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兔抗人FAM21多克隆抗体的制备与鉴定
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作者 汤拓 卢彦基 +3 位作者 李文龙 王涛 洪鲜 邓志会 《中国免疫学杂志》 北大核心 2025年第6期1484-1489,共6页
目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒... 目的:制备兔抗人FAM21多克隆抗体并分析抗体特异性。方法:以编码人FAM21全长基因的表达质粒为模板,PCR扩增其2431~3006碱基的核苷酸序列,连接至pGEX-6p-1原核表达载体,构建表达FAM21第811~1002氨基酸片段的pGEX-6p-1-FAM21重组表达质粒。将重组质粒转化至BL21(DE3)感受态大肠杆菌中并进行诱导表达,用GST融合蛋白纯化磁珠纯化蛋白。将纯化后的GST融合蛋白作为抗原免疫新西兰兔,收集的抗血清经过含GST蛋白的琼脂糖柱进行纯化。在FAM21基因沉默的HeLa细胞中,通过Western blot和免疫荧光实验检测抗体的特异性。结果:成功构建pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并在BL21(DE3)大肠杆菌中成功诱导表达,纯化后的GST融合蛋白分子量约为50 kD,免疫新西兰兔后纯化的抗体滴度>1∶128000,并且具有较高的特异性。结论:成功构建了pGEX-6p-1-FAM21原核表达质粒,并制备了可用于Western blot和免疫荧光检测的兔抗人FAM21多克隆抗体。 展开更多
关键词 fam21 原核表达 蛋白表达与纯化 多克隆抗体
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FAM21对绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响 被引量：3
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作者 倪晓蓓 李欣 +1 位作者 凌秀风 霍然 《临床肿瘤学杂志》 CAS 2014年第4期294-298,共5页
目的探讨FAM21对人绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响。方法设计并合成2条FAM21特异性小分子干扰RNA(siRNA 1和siRNA 2)及1条随机序列siRNA(control siRNA),瞬时转染JEG-3细胞,依次设为siRNA1组、siRNA 2组和control siRNA组。... 目的探讨FAM21对人绒毛膜癌细胞系JEG-3迁移和侵袭功能的影响。方法设计并合成2条FAM21特异性小分子干扰RNA(siRNA 1和siRNA 2)及1条随机序列siRNA(control siRNA),瞬时转染JEG-3细胞,依次设为siRNA1组、siRNA 2组和control siRNA组。同时选取未行转染的JEG-3细胞作空白对照(空白组)。普通PCR法检测正常胎盘滋养细胞株HTR-8/Sveno和JEG-3细胞中FAM21 mRNA水平。分别于转染后24、48h采用实时荧光定量PCR和Western blotting检测各组FAM21的mRNA和蛋白水平,Transwell法检测各组转染24h后的细胞迁移和侵袭能力,实时荧光定量PCR检测各组转染24h后的迁移侵袭相关基因(KISS-1、BRMS1和INSL4)的mRNA水平。结果 JEG-3细胞的FAM21 mRNA水平高于HTR-8/Svneo细胞(P<0.05)。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的FAM21 mRNA和转染48h后的FAM21蛋白水平均低于control siRNA组和空白组(P<0.05),转染24h后的迁移和侵袭能力均低于control siRNA组和空白组(P<0.05)。siRNA 1组和siRNA 2组转染24h后的KISS-1和BRMS1 mRNA水平降低,而INSL4 mRNA水平升高,与其余两组比较,差异均有统计学意义(P<0.05);control siRNA组和空白组上述指标的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 FAM21在人绒毛膜癌JEG-3细胞中具有调节迁移和侵袭的功能,在绒毛膜癌的病理机制中发挥了重要的作用。 展开更多
关键词 fam21 绒毛膜癌 迁移 侵袭 fam21
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