目的·检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated protein with death domain,FADD)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达水平,并探究FADD促进HNSCC细胞增殖的分子机制。方法·利用GEPIA ...目的·检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated protein with death domain,FADD)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达水平,并探究FADD促进HNSCC细胞增殖的分子机制。方法·利用GEPIA 2数据库分析肿瘤组织中FADD表达水平及其与预后的关系;通过对HNSCC组织进行免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC),探究FADD在正常、不典型增生和肿瘤组织中的表达水平变化;构建稳定低表达FADD的人HNSCC Fadu、HSC3细胞株,并通过蛋白印迹实验和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法进行验证;使用LiveCyte活细胞追踪系统、克隆形成、细胞活力检测等方法探究FADD对HNSCC细胞增殖水平的调控作用;使用免疫共沉淀串联质谱(co-immunoprecipitation mass spectrum,Co-IP/MS)鉴定与FADD发生相互作用的蛋白,并应用CRISPR/Cas9技术、LiveCyte活细胞追踪系统、蛋白印迹实验等方法对与FADD相互作用的蛋白进行进一步机制研究。结果·数据库分析显示FADD在头颈鳞癌中显著高表达,并与患者不良预后相关。免疫组化染色表明FADD在HNSCC患者正常组织、不典型增生及肿瘤组织中的表达水平呈现递增趋势。在HNSCC细胞中敲低FADD后,与对照组相比,细胞的增殖能力显著降低,形成克隆数减少。Co-IP/MS结果显示,FADD与CUT样同源盒1(CUT-like homeobox 1,CUX1)蛋白存在相互作用,敲低FADD后CUX1表达水平升高。同时,在HNSCC细胞中敲除CUX1能够显著促进肿瘤细胞增殖能力。敲除CUX1可部分逆转FADD低表达引起的增殖抑制。结论·FADD在HNSCC中具有显著促癌作用,并与不良预后相关。FADD可通过与CUX1发生相互作用降低其表达水平进一步调控肿瘤细胞的增殖能力。展开更多
目的:观察死亡受体(Fas)、Fas相关死亡结构域(Fas-associ ated death domain,FADD)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况,分析其表达差异及意义。方法:应用免疫组织化学SABC法对27例SCC组织的石蜡切片及10例正常皮肤组织的切片分别进...目的:观察死亡受体(Fas)、Fas相关死亡结构域(Fas-associ ated death domain,FADD)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况,分析其表达差异及意义。方法:应用免疫组织化学SABC法对27例SCC组织的石蜡切片及10例正常皮肤组织的切片分别进行Fas、FADD染色,在光学显微镜下观察并计数其阳性细胞,根据阳性细胞平均表达积分来判定。结果采用t检验和等级相关分析。结果:①Fas、FADD在10例正常皮肤组织中表达均为阳性,平均表达积分3.10±0.87、3.20±0.63;②Fas在27例SCC组织中的平均表达积分2.19±1.14,低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);FADD在27例SCC组织中的平均表达积分2.15±1.40,低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);③在27例SCC组织中,Fas、FADD蛋白表达程度与病理分级呈正相关,有统计学意义(P<0.05)。结论:①Fas和FADD共同的低表达,可能参与了皮肤SCC的发生发展;②Fas、FADD蛋白的异常表达程度与皮肤SCC的恶性程度有关,同时检测两个蛋白的表达情况,有助于判断皮肤SCC的病理分级,有可能作为反映鳞状细胞癌预后的指标。展开更多
Fas相关死亡功能域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是Fas/F asL系统信号转导通路中介导细胞凋亡的胞浆死亡信号蛋白。近年来对牛FADD研究逐渐深入,已成功克隆出牛FADD基因,并构建pAcGF-N1-bFADD融合蛋白表达载体等。通...Fas相关死亡功能域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是Fas/F asL系统信号转导通路中介导细胞凋亡的胞浆死亡信号蛋白。近年来对牛FADD研究逐渐深入,已成功克隆出牛FADD基因,并构建pAcGF-N1-bFADD融合蛋白表达载体等。通过对小鼠等模式生物的研究发现,FADD在细胞质内能以磷酸化形式存在并参与细胞增殖和有丝分裂等过程。除此之外,FADD蛋白在细胞周期进程、胚胎发育、炎症反应、肿瘤发生等生物学活动中具有一定作用。本文将从FADD基因分析、蛋白修饰及生物学功能入手,揭示FADD作为多功能蛋白对细胞增殖与凋亡平衡起到重要作用,是机体维持正常发育和活动的关键蛋白。为肉牛在育种和实践应用中,提高肉质和胴体性状提供候选基因。展开更多
目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角...目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。展开更多
文摘目的·检测Fas相关死亡结构域蛋白(Fas-associated protein with death domain,FADD)在头颈部鳞状细胞癌(head and neck squamous cell carcinoma,HNSCC)中的表达水平,并探究FADD促进HNSCC细胞增殖的分子机制。方法·利用GEPIA 2数据库分析肿瘤组织中FADD表达水平及其与预后的关系;通过对HNSCC组织进行免疫组织化学染色(immunohistochemistry staining,IHC),探究FADD在正常、不典型增生和肿瘤组织中的表达水平变化;构建稳定低表达FADD的人HNSCC Fadu、HSC3细胞株,并通过蛋白印迹实验和实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)方法进行验证;使用LiveCyte活细胞追踪系统、克隆形成、细胞活力检测等方法探究FADD对HNSCC细胞增殖水平的调控作用;使用免疫共沉淀串联质谱(co-immunoprecipitation mass spectrum,Co-IP/MS)鉴定与FADD发生相互作用的蛋白,并应用CRISPR/Cas9技术、LiveCyte活细胞追踪系统、蛋白印迹实验等方法对与FADD相互作用的蛋白进行进一步机制研究。结果·数据库分析显示FADD在头颈鳞癌中显著高表达,并与患者不良预后相关。免疫组化染色表明FADD在HNSCC患者正常组织、不典型增生及肿瘤组织中的表达水平呈现递增趋势。在HNSCC细胞中敲低FADD后,与对照组相比,细胞的增殖能力显著降低,形成克隆数减少。Co-IP/MS结果显示,FADD与CUT样同源盒1(CUT-like homeobox 1,CUX1)蛋白存在相互作用,敲低FADD后CUX1表达水平升高。同时,在HNSCC细胞中敲除CUX1能够显著促进肿瘤细胞增殖能力。敲除CUX1可部分逆转FADD低表达引起的增殖抑制。结论·FADD在HNSCC中具有显著促癌作用,并与不良预后相关。FADD可通过与CUX1发生相互作用降低其表达水平进一步调控肿瘤细胞的增殖能力。
文摘目的:观察死亡受体(Fas)、Fas相关死亡结构域(Fas-associ ated death domain,FADD)在皮肤鳞状细胞癌(SCC)组织中的表达情况,分析其表达差异及意义。方法:应用免疫组织化学SABC法对27例SCC组织的石蜡切片及10例正常皮肤组织的切片分别进行Fas、FADD染色,在光学显微镜下观察并计数其阳性细胞,根据阳性细胞平均表达积分来判定。结果采用t检验和等级相关分析。结果:①Fas、FADD在10例正常皮肤组织中表达均为阳性,平均表达积分3.10±0.87、3.20±0.63;②Fas在27例SCC组织中的平均表达积分2.19±1.14,低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);FADD在27例SCC组织中的平均表达积分2.15±1.40,低于正常对照组,差异有统计学意义(P<0.05);③在27例SCC组织中,Fas、FADD蛋白表达程度与病理分级呈正相关,有统计学意义(P<0.05)。结论:①Fas和FADD共同的低表达,可能参与了皮肤SCC的发生发展;②Fas、FADD蛋白的异常表达程度与皮肤SCC的恶性程度有关,同时检测两个蛋白的表达情况,有助于判断皮肤SCC的病理分级,有可能作为反映鳞状细胞癌预后的指标。
文摘Fas相关死亡功能域蛋白(Fas-associated death domain protein,FADD)是Fas/F asL系统信号转导通路中介导细胞凋亡的胞浆死亡信号蛋白。近年来对牛FADD研究逐渐深入,已成功克隆出牛FADD基因,并构建pAcGF-N1-bFADD融合蛋白表达载体等。通过对小鼠等模式生物的研究发现,FADD在细胞质内能以磷酸化形式存在并参与细胞增殖和有丝分裂等过程。除此之外,FADD蛋白在细胞周期进程、胚胎发育、炎症反应、肿瘤发生等生物学活动中具有一定作用。本文将从FADD基因分析、蛋白修饰及生物学功能入手,揭示FADD作为多功能蛋白对细胞增殖与凋亡平衡起到重要作用,是机体维持正常发育和活动的关键蛋白。为肉牛在育种和实践应用中,提高肉质和胴体性状提供候选基因。
文摘目的从凋亡相关分子Fas(CD95)、Fas相关死亡结构域(Fas associated protein with death domain,FADD)及半胱天冬酶-8(caspase-8)的角度,研究扇贝多肽(polypeptide from Chlamys farreri,PCF)抑制紫外线B(Ultraviolet B,UVB)诱导的人角质形成细胞株(immortalized human keratino,HaCaT)细胞凋亡的作用机制。方法实验设计为6组:对照组、UVB模型组、UVB+5.68mmol·L-1维生素C阳性对照组、UVB+5.69mmol·L-1PCF组、UVB+2.84mmol·L-1PCF组、UVB+1.42mmol·L-1PCF组。以正交实验设计确立UVB诱导的HaCaT细胞凋亡模型;琼脂糖凝胶电泳和荧光染色(Ho-echst33258)分析PCF对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;琼脂糖凝胶电泳分析caspase-8抑制剂(z-IETD-fmk)对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡的影响;逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcription-Polymerase Chain Reaction,RT-PCR)检测Fas(CD95)mRNA的表达;蛋白质印迹法检测FADD及caspase-8蛋白的表达。结果PCF能明显抑制UVB引起的HaCaT细胞凋亡;z-IETD-fmk对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有明显抑制作用;1.42～5.69mmol·L-1内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的Fas,FADD的表达增加及caspase-8的活化。结论PCF可剂量依赖性抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas,FADD的表达及caspase-8的活化有关。
