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禽腺病毒血清4型SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法的建立与应用 被引量：7
1
作者 卢清侠 金前跃 +4 位作者 冯丽丽 柴永笑 郭振华 邢广旭 张改平 《河南农业科学》 北大核心 2022年第12期131-138,共8页
为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保... 为建立禽腺病毒血清4型(Fowl adenovirus serotype 4,FAdV4)临床检测方法,根据GenBank中该病毒Hexon基因序列设计扩增引物,将扩增的Hexon基因连接至pEASY-Blunt载体,构建重组质粒pEASY-Blunt-Hexon,同时对Hexon基因进行分析,选取高度保守区域,设计荧光定量检测引物,建立FAdV4 SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。该方法扩增产物长度为95 bp,最低检测下限为7.1×102拷贝/μL,且与其他禽源病毒无交叉反应,批内和批间重复性试验变异系数均不超过2%,具有良好的特异性和重复性。将建立的检测方法应用于检测FAdV4在鸡肝癌细胞(Leghorn male hepatocellular cells,LMH)上的增殖特性,并与TCID50法测定的病毒滴度进行比较,结果显示,2种检测方法具有良好的相关性。综上,本研究建立的检测方法可用于FAdV4的临床早期快速检测。 展开更多
关键词 禽腺病毒血清4型 Hexon基因 荧光定量PCR 检测
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“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒疫苗的免疫效果评价
2
作者 冯嘉轩 李金斗 +6 位作者 丁佳欣 陈凯楠 陈铭桦 邵亚男 郭春红 邹映雪 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第7期1388-1394,共7页
为了评价“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)的免疫保护效果,本试验将其定量免疫至7日龄SPF雏鸡中,通过血凝抑制试验、ELISA和淋巴细胞增殖检测ND-AI-FAdV4 cVLPs诱导的体液及细胞免疫,并进行攻毒试验评价ND-AI-FAdV4 c... 为了评价“新流腺”三联嵌合型病毒样颗粒(ND-AI-FAdV4 cVLPs)的免疫保护效果,本试验将其定量免疫至7日龄SPF雏鸡中,通过血凝抑制试验、ELISA和淋巴细胞增殖检测ND-AI-FAdV4 cVLPs诱导的体液及细胞免疫,并进行攻毒试验评价ND-AI-FAdV4 cVLPs的攻毒保护能力。结果显示,ND-AI-FAdV4 cVLPs可诱导机体产生与NDV弱毒疫苗和AIV灭活疫苗相当的HI抗体效价及针对FAdV4 Fiber2蛋白的高水平特异性抗体,NDV、AIV和FAdV4灭活病毒的分别刺激可诱导ND-AI-FAdV4 cVLPs免疫组脾脏淋巴细胞发生活化及增殖;ND-AI-FAdV4 cVLPs免疫后可提供针对NDV强毒株NA-1株、AIV H9N2株及FAdV4强毒株攻击的有效保护,降低了病毒感染所造成的病理损伤,且缩短了体内病毒载量及体外排毒时间。本研究为ND-AI-FAdV4 cVLPs疫苗的应用奠定了基础,同时也为新城疫、禽流感和禽腺病毒病多联新型疫苗的研发提供了参考。 展开更多
关键词 ND-AI-fadv4 cVLPs 抗体效价监测 存活率 体内病毒载量 体外排毒时间
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山西中部4型禽腺病毒遗传进化及其分离毒株致病性分析 被引量：5
3
作者 刘璐 王晨 +5 位作者 张丹 高宇 程宇 谭世明 梁立滨 马海利 《山西农业科学》 2022年第4期591-597,共7页
为了解山西地区4型禽腺病毒(FAdV-4)的遗传进化情况及其致病性,为山西省FAdV-4的疫苗研发和防控策略制定提供理论依据,收集了山西中部地区太谷、祁县、介休、临汾、长治、交城、柳林等养鸡场11份疑似心包积水-肝炎综合征病鸡的肝脏组织... 为了解山西地区4型禽腺病毒(FAdV-4)的遗传进化情况及其致病性,为山西省FAdV-4的疫苗研发和防控策略制定提供理论依据,收集了山西中部地区太谷、祁县、介休、临汾、长治、交城、柳林等养鸡场11份疑似心包积水-肝炎综合征病鸡的肝脏组织样本,采用PCR方法进行FAdV-4检测,对阳性样品进行FAdV-4的Hexon和Fiber-2蛋白的全基因序列扩增,将处理后的阳性病料接种于鸡肝癌细胞(LMH)进行病毒分离和PCR鉴定,测定分离毒株的TCID50,研究病毒对SPF鸡胚和SPF鸡的致病性。结果表明,11份样品的FAdV-4检测均为阳性,经比对,11份样品中FAdV-4的Hexon和Fiber-2基因序列相同,与GenBank中不同FAdV分离株的同源性分别为67.7%~100%和43.2%~100%,其中,与GenBank中的基因C型FAdV-4毒株处于同一个分支,同源性分别为98.4%~100%和95.9%~100%,说明11份疑似样品均存在FAdV-4感染,且为同一毒株。分离获得的1株FAdV-4(命名为SX2020)可在LMH细胞中良好复制并产生明显的细胞病变,对SPF鸡胚及SPF鸡均有致病性,感染后出现FAdV-4典型病变,并且病毒可以在感染鸡体内持续向外排毒达21~28 d。 展开更多
关键词 4型禽腺病毒 分离与鉴定 遗传进化 致病性
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禽腺病毒4型hexon基因克隆与原核表达分析 被引量：1
4
作者 王许航 王林 +6 位作者 经美 陈萍 王金凤 孙继国 刘聚祥 王建昌 袁万哲 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2018年第7期29-32,共4页
应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体p QE1中,获得重组质粒p QE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0.... 应用PCR方法扩增禽腺病毒4型(Fowl adenovirus 4,FAd V-4) Hexon基因,将其克隆至原核表达载体p QE1中,获得重组质粒p QE1-hexon。将重组质粒经诱导表达后,通过SDS-PAGE对表达产物进行分析。结果,Hexon蛋白在25℃经诱导4 h、IPTG浓度为0. 8 mmol/L时可获得最大诱导表达量,表达蛋白的相对分子质量约为107 k D,主要以不溶性包涵体形式存在。纯化复性后,可得到浓度为5. 165 mg/m L及纯度为97%的Hexon蛋白。本研究获得的重组菌p QE1-hexon以及高纯度的Hexon蛋白,为进一步研究FAd V-4检测方法和新型疫苗奠定了基础。 展开更多
关键词 禽腺病毒4型 Hexon蛋白 原核表达
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