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Akt1上调FBXO6表达对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响
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作者 高彩月 曹丹丹 +4 位作者 倪思琦 张婧 王迎伟 邱文 赵晨卉 《南京医科大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第6期777-785,共9页
目的:检测胶质瘤组织和细胞中F盒蛋白(F-box protein,FBXO)6的表达及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,并探究FBXO6表达的上游调控机制。方法:使用CGGA数据库分析胶质瘤患者肿瘤组织中FBXO6的表达及其与患者预后的相关性。行RT-PCR和West... 目的:检测胶质瘤组织和细胞中F盒蛋白(F-box protein,FBXO)6的表达及其对胶质瘤细胞增殖和侵袭的影响,并探究FBXO6表达的上游调控机制。方法:使用CGGA数据库分析胶质瘤患者肿瘤组织中FBXO6的表达及其与患者预后的相关性。行RT-PCR和Western blot检查胶质瘤细胞系(U251、U373和U87)中FBXO6的表达水平,筛选出FBXO6蛋白表达量最高的U87细胞。CCK-8和Transwell实验检测过表达和沉默FBXO6对U87细胞增殖和侵袭的影响。使用U0126(ERK1/2抑制剂)、SP600125(JNK抑制剂)和Perifosine(Akt1抑制剂)处理U87细胞,Western blot检查ERK1/2、JNK、Akt1的表达和磷酸化水平,之后行RT-PCR和Western blot检测FBXO6的表达变化,CCK-8和Transwell实验检测U87细胞增殖和侵袭能力。使U87细胞过表达FBXO6并给予Perifosine处理,进行RT-PCR、Western blot、CCK-8和Transwell实验,检测FBXO6表达、细胞增殖和侵袭能力。结果:胶质瘤患者癌组织中FBXO6高表达,且表达量与恶性程度相关,并与患者不良预后密切相关。3种胶质瘤细胞系U251、U373和U87均表达FBXO6,以U87细胞表达最为显著。过表达FBXO6基因后U87细胞的增殖和侵袭明显增强,而沉默FBXO6基因后U87细胞的增殖和侵袭明显减弱。Akt1抑制剂可显著下调U87细胞的FBXO6表达,而ERK1/2和JNK抑制剂对FBXO6的表达无明显影响。Akt1抑制剂可显著减弱U87细胞的增殖和侵袭,而过表达FBXO6可拮抗上述效应。结论:胶质瘤细胞中Akt1活化上调FBXO6基因的表达,促进细胞的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 胶质瘤 fbxo6 AKT1 增殖 侵袭
原文传递
FBXO6基因真核表达载体的构建及其在HEK293T细胞中的表达
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作者 高媛 冯菁华 +3 位作者 陈玕 彭翼飞 郑文岭 马文丽 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第9期931-933,937,共4页
目的构建F盒蛋白6(FBXO6)基因真核表达载体。方法采用PCR方法合成含有EcoRⅠ和BglⅡ双酶切位点的FBXO6 cDNA全长。分别构建载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6,采用菌落PCR、双酶切鉴定以及测序证实cDNA片段大小和序列正确。将载... 目的构建F盒蛋白6(FBXO6)基因真核表达载体。方法采用PCR方法合成含有EcoRⅠ和BglⅡ双酶切位点的FBXO6 cDNA全长。分别构建载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6,采用菌落PCR、双酶切鉴定以及测序证实cDNA片段大小和序列正确。将载体pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6分别转染HEK293T细胞,Western blot法检测FBXO6蛋白的表达。结果 pEGFP-C1-FBXO6和pEGFP-C1-anti-FBXO6包含大小、序列正确的FBXO6片段;FBXO6蛋白在转染pEGFP-C1-FBXO6的293T细胞中高表达;在转染pEGFP-C1-anti-FBXO6的HEK293T细胞中表达降低。结论成功构建FBXO6基因正义真核表达载体pEGFP-C1-FBXO6和反义真核表达载体pEGFP-C1-anti-FBXO6。 展开更多
关键词 fbxo6 真核表达载体
原文传递
FBXO6稳定表达肿瘤细胞系的构建及其亚细胞器定位
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作者 刘彬 徐含章 +2 位作者 崔佳毅 苏绪波 陈国强 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2014年第6期696-698,702,共4页
检测FBXO6在多种肿瘤细胞中的表达和定位情况并构建稳定表达FBXO6的肿瘤细胞株。运用RT-PCR方法,在人胚肾293T细胞以及9种不同来源的肿瘤细胞中,检测了FBXO6的表达情况。以载体质粒pBabe-3Flag-FBXO6-puro/pBabe-3Flag-con、包装质粒pCM... 检测FBXO6在多种肿瘤细胞中的表达和定位情况并构建稳定表达FBXO6的肿瘤细胞株。运用RT-PCR方法,在人胚肾293T细胞以及9种不同来源的肿瘤细胞中,检测了FBXO6的表达情况。以载体质粒pBabe-3Flag-FBXO6-puro/pBabe-3Flag-con、包装质粒pCMV-GAG-POL及包膜质粒pCMV-VSVG用Lipofectamine2000共转染包装细胞系293T,收集病毒颗粒感染A549细胞,经嘌呤霉素筛选稳定表达细胞株,Western blot鉴定FBXO6的表达。利用激光共聚焦荧光显微镜,采用间接免疫荧光方法,检测外源性FBXO6在A549中的亚细胞定位。在10种不同来源的细胞株中,FBXO6在A549细胞中的表达最高。成功筛选出嘌呤霉素抗性细胞系A549-Con与A549-3Flag-FBXO6。Western blot方法发现A549-3Flag-FBXO6细胞系稳定表达FBXO6蛋白。间接免疫荧光发现FBXO6与内质网tracker有共定位。FBXO6在肺癌A549细胞中高度表达,构建了稳定表达FBXO6的A549细胞系,部分FBXO6分布在内质网中。 展开更多
关键词 病理生理学 fbxo6 逆转录病毒载体 内质网 A549细胞
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