较,确定扩增的... 为了应用生物信息学分析绵羊FGF5基因编码蛋白的结构与抗原表位,预测该蛋白的免疫原性。根据牛的FGF5基因cDNA保守区序列设计引物对绵羊FGF5基因cDNA进行扩增,将扩增片段进行克隆和测序,并与牛的FGF5基因序列进行同源性比较,确定扩增的片段为绵羊FGF5基因片段。利用蛋白分析专家系统(ExPASy)提供的ProtParam、SOSUI、MotifScan、SWISS-MODEL等生物信息学在线分析程序,结合TMH-MM2.0、SignalP3.0、TargetP 1.1和PSORTⅡprediction、Gene Runner和DNAMAN等生物信息学软件,分析、预测FGF5蛋白的理化性质、可溶性、翻译后修饰位点、亲(疏)水性、跨膜区、信号肽序列、蛋白细胞定位区域、二级结构、抗原表位等。结果显示该蛋白由270个氨基酸组成,分子式C1315H2085N389O378S6,分子质量单位为29.5847 ku,理论等电点为10.59,波长280 nm时的吸光度(A)值为0.864,半衰期为30 h,22个翻译后修饰位点、多个亲水性高的区域、2个跨膜区域、11个潜在抗原表位,为可溶性和分泌型蛋白,具有免疫原性,可据此制备多克隆抗体。 展开更多

关键词 绵羊 fgf5基因 蛋白质结构 生物信息学 抗原表位

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伊拉肉兔和美系獭兔FGF5基因外显子及部分内含子多态性研究 被引量：2

12

作者 牛华锋 张成东 +3 位作者 杨雪娇 任战军 王淑辉 赵永攀 《家畜生态学报》 北大核心 2021年第8期30-35,共6页

为了探索与家兔毛质性状有关的遗传标记,为家兔分子选育提供理论依据,该研究采用PCR直接测序法,对伊拉肉兔和美系獭兔FGF5基因的外显子Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的序列进行分析,结果表明:(1)FGF5基因外显子Ⅰ和Ⅲ均存在多态性,FGF5外显子Ⅱ不存在多态... 为了探索与家兔毛质性状有关的遗传标记,为家兔分子选育提供理论依据,该研究采用PCR直接测序法,对伊拉肉兔和美系獭兔FGF5基因的外显子Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ的序列进行分析,结果表明:(1)FGF5基因外显子Ⅰ和Ⅲ均存在多态性,FGF5外显子Ⅱ不存在多态性;(2)FGF5基因外显子Ⅰ的A位点存在AGA插入突变(反向测序),有A_(1)A_(1)(突变型)、A_(1)A_(2)和A_(2)A_(2)(野生型)3种基因型,其中A_(1)A_(1)为美系獭兔的优势基因型,A_(2)A_(2)为伊拉肉兔的优势基因型;(3)FGF5基因外显子Ⅲ的B位点存在G-C突变,有B_(1)B_(1)(野生型)和B_(1)B_(2)2种基因型,且B_(1)B_(1)为这两种家兔的优势基因型;(4)应用适合性检验FGF5基因外显子ⅠA位点和外显子ⅢB位点基因型频率,发现只有伊拉肉兔群体中外显子ⅠA位点的基因型分布不符合Hardy-Weinberg平衡定律(P<0.05),而外显子ⅠA位点基因型在美系獭兔群体中和外显子ⅢB位点基因型在这两种家兔群体中的分布均符合hardy-weinberg平衡定律(P>0.05);(5)在伊拉肉兔和美系獭兔外显子Ⅰ的A位点和伊拉肉兔外显子Ⅲ的B位点均存在中度多态(0.25<PIC<0.5),美系獭兔外显子Ⅲ的B位点存在低度多态(PIC<0.25)。研究结果显示FGF5可作为影响家兔毛绒品质的候选基因,对繁育优良的皮用家兔品种具有重要意义。 展开更多

关键词 伊拉肉兔 美系獭兔 fgf5基因 多态性

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PiggyBac转座子介导的转FGF5s基因绒山羊胎儿成纤维细胞的制备 被引量：2

13

作者 何晓琳 袁超 +1 位作者 屈雷 陈玉林 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1926-1931,共6页

本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊... 本研究旨在建立可稳定表达FGF5s的绒山羊胎儿成纤维细胞系。采用RT-PCR方法,从陕北白绒山羊皮肤组织cDNA中克隆FGF5s基因,构建PB转座子介导的真核表达载体PB-EGFP-FGF5s;在脂质体的介导下,将PB-EGFP-FGF5s载体和转座酶载体共转染绒山羊胎儿成纤维细胞,通过嘌呤霉素进行稳定筛选。并利用PCR和RT-PCR鉴定FGF5s基因在细胞基因组中的整合及表达情况。结果表明,成功克隆了陕北白绒山羊FGF5s基因并构建了PB-EGFP-FGF5s真核表达载体;PCR结果显示,FGF5s已整合到细胞基因组中;RT-PCR结果表明,该基因在转录水平上表达。另外,转染试验表明PB转座子可在绒山羊胎儿成纤维细胞中发生高效转座。本研究为制备绒山羊转基因细胞系提供了一种高效的方法,并为下一步通过核移植方法获得转基因绒山羊奠定了基础。 展开更多

关键词 陕北白绒山羊 fgf5s PIGGYBAC转座子 稳定转染

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靶除内蒙古白绒山羊FGF5基因对其毛被性状的影响 被引量：5

14

作者 高原 阿力玛 +2 位作者 李璐 刘奕奕 周欢敏 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第1期61-65,共5页

本研究以内蒙古自治区生物制造重点实验室应用基因打靶技术和TALEN技术获得的靶除FGF5基因的内蒙古白绒山羊为材料,通过对其进行绒毛指标测定,探讨了基因打靶技术和TALEN技术靶除FGF5基因对绒山羊绒毛性状的影响,并在国内外首次将模糊... 本研究以内蒙古自治区生物制造重点实验室应用基因打靶技术和TALEN技术获得的靶除FGF5基因的内蒙古白绒山羊为材料,通过对其进行绒毛指标测定,探讨了基因打靶技术和TALEN技术靶除FGF5基因对绒山羊绒毛性状的影响,并在国内外首次将模糊数学的模糊综合评价方法运用于两种基因编辑技术的评价。结果表明与对照白绒山羊相比,基因打靶技术获得靶除FGF5基因绒山羊的绒长度明显降低、细度明显变粗和毛长度明显增加;TALEN技术获得靶除FGF5基因绒山羊的绒长度明显增加。模糊综合评价结果说明在2只不同敲除技术的绒山羊个体中,应用TALEN技术敲除的绒山羊和基因打靶技术敲除的绒山羊在毛被性能改善方面是有差异的。 展开更多

关键词 内蒙古白绒山羊 基因打靶技术 TALEN技术 fgf5 毛被性状 模糊综合评价

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MT和FGF5调控辽宁绒山羊绒毛生长相关LncRNA的筛选及鉴定 被引量：2

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作者 金梅 张丽娟 +1 位作者 曹倩 郭鑫英 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期738-754,共17页

【目的】筛选出辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞中与绒毛生长相关的LncRNA,为绒毛生长相关LncRNA的功能及机制研究提供基础性数据。【方法】提取MT和FGF5处理的辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞总RNA,通过样品总RNA电泳检测、测序数据质量评估、Mapp... 【目的】筛选出辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞中与绒毛生长相关的LncRNA,为绒毛生长相关LncRNA的功能及机制研究提供基础性数据。【方法】提取MT和FGF5处理的辽宁绒山羊皮肤成纤维细胞总RNA,通过样品总RNA电泳检测、测序数据质量评估、Mapping比对、样品间相关性检查对提取的总RNA进行质量检测。筛选出差异表达的LncRNA并预测其靶基因,通过GO和KEGG富集分析,筛选出与绒毛生长相关的LncRNA,并通过Real-time PCR对目标LncRNA进行表达验证。【结果】(1)样品总RNA质量检测结果显示:RNA完整性良好、GC含量相对较高,序列较稳定、样品间表达水平相关性均较高、符合测序要求。(2)差异表达LncRNA的筛选结果显示:1.0g·L^(-1) 24h组差异表达LncRNA有32个,其中4个表达上调,28个表达下调;0.2g·L^(-1) 24h组差异表达LncRNA有10个,其中4个表达上调,6个表达下调;0.2g·L^(-1) 72h组差异表达LncRNA有113个,其中5个表达上调,108个表达下调。10^(-4) g·L^(-1) 24 h组差异表达LncRNA有164个,其中有70个上调,94个下调;10^(-4)g·L^(-1) 72 h差异表达LncRNA有189个,其中有78个上调,111个下调;10^(-6) g·L^(-1) 24 h组差异表达的LncRNA有123个,其中有27个上调,96个下调。(3)靶基因GO富集分析结果显示:1.0g·L^(-1) 24h组差异表达LncRNA靶基因富集在GO的negative regulation of transcription from RNA polymerase Ⅱ promoter;0.2g·L^(-1) 24h组无差异表达LncRNA靶基因富集的GO term;0.2g·L^(-1) 72h组差异表达LncRNA靶基因富集在GO的cellular metabolicprocess biological_process,binding molecular_function,FGF5处理组中只有10^(-4) g·L^(-1) 72 h组差异表达LncRNA靶基因富集在cell cellular_component、cell part cellular_component、intracellular cellular_component、binding molecular_function等6个条目。(4)靶基因KEGG富集分析结果显示:1.0g·L^(-1) 24h组差异表达LncRNA靶基因富集在Steroid biosynthesis pathway;0.2g·L^(-1) 24h组无差异表达LncRNA靶基因富集的Pathway term;0.2g·L^(-1) 72h组差异表达LncRNA靶基因富集在Cell cycle,DNA replication,Steroid biosynthesis,TNF,Nod-likereceptor,NF-kappa B等信号通路,其中TNF和NF-kappa B信号通路与绒毛生长相关。FGF5处理组中,10^(-4) g·L^(-1)72 h组差异表达的LncRNA靶基因显著富集到Fanconi anemia pathway,Huntington's disease,Metabolic pathway,Aminoacyl-tRNA biosynthesis等9个pathway term,其中Metabolic信号通路与绒毛生长相关;10^(-4) g·L^(-1) 24 h组差异表达的LncRNA靶基因无显著富集的pathway term;10^(-6) g·L^(-1) 24 h组差异表达的LncRNA靶基因只富集在Taste transduction pathway。(5)NF-κB和TNF两个信号通路中富集的靶基因TNFα、TNFAIP3(A20)、NFKBIA(IkBα)、NFKB2、IL8所对应的LncRNA有2个,分别为(Gene ID):XLOC_005914;XLOC_018763;Metabolic信号通路中靶基因所对应的LncRNA有4个,分别为(Gene ID):XLOC_011424、XLOC_009522、XLOC_009063、XLOC_01115。Real-time PCR结果显示:LncRNA XLOC_011424、XLOC_011157、LncRNA XLOC_005914和XLOC_018763与高通量测序结果一致。【结论】LncRNA XLOC_011424、XLOC_011157、LncRNA XLOC_005914和XLOC_018763可能通过调控与绒毛生长相关的NF-κB、TNF或Metabolic信号通路,提高羊绒密度和长度,进而提高辽宁绒山羊绒产量及品质。 展开更多

关键词 辽宁绒山羊 褪黑激素 fgf5 LncRNA RNA-SEQ 信号通路

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内蒙古白绒山羊FGF5基因克隆及其靶向shRNA表达载体的构建和鉴定 被引量：1

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作者 鲍文蕾 其布日 +4 位作者 姚睿原 郭志新 朝格图 王彦凤 王志钢 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1793-1798,共6页

旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pR... 旨在构建内蒙古白绒山羊成纤维细胞生长因子Ⅴ(Fibroblast growth factor 5,FGF5)基因shRNA真核表达载体(pRNAT-shRNA)。以内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞总RNA为模板,PCR扩增FGF5基因。设计并合成3条FGF5基因的靶向shRNA序列,分别插入pRNAT-U6.1/Neo载体中,构建重组干扰质粒载体pRNATshRNA1、pRNAT-shRNA2和pRNAT-shRNA3,用脂质体LipofectamineTM2000将各重组干扰质粒转染内蒙古白绒山羊胎儿成纤维细胞,Real time PCR检测FGF5mRNA表达量。结果表明:克隆获得813bp的目的基因,包含了完整的ORF,编码270个氨基酸。核苷酸序列及推导的氨基酸序列与绵羊FGF5基因(NM_001246263.1)及氨基酸序列同源性均为99%。FGF5基因shRNA重组质粒经测序鉴定证明构建成功。重组表达质粒转染绒山羊胎儿成纤维细胞48h后可见绿色荧光表达;pRNAT-shRNA1组、pRNAT-shRNA2组和pRNAT-shRNA3组FGF5的mRNA表达水平均低于干扰空载体对照组(P<0.01),pRNAT-shRNA2对FGF5的表达具有最佳的抑制效应。综上表明,成功构建pRNAT-U6.1/Neo-FGF5表达载体,为探讨FGF5在毛囊生长中的作用奠定了基础。 展开更多

关键词 内蒙古白绒山羊 成纤维细胞生长因子Ⅴ(fgf5) 短发夹RNA 荧光定量PCR 载体构建

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5个家兔群体FGF5基因的遗传多样性分析 被引量：5

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作者 冯凯 吴添文 +3 位作者 张蕾 何孟颉 高波 吴信生 《中国草食动物》 2012年第3期5-8,共4页

设计5对特异性引物,采用PCR-RFLP法及PCR-SSCP法对5个家兔群体FGF5基因CDS序列进行分析。结果显示：FGF5-1A发现了2个等位基因、3种基因型,在该引物285~287位点存在TCT缺失;FGF5-3B发现了2个等位基因、2种基因型,在该引物58位点处存在T... 设计5对特异性引物,采用PCR-RFLP法及PCR-SSCP法对5个家兔群体FGF5基因CDS序列进行分析。结果显示：FGF5-1A发现了2个等位基因、3种基因型,在该引物285~287位点存在TCT缺失;FGF5-3B发现了2个等位基因、2种基因型,在该引物58位点处存在T→C突变。所有的群体均处于哈代-温伯格平衡,且在所选的5个家兔群体的FGF5-1A中,A1等位基因均为优势等位基因,獭兔群体表现为中度多态,肉兔群体表现为低度多态,毛兔未检测到多态。皖系长毛兔与其他家兔群体之间分布均差异极显著（P〈0.01）,九疑山兔与海狸色獭兔之间分布差异显著（P〈0.05）。该研究为FGF5基因是否能作为家兔毛质性状选育工作的分子标记提供了一定参考。 展开更多

关键词 家兔 fgf5基因 遗传多样性

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CRISPR/Cas9介导的MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊粪便菌群分析 被引量：1

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作者 李陇平 杨吉 +2 位作者 朱海鲸 黄帅 屈雷 《中国农学通报》 2018年第14期134-139,共6页

为了从绒山羊粪便微生物群落变化的角度对MSTN/FGF5基因编辑陕北白羊绒山的自身健康和环境安全性进行研究,利用6种不同培养基分别对MSTN/FGF5基因编辑和野生型陕北白绒山羊粪便中的微生物进行培养、计数,并做菌群结构的显著性检验分析... 为了从绒山羊粪便微生物群落变化的角度对MSTN/FGF5基因编辑陕北白羊绒山的自身健康和环境安全性进行研究,利用6种不同培养基分别对MSTN/FGF5基因编辑和野生型陕北白绒山羊粪便中的微生物进行培养、计数,并做菌群结构的显著性检验分析。结果表明:FGF5/MSTN基因编辑和野生型陕北白绒山羊F0代和F1代公羊和母羊新鲜粪样经LB琼脂、伊红美蓝琼脂、TPY琼脂、胆硫乳琼脂、肠球菌琼脂和甘露醇盐琼脂培养后微生物计数分别为,F0代:公羊6.35±0.68,5.89±0.25;5.32±0.10,5.27±0.34;6.64±0.57,6.71±0.35;5.03±0.53,5.32±0.14;4.12±0.13,4.15±0.21;5.34±0.18,5.25±0.25;母羊6.62±0.45,6.64±0.31;4.80±0.51,4.75±0.45;7.20±0.30,7.15±0.55;4.30±0.52,4.42±0.62;5.83±0.51,5.73±0.86;6.24±0.28,6.24±0.21。F1代:公羊6.92±0.12,7.08±0.04;4.02±0.64,3.99±0.51;6.32±0.15,6.25±0.30;5.21±0.28,5.17±0.20;3.66±0.50,3.88±0.67;4.06±0.50,3.97±0.46;母羊7.12±0.24,6.96±0.19;4.15±0.19,4.25±0.24;6.45±0.30,6.56±0.45;4.97±0.42,4.87±0.38;4.04±0.96,3.96±0.57;4.10±0.28,3.85±0.37。F0和F1代MSTN/FGF5基因编辑陕北白绒山羊与野生型陕北白绒山羊粪便中菌群结构之间不存在显著性差异(P>0.05)。本研究为FGF5/MSTN基因编辑陕北白绒山羊的安全性评价研究提供了试验数据和研究基础。 展开更多

关键词 MSTN/fgf5基因 基因编辑 陕北白绒山羊 粪便菌群结构 生物安全

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水貂FGF5基因多态性及其与毛长性状的关联分析 被引量：1

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作者 刘琳玲 宋兴超 +4 位作者 丛波 刘宗岳 宋姗姗 杨福合 王桂武 《特产研究》 2020年第5期45-49,共5页

本研究旨在检测水貂成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因多态性,解析该基因变异位点与水貂毛长性状的相关性。首先对30只美国短毛黑水貂的FGF5基因部分序列进行了扩增和测序;使用DNAMAN软件分析发现,FGF5基因内含... 本研究旨在检测水貂成纤维细胞生长因子5(fibroblast growth factor 5,FGF5)基因多态性,解析该基因变异位点与水貂毛长性状的相关性。首先对30只美国短毛黑水貂的FGF5基因部分序列进行了扩增和测序;使用DNAMAN软件分析发现,FGF5基因内含子1中T376C位点存在多态性位点;通过在线酶切软件NEBcutter V2.0分析表明,Taq I内切酶可用于该SNP位点基因分型。以美国短毛黑水貂和丹麦咖啡水貂共计252个血液样本的基因组DNA作为模板,采用PCR-RFLP技术对252只美国短毛黑水貂和丹麦咖啡水貂FGF5基因T376C位点进行了基因分型,并将该位点与水貂毛长性状进行关联分析。结果表明:PCR扩增片段在376位点存在突变,该位点存在2个等位基因T和C,形成TT、TC和CC 3种基因型,该变异位点在美国短毛黑水貂群体中为中度多态(0.25<PIC<0.05),而在丹麦咖啡水貂群体中表现为高度多态(PIC>0.25);χ^2检验结果显示,T376C位点在美国短毛黑水貂群体处于Hardy-Weinberg平衡状态,在丹麦咖啡水貂群体显著偏离Hardy-Weinberg平衡状态;关联分析表明,FGF5基因T376C位点与水貂毛长性状极显著相关(P<0.0001)。研究结果提示,FGF5基因T376C位点可能是影响水貂毛长性状的主控位点,可作为水貂毛长性状潜在的分子遗传标记。 展开更多

关键词 水貂 fgf5基因 毛长性状 PCR-RFLP

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獭兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因的多态性研究 被引量：1

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作者 刘健 马义涛 +2 位作者 潘俊龙 翁巧琴 张金枝 《浙江畜牧兽医》 2016年第2期4-7,共4页

随机选择5月龄左右獭兔50只。采用直接测序方法检测獭兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因第4个外显子的基因多态性;并对獭兔毛皮性状的相关数据进行方差分析和多重比较;将獭兔CDS编码区序列同其他物种进行比对。结果发现,所选獭兔群中,未... 随机选择5月龄左右獭兔50只。采用直接测序方法检测獭兔成纤维细胞生长因子5(FGF5)基因第4个外显子的基因多态性;并对獭兔毛皮性状的相关数据进行方差分析和多重比较;将獭兔CDS编码区序列同其他物种进行比对。结果发现,所选獭兔群中,未发现碱基突变位点,在所有的个体中,仅发现一种单倍体型;獭兔的主要毛皮性状差异不显著(P>0.05);獭兔CDS序列同其他物种相比差异不大。 展开更多

关键词 fgf5基因 多态性分析 毛皮性状 獭兔

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