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携带FAT1-FAT2基因打靶载体构建及其在猪肾细胞的表达与功能鉴定
1
作者 林纯 汤飞 李紫聪 《广东农业科学》 CAS 2021年第8期116-123,共8页
【目的】ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)对人类具有重要的营养价值与医疗作用。随着生物技术的发展,通过转基因技术可实现哺乳动物体内自身合成多不饱和脂肪酸,进而改变猪肉中不饱和脂肪酸的含量和种类,对人类的营养健康具有积极意义。【方... 【目的】ω-3多不饱和脂肪酸(PUFAs)对人类具有重要的营养价值与医疗作用。随着生物技术的发展,通过转基因技术可实现哺乳动物体内自身合成多不饱和脂肪酸,进而改变猪肉中不饱和脂肪酸的含量和种类,对人类的营养健康具有积极意义。【方法】克隆猪体内缺乏的ω-3多不饱和脂肪酸脱氢酶基因FAT1和Δ-12脂肪酸去饱和酶的关键基因FAT2,构建携带FAT1-FAT2双基因的多位点打靶载体。该载体以猪rRNA基因间的内部转录间隔序列为靶位点;为提高定点整合效率,引入NEO、TK正负筛选系统进行双重选择;加入EGFP报告基因和Cre/Loxp系统,便于筛选阳性同源重组细胞克隆及后期删除筛选基因。将所构建的携带FAT1-FAT2双基因的打靶载体,通过脂质体介导瞬时转染猪肾细胞PK15。【结果】RT-PCR结果显示,FAT1-FAT2双基因在猪肾细胞PK15中实现表达;脂肪酸测定结果显示,ω-6 PUFAs、ω-3PUFAs在对照组PN1(转染对照质粒PN1)、转染试验组PF1(转染携带FAT1基因)、转染试验组PF1F2(转染携带FAT1-FAT2双基因)中的含量分别为7.9%、7.03%、3.92%和5.64%、7.01%、9.43%,差异均显著;ω-6/ω-3比例由对照组的1.4显著下降到试验组的0.42~1。【结论】构建携带FAT1-FAT2双基因的打靶载体转染猪肾细胞PK15可以表达产生FAT1-FAT2 mRNA,且可以显著提高转染细胞中ω-3 PUFAs的含量,为下一步生产转FAT1-FAT2双基因猪奠定基础。 展开更多
关键词 不饱和脂肪酸 fat1-fat2基因 打靶载体 脂肪酸
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虎杖苷通过调节G0S2和ATGL表达改善非酒精性脂肪肝病的研究
2
作者 盛鲁光 刘丹丹 +4 位作者 刘维斌 雷涛 陈清光 陆灏 徐碧林 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第10期1847-1856,共10页
目的本研究旨在探讨虎杖苷(PD)对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型及人肝癌细胞系G2(HepG2)细胞模型的影响,揭示其潜在分子机制。方法30只6周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为正常饮食组和高脂饮食组,后者建立NAFLD小... 目的本研究旨在探讨虎杖苷(PD)对高脂饮食诱导的非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)小鼠模型及人肝癌细胞系G2(HepG2)细胞模型的影响,揭示其潜在分子机制。方法30只6周龄雄性SPF级C57BL/6J小鼠,随机分为正常饮食组和高脂饮食组,后者建立NAFLD小鼠模型后进一步分为高脂饮食(HFD)组和虎杖苷治疗(PD)组。PD组灌胃给药PD 250 mg/(kg·d),为期10周,期间监测体质量并进行口服葡萄糖和胰岛素耐量测试。实验结束时,通过一系列实验评估PD对小鼠肝重、血脂、肝脏脂质积累及肝损伤标志物的影响。通过qRT-PCR和Western blot法检测G_(0)/G_(1)开关基因2(G0S2)和脂肪三酰甘油脂肪酶(ATGL)的表达,并通过免疫组织化学染色再次验证基因表达。细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法评估PD对HepG2细胞活性的影响,油红O染色观察脂质积累,通过qRT-PCR和Western blot法检测G0S2和ATGL的表达,并验证了G0S2被敲低后脂质积累和基因表达的改变。结果PD降低小鼠体质量、肝重及血清和肝组织中的天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)水平(P<0.05),减轻肝组织病理损伤,降低G0S2表达(P<0.05),增加ATGL表达(P<0.05)。在细胞层面,PD减少脂滴累积,改善脂质代谢,降低G0S2表达(P<0.05),增加ATGL表达(P<0.05)。即使在G0S2被敲低的细胞中,PD仍能促进脂肪分解(P<0.01)。结论PD通过调节G0S2和ATGL表达促进肝脂肪分解,减轻高脂饮食诱导的小鼠NAFLD模型的代谢紊乱和肝脏损伤,为NAFLD治疗提供新策略。 展开更多
关键词 虎杖苷 非酒精性脂肪肝病 C57BL/6J小鼠 HEPG2细胞 脂肪分解 G_(0)/G_(1)开关基因2 脂肪三酰甘油脂肪酶
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黄芪多糖对高糖高脂饮食模型大鼠肠道甜味受体通路的影响 被引量：10
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作者 王颖 陈思羽 杨泽民 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期64-68,共5页
目的:探讨黄芪多糖对高糖高脂饮食模型大鼠肠道甜味受体味觉受体第一家族成员2(T1R2)/味觉受体第一家族成员3(T1R3)通路的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、高糖高脂组和黄芪多糖组。高糖高脂饲料组和黄芪多糖组大鼠给予高糖高脂饲料喂... 目的:探讨黄芪多糖对高糖高脂饮食模型大鼠肠道甜味受体味觉受体第一家族成员2(T1R2)/味觉受体第一家族成员3(T1R3)通路的影响。方法:SD大鼠随机分为正常组、高糖高脂组和黄芪多糖组。高糖高脂饲料组和黄芪多糖组大鼠给予高糖高脂饲料喂养16周,期间黄芪多糖组大鼠每日给予0. 7 g·kg^(-1)的APS灌胃8周。采集大鼠血清测定空腹血糖,总胆固醇(TC),甘油三酯(TG),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量;采集大鼠肠道组织,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测甜味受体通路T1R2,T1R3,α-味导素(Gαgust)和顺时受体电位阳离子通道5(TRPM5)以及胰高血糖素原(PG) mRNA的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测T1R2,Gαgust和胰高血糖素样肽(GLP-1)蛋白表达水平。结果:与正常组比较,高糖高脂组大鼠血清TC,TG和LDL-C含量明显升高,HDL-C含量明显降低(P <0. 05);肠道甜味受体通路中的T1R2,Gαgust和PG mRNA表达水平明显降低(P <0. 05);与高糖高脂组比较,黄芪多糖组大鼠血清TC,TG,LDL-C含量明显降低,HDL-C含量明显升高(P <0. 05),肠道甜味受体通路分子T1R2,T1R3,Gαgust,TRPM5以及PG mRNA表达水平明显升高(P <0. 05),T1R2,Gαgust和GLP-1蛋白表达明显升高;与模型组比较,黄芪多糖组T1R3 mRNA表达及T1R2,Gαgust,GLP-1蛋白表达水平均明显降低(P <0. 05)。结论:黄芪多糖可改善高糖高脂饮食模型大鼠脂代谢紊乱和肠道甜味受体通路的损伤。 展开更多
关键词 高糖高脂饲料 甜味受体通路 黄芪多糖 胰高血糖素原 味觉受体第一家族成员2/味觉受体第一家族成员3通路
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