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Fam172a基因敲除小鼠的制备与基因型鉴定 被引量：3
1
作者 张一帆 王建文 +3 位作者 杨琪 郝晓花 黄玉波 魏红山 《中国肝脏病杂志（电子版）》 CAS 2017年第2期32-35,共4页
目的建立稳定的Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型,观察基因敲除对小鼠生长发育的影响以及该基因在小鼠体内的生物学的作用。方法采用基因打靶敲除技术,获得杂合子(Fam172a^(+/-))小鼠。将所得Fam172a^(+/-)小鼠饲养于屏障环境中杂交获得... 目的建立稳定的Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型,观察基因敲除对小鼠生长发育的影响以及该基因在小鼠体内的生物学的作用。方法采用基因打靶敲除技术,获得杂合子(Fam172a^(+/-))小鼠。将所得Fam172a^(+/-)小鼠饲养于屏障环境中杂交获得纯合子(Fam172a^(-/-))小鼠。利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术对小鼠基因型进行鉴定,称量出生后20天、40天以及60天野生型(wild type,WT)小鼠及Fam172a^(-/-)小、鼠的体重。随机处死8周龄WT小鼠和Fam172a^(-/-)小鼠,取心、肝、脾、肺及肾组织,采用Western blot险测Fam172a基因的组织表达特异性。结果 PCR及Western blot结果均证明Fam172a基因在Fam172a^(-/-)小鼠体内完全删除。Farm172a^(-/-)小鼠与WT小鼠20天、40天以及60天体重的差异均有统计学意义(P均<0.05)。FAM172A蛋白在WT小鼠中的表达有组织特异性。Fam172a^(-/-)小鼠每胎产仔数略低于WT小鼠,差异无统计学意义(P>0.05)。各小鼠外观、行为和繁殖力无显著差异。结论 Fam172a基因敲除C57/B6J小鼠模型已成功构建,并繁育出足够数量的Fam172a^(-/-)小鼠进行下一步实验。Fam172a基因对小鼠体重和生长发育具有重要作用。 展开更多
关键词 fam172a 基因敲除 小鼠
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人FAM172A基因慢病毒载体的构建及其在巨噬细胞中的表达 被引量：2
2
作者 李梅芳 张蓉 +5 位作者 李连喜 俞立波 屠印芳 陆俊茜 包玉倩 贾伟平 《医学研究杂志》 2014年第4期25-29,共5页
目的构建人FAM172A基因慢病毒载体,并包装慢病毒FAM172A感染人巨噬细胞予以鉴定。方法以PDC315-FAM172A为模板扩增FAM172A基因全长序列后,与慢病毒载体pLenti6.3/V5-GFP经酶切、连接转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,行菌液PCR、酶切及测序鉴... 目的构建人FAM172A基因慢病毒载体,并包装慢病毒FAM172A感染人巨噬细胞予以鉴定。方法以PDC315-FAM172A为模板扩增FAM172A基因全长序列后,与慢病毒载体pLenti6.3/V5-GFP经酶切、连接转化大肠杆菌,挑取阳性克隆,行菌液PCR、酶切及测序鉴定。将鉴定正确的FAM172A基因慢病毒载体和病毒包装质粒共转染FT293细胞包装慢病毒FAM172A,测定病毒效价。Western blot和QPCR验证慢病毒FAM172A感染巨噬细胞效果。结果菌液PCR、酶切及测序结果显示FAM172A基因成功插入到慢病毒载体中。病毒包装后荧光显微镜观察到FT293细胞中有大量绿色荧光,病毒效价为1.2×108TU/ml。Western blot和QPCR结果显示,慢病毒FAM172A侵染靶细胞后可明显增加目的基因FAM172A的表达。结论成功构建慢病毒FAM172A,为后续FAM172A基因功能研究奠定了基础。 展开更多
关键词 fam172a基因 慢病毒载体 巨噬细胞
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应用酵母双杂交筛选与FAM172A相互作用蛋白的研究
3
作者 张蓉 李梅芳 +6 位作者 李连喜 俞立波 赵催春 屠印芳 陆俊茜 包玉倩 贾伟平 《医学研究杂志》 2014年第4期37-41,共5页
目的应用酵母双杂交技术(蛋白与蛋白的相互作用),筛选人胎脑cDNA文库中与FAM172A蛋白相互作用的蛋白,为深入研究新发现的蛋白质FAM172A生物学功能及在疾病中的作用奠定基础。方法构建pGB-FAM172A诱饵质粒,转化酵母菌株Y190。人胎脑cDNA... 目的应用酵母双杂交技术(蛋白与蛋白的相互作用),筛选人胎脑cDNA文库中与FAM172A蛋白相互作用的蛋白,为深入研究新发现的蛋白质FAM172A生物学功能及在疾病中的作用奠定基础。方法构建pGB-FAM172A诱饵质粒,转化酵母菌株Y190。人胎脑cDNA转化诱饵酵母菌,于营养缺陷型培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)上生长,从中筛选到35个单克隆进行β-半乳糖苷酶克隆转移滤纸实验,对蓝色克隆者进行质粒抽提,转入大肠杆菌DH/OB,进行抗性筛选,从中提取质粒,一对一与诱饵质粒pGB-FAM172A共转酵母细胞Y190,进行验证鉴定,提取质粒DNA进行测序并进行BLAST比对分析。结果成功构建pGB-FAM172A质粒,经严格筛选,共有10个阳性克隆,分别进行测序、序列比对,成功筛选出6个与FAM172A存在相互作用的蛋白:RTCD1、MOCS2、A2M、KCNIP1、BTBD2和TOX2。结论利用酵母双杂交系统筛选出6个可能与FAM172A相互作用的蛋白,为进一步研究FAM172A蛋白的生物学功能提供了线索。 展开更多
关键词 fam172a基因 Α2巨球蛋白 酵母双杂交系统 蛋白相互作用
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