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题名兔抗FAM50B多克隆抗体的制备与应用
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作者
时冬玉
邱雅萱
孟祥瑞
邢俊俏
赵雪
张熙琪
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机构
江汉大学生命科学学院
江汉大学医学部
武汉生物医学研究院
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出处
《湖北中医药大学学报》
2024年第5期45-49,共5页
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基金
国家重点研发计划项目(项目编号:2020YFA0907400)
国家自然科学基金项目(项目编号:32170702)。
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文摘
目的制备兔抗FAM50B多克隆抗体并探究FAM50B功能应用。方法运用GEPIA在线分析FAM50B在7种癌症中的表达和预后情况;利用DNA重组技术构建pGEX-6P-1-FAM50B原核表达质粒,并转入至大肠杆菌BL21中,用不同浓度IPTG诱导表达,利用GST纯化柱纯化FAM50B融合蛋白。收集纯化的目的蛋白用于新西兰兔免疫实验。Western Blot检测自制FAM50B多克隆抗体特异性,免疫荧光检测小鼠组织中FAM50B的定位及表达。结果FAM50B在7种癌症中表达异常,且其表达与LGG的不良预后有关;成功构建pGEX-6P-1-FAM50B原核表达质粒;在16℃,经0.3 mM IPTG诱导16 h,FAM50B融合蛋白表达量较高,其大小约为62 kDa;经Western Blot和免疫荧光检测显示,自制抗体特异性好,FAM50B在睾丸中特异性高表达,且定位于细胞核中。结论制备的FAM50B抗体血清特异性好,效价高,可用于Western Blot和免疫荧光,为进一步深入研究FAM50B的功能奠定了基础。
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关键词
fam50b
免抗
原核表达
蛋白纯化
生物信息学分析
抗体制备与应用
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Keywords
fam50b
Rabbit antibody
Prokaryotic expression
Protein purification
Bioinformatics analysis
Antibody preparation and application
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分类号
R285
[医药卫生—中药学]
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