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FAM50A基因敲低介导Caspase 3/PARP凋亡信号通路抑制结直肠癌细胞恶性生物学行为
1
作者 孟静 张东东 +3 位作者 韩曦 曲雪莹 宋汉君 张鹏霞 《中国癌症防治杂志》 2025年第2期172-180,共9页
目的 探讨50序列相似的家庭成员A(family with sequence similarity 50 member A, FAM50A)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其分子调控机制。方法 通过TCGA和GTEx数据库分析FAM50A在泛癌及CRC中的表达... 目的 探讨50序列相似的家庭成员A(family with sequence similarity 50 member A, FAM50A)对结直肠癌(colorectal cancer, CRC)细胞增殖、迁移和凋亡的影响及其分子调控机制。方法 通过TCGA和GTEx数据库分析FAM50A在泛癌及CRC中的表达特征及临床意义。采用Western blot检测5对CRC及其癌旁正常组织标本以及5种CRC细胞系(LOVO、RKO、HCT116、SK-CO-1和SNU175)的FAM50A蛋白表达情况。构建FAM50A稳定敲低的HCT116和RKO细胞株,通过CCK-8、Transwell、划痕实验及裸鼠移植瘤模型检测其对细胞增殖、迁移和体内成瘤能力的影响。采用流式细胞术检测细胞凋亡和周期分布。Western blot检测凋亡相关蛋白的表达变化。结果 生物信息学分析显示,FAM50A在肺腺癌、结肠腺癌等16种癌症中均高表达(均P<0.05);CRC组织中FAM50A mRNA表达水平较正常组织升高(P<0.001),且高表达患者预后更差;结直肠腺癌患者的FAM50A表达高于黏液腺癌患者(P<0.001)。临床样本分析也显示CRC组织中FAM50A蛋白表达水平高于癌旁正常组织(P<0.001)。功能实验结果显示,敲低FAM50A可抑制HCT116和RKO细胞增殖、迁移和裸鼠移植瘤生长(均P<0.01),同时诱导细胞凋亡(均P<0.001)。Western blot结果显示,敲低FAM50A显著上调c-Caspase 3、c-Caspase 8、c-Caspase 9和c-PARP蛋白表达水平(均P<0.05)。结论FAM50A在CRC中高表达且与患者预后不良相关,靶向敲低FAM50A通过激活Caspase 3/PARP凋亡信号通路,抑制CRC细胞增殖和迁移。FAM50A可能是CRC的潜在治疗靶点。 展开更多
关键词 结直肠癌 fam50a 细胞增殖 细胞迁移 细胞凋亡
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基于多数据库分析FAM50A在肝细胞癌中的临床意义及生物学功能 被引量：1
2
作者 熊竹 马丹丹 张智勇 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第1期65-71,共7页
目的分析50序列相似的家庭成员A(FAM50A)在肝细胞癌(HCC)中的临床意义及生物学功能,并探索其在HCC发生发展中的作用。方法分别采用Real-time PCR和Western blot检测FAM50A在45例HCC组织及配对癌旁组织中的表达水平。采用HPA数据库分析FA... 目的分析50序列相似的家庭成员A(FAM50A)在肝细胞癌(HCC)中的临床意义及生物学功能,并探索其在HCC发生发展中的作用。方法分别采用Real-time PCR和Western blot检测FAM50A在45例HCC组织及配对癌旁组织中的表达水平。采用HPA数据库分析FAM50A的表达及定位。Oncomine数据库和GEPIA数据库分析FAM50A在HCC组织及正常肝组织中的表达差异。从癌症基因图谱数据库获取HCC临床病例资料,统计分析FAM50A表达量与HCC患者临床病理特征的关系。Kaplan Meier Plotter数据库分析FAM50A表达水平与HCC患者预后的关系,MethHC数据库分析FAM50A启动子区甲基化水平,String数据库分析FAM50A的蛋白相互作用网络,基因集富集分析(GSEA)数据库预测FAM50A在HCC中调控的可能信号通路。结果正常组织中,FAM50A mRNA在骨骼肌组织中表达量最高,肝脏组织居第37位。肿瘤组织中,其在卵巢癌组织中表达量最高,在HCC中表达量居第9位。FAM50A在正常肝组织中主要定位在细胞质、细胞膜及细胞核,在HCC组织中定位在细胞核。Real-time PCR检测结果显示FAM50A在HCC组织中的mRNA表达量高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.001)。Western blot显示FAM50A蛋白在HCC组织中的表达高于癌旁组织,差异有统计学意义(P<0.05)。Oncomine及GEPIA数据结果均显示FAM50A在HCC组织中的mRNA表达量高于正常肝组织,差异有统计学意义(P<0.05)。FAM50A基因mRNA表达量与HCC患者的性别(P=0.006)、肝硬化(P=0.001)、脉管癌栓(P=0.010)相关;与年龄、甲胎蛋白水平、肿瘤大小、分化程度、病理分期及是否远处转移无关(P>0.05)。与FAM50A低表达组患者相比,FAM50A高表达组患者总体死亡率较高、预后较差,差异有统计学意义(P<0.000 1),表现为癌基因特性。与正常肝组织相比,HCC组织FAM50A启动子区甲基化水平降低,差异有统计学意义(P<0.005)。与FAM50A相互作用的蛋白有SF3B3、ATP6AP1、NSFL1C等。FAM50A mRNA高表达样本富集到MAPK信号通路、Wnt信号通路、Notch信号通路等相关基因集(P<0.05)。结论 FAM50A在HCC中高表达,且FAM50A表达水平与HCC恶性程度及不良预后相关,可能作为癌基因在HCC中发挥作用。FAM50A有望成为HCC诊断及预后评估的新靶点。 展开更多
关键词 fam50a 肝癌 表达 临床意义 数据库 功能
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兔抗FAM50B多克隆抗体的制备与应用
3
作者 时冬玉 邱雅萱 +3 位作者 孟祥瑞 邢俊俏 赵雪 张熙琪 《湖北中医药大学学报》 2024年第5期45-49,共5页
目的制备兔抗FAM50B多克隆抗体并探究FAM50B功能应用。方法运用GEPIA在线分析FAM50B在7种癌症中的表达和预后情况;利用DNA重组技术构建pGEX-6P-1-FAM50B原核表达质粒,并转入至大肠杆菌BL21中,用不同浓度IPTG诱导表达,利用GST纯化柱纯化F... 目的制备兔抗FAM50B多克隆抗体并探究FAM50B功能应用。方法运用GEPIA在线分析FAM50B在7种癌症中的表达和预后情况;利用DNA重组技术构建pGEX-6P-1-FAM50B原核表达质粒,并转入至大肠杆菌BL21中,用不同浓度IPTG诱导表达,利用GST纯化柱纯化FAM50B融合蛋白。收集纯化的目的蛋白用于新西兰兔免疫实验。Western Blot检测自制FAM50B多克隆抗体特异性,免疫荧光检测小鼠组织中FAM50B的定位及表达。结果FAM50B在7种癌症中表达异常,且其表达与LGG的不良预后有关;成功构建pGEX-6P-1-FAM50B原核表达质粒;在16℃,经0.3 mM IPTG诱导16 h,FAM50B融合蛋白表达量较高,其大小约为62 kDa;经Western Blot和免疫荧光检测显示,自制抗体特异性好,FAM50B在睾丸中特异性高表达,且定位于细胞核中。结论制备的FAM50B抗体血清特异性好,效价高,可用于Western Blot和免疫荧光,为进一步深入研究FAM50B的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 FAM50B 免抗 原核表达 蛋白纯化 生物信息学分析 抗体制备与应用
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