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肿瘤源外泌体miR-3173-5p靶向抑制FBXW11促进CAFs活化调控NSCLC进展的机制研究
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作者 任瑾卓 张华 吴海永 《现代检验医学杂志》 2025年第4期67-72,78,共7页
目的研究肿瘤源外泌体miR-3173-5p促进肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、凋亡的潜在作用机制。方法提取NSCLC细胞A549的外泌体(Exo),透射电镜观察Exo形态,Western blot法检测Exo标志蛋白表达。实时... 目的研究肿瘤源外泌体miR-3173-5p促进肿瘤相关成纤维细胞(CAFs)活化调控非小细胞肺癌(NSCLC)细胞增殖、侵袭、凋亡的潜在作用机制。方法提取NSCLC细胞A549的外泌体(Exo),透射电镜观察Exo形态,Western blot法检测Exo标志蛋白表达。实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-3173-5p在A549细胞和Exo中的表达。利用Starbase数据库预测miR-3173-5p与F-box/WD-40结构域蛋白11(FBXW11)的结合,通过荧光素酶报告基因分析进行验证。采用Exo与Exo抑制剂GW4869或NC inhibitor/mimic或miR-3173-5p inhibitor/mimic和(或)FBXW11过表达/空载体共处理人肺成纤维细胞系(MRC-5),分别设置NC组、Exo组、Exo+GW4869组、Exo-NC inhibitor组、Exo-miR-3173-5p inhibitor组、Exo-NC mimic组、Exo-miR-3173-5p mimic组、Exo-miR-3173-5p mimic+Vector组及ExomiR-3173-5p mimic+FBXW11组。通过Western blot检测各组细胞中CAFs标志蛋白[基质金属蛋白酶9(MMP-9)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、趋化因子12(CXCL12)、纤维连接蛋白(Fibronectin)、波形蛋白(Vimentin)、白细胞介素1β(IL-1β)、白细胞介素6(IL-6)和白细胞介素8(IL-8)]水平,分析外泌体miR-3173-5p及FBXW11表达对CAFs活化的影响。分离Exo及Exo-miR-3173-5p mimic,Exo-FBXW11孵育MRC-5细胞的培养上清液作为条件培养液(CM),培养A549细胞,分别设置NC-CM组、Exo-CM组、Exo-miR-3173-5p mimic-CM组及Exo-FBXW11-CM组。采用MTT法、Transwell实验及流式细胞术分别检测CAFs活化对NSCLC细胞增殖、侵袭和凋亡的影响。结果透射电镜显示,NSCLC细胞来源外泌体囊泡直径30~100 nm;Western blot检测外泌体标记蛋白均呈阳性。NSCLC来源外泌体中miR-3173-5p(33.45±3.16)表达显著高于肿瘤细胞(1.01±0.07),差异具有统计学意义(t=1.263,P<0.001)。miR-3173-5p靶向结合FBXW11并抑制其表达。与NC组相比,Exo组细胞中CAFs标志蛋白水平均显著升高(t=12.214~24.908),Exo+GW4869组CAFs标志蛋白表达均较Exo组显著抑制(t=13.160~25.143),差异具有统计学意义(均P<0.01)。与Exo组相比,miR-3173-5p inhibitor可抑制Exo诱导的CAFs标志蛋白表达(t=11.059~21.094),miR-3173-5p mimic则促进CAFs标志蛋白表达(t=12.943~18.671),差异具有统计学意义(均P<0.01)。过表达FBXW11能够逆转miR-3173-5p mimic对CAFs活化的诱导作用。与NC-CM组相比,Exo-CM组A549细胞增殖活力(168.57%±8.14%vs 100.18%±7.26%)、侵袭率(49.69%±7.17%vs 38.52%±3.18%)能力明显增强,细胞凋亡率(3.15%±0.43%vs 6.03%±0.61%)明显抑制(t=10.207,2.359,3.001),miR-3173-5p mimic可增强Exo-CM对A549细胞增殖、侵袭的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用(t=9.399,3.438,3.208),过表达FBXW11可拮抗ExoCM对A549细胞增殖、侵袭的促进作用和对细胞凋亡的抑制作用(t=18.868,7.070,9.813),差异具有统计学意义(均P<0.05)。结论肿瘤源外泌体miR-3173-5p通过靶向抑制FBXW11表达促进CAFs活化,进一步促进NSCLC细胞增殖和侵袭,抑制细胞凋亡,调控NSCLC的发生发展。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 外泌体 miR-3173-5p F-box/WD-40结构域蛋白11 癌相关成纤维细胞
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DNA methylation and alternative splicing modulate FBXW11 gene expression in Holstein bull testis and are correlated with sperm quality 被引量:1
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作者 YONG LIU ZHIHUA JU +11 位作者 QIANG JIANG WENHAO LIU CHUNHONG YANG YARAN ZHANG XIUGE WANG YAPING GAO XIAOCHAO WEI YAN SUN JINPENG WANG MINGHAI HOU LING YANG JINMING HUANG 《BIOCELL》 SCIE 2021年第1期79-87,共9页
F-box and WD-40 domain protein 11(FBXW11)is an important component of the E3 ubiquitin-ligase enzyme that plays a key role in the ubiquitin-dependent regulation of spermatogenesis.In our previous research,the mRNA exp... F-box and WD-40 domain protein 11(FBXW11)is an important component of the E3 ubiquitin-ligase enzyme that plays a key role in the ubiquitin-dependent regulation of spermatogenesis.In our previous research,the mRNA expression of FBXW11 in bull sperm with high motility is significantly higher than that with low motility.In the present study,the protein expression levels of FBXW11 in bull testicular tissues with low-performance sperm quality groups were significantly higher than those in normal performance groups.The immunohistochemistry result demonstrated that FBXW11 protein was located in the periphery of Leydig cells and seminiferous tubules.Three splice variants of the FBXW11 gene,namely,FBXW11-tv1,FBXW11-tv2,and FBXW11-tv3,were identified in testicular tissues.The splicing patterns of the three variants are exon skipping.The transcript FBXW11-tv2 expressions were the highest in each sample.The low-performance groups displayed higher FBXW11-tv1 and FBXW11-tv2 transcript expressions than the normal performance groups.Two CpG islands were located within the 5’UTR and exon 1-2 region of the FBXW11 gene.Bisulfite sequencing PCR results demonstrated that the methylation levels of 11 methylation sites in the CpG island 2 from−99 to−43 in the normal performance groups were significantly lower than those in the low-performance groups.Pearson correlation analysis suggested that the CpG island 2 methylation level was negatively correlated with sperm motility and the transcript FBXW11-tv2 expression level.Our data revealed that alternative splicing and DNA methylation jointly regulated FBXW11 gene expression and were correlated with sperm quality traits during spermatogenesis in Holsteins. 展开更多
关键词 fbxw11 Alternative splicing DNA methylation BULL Sperm quality traits
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F框/WD-40域蛋白11对三阴性乳腺癌细胞增殖、迁移的影响
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作者 赵娴 刘相萍 +4 位作者 宫明凯 王硕 隋爱华 韩亚斐 王海波 《中华内分泌外科杂志(中英文)》 CAS 2024年第2期184-189,共6页
视频导读乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,迄今为止,探索三阴性乳腺癌(TNBC)的靶向治疗始终是医学研究的热点。TNBC是一种特殊分子亚型的乳腺癌类型,因其侵袭性强、转移复发风险高且缺乏有效治疗靶点,导致患者预后差,严重威胁女性健康,是... 视频导读乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,迄今为止,探索三阴性乳腺癌(TNBC)的靶向治疗始终是医学研究的热点。TNBC是一种特殊分子亚型的乳腺癌类型,因其侵袭性强、转移复发风险高且缺乏有效治疗靶点,导致患者预后差,严重威胁女性健康,是临床亟待解决的治疗难题。本文研究FBXW11对TNBC生物学功能活性的影响,将进一步探讨FBXW11影响TNBC功能潜在作用机制,以便为TNBC的靶向治疗提供新的理论依据。 展开更多
关键词 乳腺癌 三阴性乳腺癌 F框/WD-40域蛋白11 增殖 迁移
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