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山羊β-酪蛋白基因启动子指导的转基因小鼠乳汁高效表达人凝血因子Ⅸ 被引量：35
1
作者 黄赞 颜景斌 +4 位作者 黄缨 孙琼 肖艳萍 黄英 曾溢滔 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第3期206-211,T001,共7页
为探讨应用转基因动物乳腺生物反应器高效表达人凝血因子IX(humanclottingfactorIX ,hFIX)的可行性 ,构建了包括山羊 β 酪蛋白基因启动子和外显子 1、内含子 1、外显子 2共约 6 .7kb片段以及hFIX全长cDNA序列和部分经改造的内含子 1的... 为探讨应用转基因动物乳腺生物反应器高效表达人凝血因子IX(humanclottingfactorIX ,hFIX)的可行性 ,构建了包括山羊 β 酪蛋白基因启动子和外显子 1、内含子 1、外显子 2共约 6 .7kb片段以及hFIX全长cDNA序列和部分经改造的内含子 1的乳腺表达载体 ,通过转基因技术获得 12个原代转基因小鼠 (9♀ ,3♂ ) ,整合率为 11.2 %。经ELISA和Westernblot鉴定 8只转基因母鼠乳汁中有hFIX的表达并拥有很高的凝血活性 ,其中一只的表达量高达5 2 .9mg/L ,其凝血活性亦高达 2 79.2 %。FISH实验表明不同的转基因小鼠外源基因整合于小鼠的不同染色体上。结果证明所构建的山羊 β 酪蛋白基因启动子乳腺表达载体能有效指导hFIX基因在小鼠乳腺中高效表达 ,并能保持hFIX的生物活性。 展开更多
关键词 山羊 β-酪蛋白基因启动子 人凝血因子Ⅸ 转基因小鼠 表达
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人凝血IX因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达 被引量：15
2
作者 张克忠 卢大儒 +2 位作者 邱信芳 黄英 黄淑帧 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第4期419-422,共4页
人凝血ＩＸ因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达张克忠卢大儒邱信芳（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）黄英黄淑帧（上海市儿童医院医学遗传研究所上海２０００４０）血友病Ｂ（Ｈｅｍｏｐｈｉ... 人凝血ＩＸ因子基因乳腺组织特异性表达载体的构建及其在奶山羊乳腺中的分泌性表达张克忠卢大儒邱信芳（复旦大学遗传学研究所上海２００４３３）黄英黄淑帧（上海市儿童医院医学遗传研究所上海２０００４０）血友病Ｂ（ＨｅｍｏｐｈｉｌｉａＢ）是由于人凝血ＩＸ因子（ｈ... 展开更多
关键词 人凝血IX因子 基因表达 表达载体 基因工程 乳腺
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基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型 被引量：6
3
作者 车文良 贺艳 +2 位作者 姚真真 李坚 傅继梁 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第7期594-598,共5页
为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载... 为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序 。 展开更多
关键词 血友病乙 转基因小鼠模型 点突变 人凝血因子IX基因
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微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达 被引量：4
4
作者 高啸波 侍鼎 +3 位作者 王飞 卢大儒 邱信芳 薛京伦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期294-298,共5页
将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小... 将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小腺病毒载体 pRP10 0 1分别转移入腺病毒包装细胞 2 93Cre4中 ,随后再转染辅助病毒AdLC8,从而包装出微小腺病毒AdGTi’IX和AdRP10 0 1。经超离心纯化后对两种病毒的检测结果表明 ,病毒颗粒浓度分别为 2 4× 10 12 /ml和 2 2× 10 12 /ml,辅助病毒所占比例均小于 0 8% ;用AdRP10 0 1以感染复数 (MOI)为 5 0的比例转染 3T3细胞 ,X - gal染色后发现细胞蓝染率在 90 %以上 ;用AdGTi’IX以MOI =5 0的比例转染 3T3细胞 ,ELISA结果表明 ,其瞬时表达为 1 4μg/10 6细胞·2 4h。此结果显示出该载体系统在血友病B基因治疗方面有很好的应用前景 ,为进一步的动物试验及免疫原性研究等临床前研究奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 微小腺病毒载体 人凝血因子IX 基因表达 血友病
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核因子-κB对TNF-α诱导的脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4表达的影响 被引量：8
5
作者 林晓仪 郭颖 +1 位作者 丁鹤林 傅祖植 《中山大学学报（医学科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第1期21-25,共5页
【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB(NF-κB)对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组:A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α(TNF-α)组,C组吡咯烷二硫基甲酸... 【目的】观察TNF-α对3T3-L1脂肪细胞葡萄糖转运蛋白4(GLUT4)mRNA与蛋白表达的作用,并探讨核因子-κB(NF-κB)对上述作用的影响。【方法】成熟的3T3-L1脂肪细胞分成3组:A组正常对照组,B组肿瘤坏死因子α(TNF-α)组,C组吡咯烷二硫基甲酸酯(NF-κB活性抑制剂)+TNF-α组。各组干预48h后检测phospho-NF-κBp65(Ser536)的蛋白水平、GLUT4mRNA及蛋白水平。蛋白检测采用Western法,mRNA检测采用RT-PCR法。【结果】B组phospho-NF-κBp65蛋白水平(71.1±5.9)高于A组(41.3±1.7,P<0.001)和C组(25.4±4.7,P<0.001)。B组GLUT4的mRNA水平(0.86±0.14,P<0.001)与蛋白水平(31.6±7.2,P<0.001)低于A组(2.01±0.65;60.7±8.4),C组mRNA水平(0.46±0.12)与B组比较有下降趋势但无统计学意义(P=0.100),C组蛋白水平(9.5±3.0)低于B组(P=0.001)。【结论】TNF-α下调3T3-L1脂肪细胞的GLUT4表达,抑制NF-κB活性后GLUT4表达进一步下调。这提示了TNF-α可能不是通过激活NF-κB而使GLUT4的表达下调。 展开更多
关键词 核因子-ΚB 肿瘤坏死因子-Α 3T3-L1脂肪细胞 葡萄糖转运蛋白4
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基因转移治疗血友病B的动物试验和安全性探讨 被引量：3
6
作者 卢大儒 郑冰 +3 位作者 艾星滨 周洁民 邱信芳 薛京伦 《动物学报》 SCIE CAS CSCD 1994年第2期182-190,共9页
本文报道了皮肤成纤维细胞基因治疗血友病Ｂ的新西兰大白兔试验及安全性检测。转有人凝血因子ＩＸＣＤＮＡ的免皮肤成纤维细胞包埋于胶原基质中，然后进行不同方式的自体或同种异体移植，移植兔血浆中人ＩＸ因子蛋白有高水平的表达且持... 本文报道了皮肤成纤维细胞基因治疗血友病Ｂ的新西兰大白兔试验及安全性检测。转有人凝血因子ＩＸＣＤＮＡ的免皮肤成纤维细胞包埋于胶原基质中，然后进行不同方式的自体或同种异体移植，移植兔血浆中人ＩＸ因子蛋白有高水平的表达且持续稳定。腹腔移植有ＲＳＦ－ＸＬＩＸ转化细胞的兔血浆中人ＩＸ因子表达水平达１００ｎｇ／ｍｌ，持续５个月以上；腹腔移植有ＲＳＦ－ｐＣＭＶＩＸ转化细胞的兔血浆中人ＩＸ因子表达水平达２９５ｎｇ／ｍｌ，持续１５个月以上；皮下细胞胶原液注射移植ＲＳＦ－Ｎ２ＣＭＶＩＸ转化细胞的兔血浆中人 ＩＸ因子表达水平达 ４８０ｎｇ／ｍｌ，持续 １０个月以上。 Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ证明血浆中表达的的确是人ＩＸ因子蛋白；安全性检测证明转化细胞移植途径安全可靠，没有检测到野生型病毒和恶性转化细胞，无任何毒副作用。 展开更多
关键词 基因治疗 血友病 动物试验
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利用烟草表达人凝血IX因子(hFIX)的研究 被引量：3
7
作者 赵凌侠 张凌 +5 位作者 魏捷 开国银 李柱刚 钱虹妹 张慧 唐克轩 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期11-16,共6页
血友病B是凝血IX因子(hFIX)缺乏所导致的一种出血性疾病,通过输血和hFIX浓缩剂进行治疗疗效显著,但存在治疗费用高和安全隐患,因而获得安全、廉价的人凝血IX因子对血友病B治疗具有重要意义。植物系统表达外源蛋白在生产成本和安全性方... 血友病B是凝血IX因子(hFIX)缺乏所导致的一种出血性疾病,通过输血和hFIX浓缩剂进行治疗疗效显著,但存在治疗费用高和安全隐患,因而获得安全、廉价的人凝血IX因子对血友病B治疗具有重要意义。植物系统表达外源蛋白在生产成本和安全性方面具有优势。为此,构建含人凝血IX因子基因(hFIX,2.8kb)植物双元表达载体p35s2300∷gus∷noster,用农杆菌介导法转化烟草“百日红”,通过PCR和Southernblot分析证实获得4株独立转基因植株,hFIX在转基因烟草基因组中的拷贝数为1～4个;RTPCR和ELISA检测结果表明,hFIX在转录和翻译水平已成功表达,hFIX在转基因烟草叶片中的表达量为2.5～8.8ng/g·FW,并具有免疫活性。为利用植物系统表达hFIX的后续研究作了必要准备,也为利用植物系统表达其他药用蛋白研究提供了一些理论和实验参考。 展开更多
关键词 人凝血Ⅸ因子 烟草
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血友病B携带者及产前基因诊断的研究 被引量：2
8
作者 王莉 侯巧芳 +2 位作者 廖世秀 王应太 雷平冲 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第26期3279-3283,共5页
目的探讨血友病B家系分子致病机制及基因诊断携带者和高危胎儿。方法采集5个典型血友病B家系成员的标本,提取基因组DNA后PCR扩增和序列比对凝血因子Ⅸ的8个外显子及其侧翼序列;利用基因外6个STR位点进行连锁分析。结果序列分析表明5个... 目的探讨血友病B家系分子致病机制及基因诊断携带者和高危胎儿。方法采集5个典型血友病B家系成员的标本,提取基因组DNA后PCR扩增和序列比对凝血因子Ⅸ的8个外显子及其侧翼序列;利用基因外6个STR位点进行连锁分析。结果序列分析表明5个家系患者分别存在6485C→T(Arg37stop)、6364C→T(Arg-4Trp)、6409G→A(Gly12Arg)、6364C→T(Arg-4Trp)、30383G→C(Val135Leu)突变;家系1的III2和IV1、家系2的I1、家系4的II8和III6均携带家系中患者的杂合突变;发现1例女性胎儿携带致病基因,其余2例胎儿未见突变;连锁分析结果与序列分析一致。结论替换突变可能是这5个家系致病的分子机制;在严格的质量控制下,序列突变分析结合连锁分析是血友病B携带者和产前基因诊断准确而快速的方法。 展开更多
关键词 血友病B 凝血因子IX 基因诊断
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重组腺病毒介导的人凝血Ⅸ因子cDNA在奶山羊乳腺中的分泌表达 被引量：2
9
作者 张克忠 卢大儒 +7 位作者 王琪 薛京伦 邱信芳 黄英 李华 李兵岩 曾溢滔 黄淑帧 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1997年第12期43-46,共4页
利用含ｈＦＩＸｃＤＮＡ和腺病毒片段的质粒ｐＡｄＣＭＶｈＦＩＸ与质粒ｐＪＭ１７共转染２９３包装细胞，制备含ｈＦＩＸ的重组腺病毒颗粒，经纯化、浓缩后通过直接转染活体奶山羊乳腺小叶的方法，建立了ｈＦＩＸ蛋白的乳腺表达系统。... 利用含ｈＦＩＸｃＤＮＡ和腺病毒片段的质粒ｐＡｄＣＭＶｈＦＩＸ与质粒ｐＪＭ１７共转染２９３包装细胞，制备含ｈＦＩＸ的重组腺病毒颗粒，经纯化、浓缩后通过直接转染活体奶山羊乳腺小叶的方法，建立了ｈＦＩＸ蛋白的乳腺表达系统。转染处理４天后，ｈＦＩＸ蛋白在羊奶中的最高表达量为２１ｎｇ／ｍｌ乳汁，活性检测表明乳汁中的人凝血ＩＸ因子蛋白８０％以上具有生物学活性。此研究结果证实了人凝血ＩＸ因子全长ｃＤＮＡ在奶山羊乳汁中分泌表达的可行性，同时也为验证外源基因在奶山羊乳腺组织中的分泌表达提供了一个快速检测系统。 展开更多
关键词 hFIX蛋白 重组腺病毒 凝血IX因子 乳腺组织表达
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DNA测序法检测血友病B患者F9基因突变 被引量：2
10
作者 马莉 刁戈 +3 位作者 肖小璞 孙盼 李长清 林方昭 《中国输血杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第11期1084-1087,共4页
目的分析血友病B患者凝血因子Ⅸ(F9)基因突变情况。方法检测3名非亲缘关系疑似血友病B患者的表型,确定其活性缺失因子;采用PCR结合DNA测序的方法对患者F9基因作序列分析,确定其突变位点。结果 3名患者均表现为FⅨ促凝活性(FⅨ∶C)明显偏... 目的分析血友病B患者凝血因子Ⅸ(F9)基因突变情况。方法检测3名非亲缘关系疑似血友病B患者的表型,确定其活性缺失因子;采用PCR结合DNA测序的方法对患者F9基因作序列分析,确定其突变位点。结果 3名患者均表现为FⅨ促凝活性(FⅨ∶C)明显偏低,分别为6.1%、14.7%及6.5%,故诊断为血友病B患者,其F9基因突变分别为G20341A(Gly133Arg)、G30116A(Ala233Thr)及G31095A(Cys336Tyr)。结论检测到3名血友病B患者的F9基因上均发生序列改变,证实了血友病B患者F9基因缺陷的分子机制。 展开更多
关键词 血友病B 凝血因子IX 内基因 基因突变 DNA测序
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人羊水祖细胞的分离和基因修饰 被引量：1
11
作者 杨辰敏 范书玥 +4 位作者 唐汇祥 巩芷娟 龚秀丽 任兆瑞 曾凡一 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期492-503,共12页
探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等... 探讨从孕中期羊水中分离出人羊水祖细胞的有效方法和FIX基因修饰后的效果,为血友病B的产前治疗提供可行的基础。从镜下分离出呈致密克隆生长的梭形细胞集落,经培养传代后,通过第3代慢病毒载体将hFIX导入该细胞,经酶联免疫反应(ELISA)等方法检测hFIX的表达并检测凝血活性。用这种方法得到的羊水祖细胞呈成纤维细胞样,倍增时间为39.05 h,该细胞在不仅在蛋白水平表达干细胞表面分子SSEA4,TRA1-60,在基因水平还可检测到NANOG,OCT4,SOX2mRNA的表达。羊水祖细胞导入hFIX cDNA后,能合成并分泌hFIX蛋白,传代后48 h在上清液中的浓度为20.37%±2.77%,凝血活性16.42%±1.78%。上清液中的浓度在第4天达到平台期,为50.35%±5.42%,凝血活性可达45.34%±4.67%。ELISA检测显示转染后的羊水细胞表达的hFIX蛋白的水平呈现基本稳定趋势,波动幅度较小;同时检测FIX凝血活性也与蛋白浓度呈正相关。从羊水中可以分离得到具有多能性祖细胞,转染了hFIX的羊水祖细胞在体外能持续合成有凝血功能的hFIX蛋白,为血友病B产前治疗的新方法提供了实验依据。 展开更多
关键词 血友病B 羊水祖细胞 人凝血因子IX 基因治疗
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人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定影响因素的探讨 被引量：2
12
作者 栗景蕊 高晓新 胡宇驰 《中国生化药物杂志》 CAS 2017年第4期426-428,共3页
目的 探讨几种因素对人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定的影响。方法 参照《中国药典》2010年版,采用不同厂家乏Ⅸ因子血浆、不同型号仪器、不同肝素中和方式、不同样品前处理方法测定人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价,分析其对PC... 目的 探讨几种因素对人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价测定的影响。方法 参照《中国药典》2010年版,采用不同厂家乏Ⅸ因子血浆、不同型号仪器、不同肝素中和方式、不同样品前处理方法测定人凝血酶原复合物中凝血因子Ⅸ效价,分析其对PCC中凝血因子Ⅸ效价测定结果的影响。结果 不同厂家的乏Ⅸ因子血浆对凝血因子效价测定结果有显著性差异（P〈0.05）。不同型号全自动凝血分析仪对凝血因子效价测定结果无显著性差异。当稀释倍数大于60倍时,是否中和肝素对凝血因子Ⅸ效价测定结果影响较小。当稀释倍数小于60倍时,中和肝素的检测结果高于不中和的检测结果,差异有统计学意义（P〈0.05）。样品预温与否及是否复溶15分钟,凝血因子Ⅸ效价测定结果无显著性差异。结论 不同厂家乏Ⅸ因子血浆,不同稀释倍数的肝素中和方式,样品前处理方法均影响PCC制品凝血因子Ⅸ效价的测定,在检测过程中应予以重视。加强对乏因子血浆的质量控制及操作流程的规范化,建立PCC制品凝血因子检测的室间质量评价体系。 展开更多
关键词 人凝血酶原复合物 凝血因子Ⅸ 乏Ⅸ因子血浆
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晚期胃肠道肿瘤血瘀程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白关系 被引量：10
13
作者 陆文秀 许建华 +6 位作者 张强 李鳌 余倩云 陈奇 张勇 孙珏 范忠泽 《中国实验方剂学杂志》 CAS 北大核心 2013年第23期301-306,共6页
目的:探讨晚期胃肠道肿瘤血瘀程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白之间的关系。方法:选取本院肿瘤科2012年4月1日到2013年4月10日IV期胃癌、十二指肠癌、结直肠癌患者46例,另选取同期住院的同类疾病术后无瘤患者29例,本院体检中心健康体检者1... 目的:探讨晚期胃肠道肿瘤血瘀程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白之间的关系。方法:选取本院肿瘤科2012年4月1日到2013年4月10日IV期胃癌、十二指肠癌、结直肠癌患者46例,另选取同期住院的同类疾病术后无瘤患者29例,本院体检中心健康体检者19例作为对照,入院次日抽取空腹静脉血,采用ELISA法检测血管内皮生长因子(VEGF)、骨桥蛋白(OPN)、碳酸酐酶IX(CAIX)水平。结果:晚期肿瘤以及术后无瘤组患者外周血VEGF,OPN,CAIX水平均明显高于健康对照组,晚期肿瘤组与术后无瘤组之间,前者VEGF,OPN,CAIX分别是后者的1.27倍(P>0.05)、1.33倍(P<0.05)、1.48倍(P>0.05);晚期肿瘤血瘀程度重组VEGF,CAIX水平明显高于血瘀程度轻组,前者是后者的1.92倍(P<0.01)、2.70倍(P<0.01);血瘀证症候脉络瘀血、癥积程度与VEGF,OPN,CAIX水平相关,程度越重,缺氧相关蛋白水平越高。结论:晚期胃肠道肿瘤血瘀证与外周血缺氧相关蛋白VEGF,OPN,CAIX相关。 展开更多
关键词 胃肠道肿瘤 血瘀 缺氧 血管内皮生长因子 骨桥蛋白 碳酸酐酶IX
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恩度联合放射治疗对Lewis肺癌小鼠生长以及碳酸酐酶Ⅸ和乏氧诱导因子表达的影响 被引量：2
14
作者 刘梁 戈伟 +5 位作者 明平坡 张金忠 张令 王慧敏 曹德东 郑永法 《实用肿瘤学杂志》 CAS 2012年第5期385-388,共4页
目的研究使用抗血管生成药物联合放射治疗的荷瘤小鼠肿瘤组织中碳酸酐酶Ⅸ（CAIX）和乏氧诱导因子-1a（HIF-1a）mRNA的表达变化，并对组织基因表达变化的可能机制进行探讨。方法建立Lewis肺癌模型，将32只成瘤小鼠随机分为对照组（Cont... 目的研究使用抗血管生成药物联合放射治疗的荷瘤小鼠肿瘤组织中碳酸酐酶Ⅸ（CAIX）和乏氧诱导因子-1a（HIF-1a）mRNA的表达变化，并对组织基因表达变化的可能机制进行探讨。方法建立Lewis肺癌模型，将32只成瘤小鼠随机分为对照组（Control组）、恩度组（ES组）、放射治疗组（RT组）和恩度联合放疗组（ES＋RT组），从治疗当天开始，隔日测量肿瘤体积，绘制肿瘤生长曲线。治疗结束后剥离瘤体，使用Real—timePCR方法对各处理组肿瘤组织中CAIX及HIF—lctmRNA的表达情况进行检测。结果从肿瘤生长曲线可以看出：ES＋RT组与其余三组比较差异有统计学意义（P〈0．05），说明联合组抑瘤效果最好。以对照组为参照，ES组、RT组、ES＋RT组CAIXmRNA的扩增倍数均下降，差异均有统计学意义（P〈0．05），ES＋RT组下降最明显。以对照组为参照，ES组、RT组、ES＋RT组的HIF—1a mRNA扩增倍数均下降，RT组、ES＋RT组具有统计学意义（P〈0．05），ES组差异并无统计学意义（P〉0．05）。HIF-1a mRNA与CAIXmRNA表达呈正相关（r=0．68，P〈0．01）。结论恩度联合放疗显著抑制Lewis肺癌小鼠肿瘤的生长；同时能够改善肿瘤乏氧状况，抑制HIF-1a和CAIXmRNA的表达，可能是放疗增敏作用的机制之一。 展开更多
关键词 恩度 放射治疗 碳酸酐酶IX 乏氧诱导因子-1a
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腺病毒载体介导的人凝血因子 IX 基因的离体和活体表达
15
作者 王琪 卢大儒 +2 位作者 颜永碧 邱信芳 薛京伦 《高技术通讯》 EI CAS CSCD 1998年第8期45-49,共5页
为血友病Ｂ的基因治疗探索了高效转移和表达载体，建立了重组腺病毒载体介导的基因转移系统（Ａｄｈｆｉｘ），并进行了离体和活体表达研究。结果显示：腺病毒离体基因转移效率可达９８％以上并可在多种细胞中高效表达，ｈＦＩＸ蛋白最... 为血友病Ｂ的基因治疗探索了高效转移和表达载体，建立了重组腺病毒载体介导的基因转移系统（Ａｄｈｆｉｘ），并进行了离体和活体表达研究。结果显示：腺病毒离体基因转移效率可达９８％以上并可在多种细胞中高效表达，ｈＦＩＸ蛋白最高可达６．８６μｇ／１０６细胞／２４ｈｒ。小鼠血浆中ｈＦＩＸ蛋白含量最高可达１０７２ｎｇ／ｍｌ血浆，并可持续表达１０周左右；以腹腔注射效果最好；免疫抑制剂环磷酰胺可明显延长表达持续时间。结果表明重组腺病毒载体可介导ｈＦＩＸｃＤＮＡ在离体细胞和活体组织中高效转移和表达。 展开更多
关键词 腺病毒载体 凝血因子IX 基因 转移 血友病 表达
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凝血因子IX基因剔除小鼠的培育历史与建系方法
16
作者 郝光荣 孙伟 +2 位作者 汤球 崔淑芳 黄立志 《中国实验动物学报》 CAS CSCD 2003年第2期120-121,共2页
目的　培育凝血因子IX基因剔除小鼠近交系。方法　采用全同胞兄妹对交配 ,每代选用第一胎小鼠留种 ,记录繁殖性能 ;第 8代开始筛选纯合子。结果　凝血因子IX基因剔除小鼠已近交培育到第 12代 ,交配年龄 70 - 90d ,平均每窝产仔数 5只以... 目的　培育凝血因子IX基因剔除小鼠近交系。方法　采用全同胞兄妹对交配 ,每代选用第一胎小鼠留种 ,记录繁殖性能 ;第 8代开始筛选纯合子。结果　凝血因子IX基因剔除小鼠已近交培育到第 12代 ,交配年龄 70 - 90d ,平均每窝产仔数 5只以上 ,离乳数 3只以上。 展开更多
关键词 凝血因子Ⅸ基因 小鼠 培育 血友病B 动物模型
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中国脑血栓患者家系凝血因子IX基因SNP9的检测(英文)
17
作者 闫伟 孟晓萍 +2 位作者 杨丽丽 康平 Tom Howard 《中国临床康复》 CAS CSCD 2003年第16期2257-2258,共2页
目的凝血因子Ⅸ基因在第六外显子23384～23387bp存在单核苷酸多态性(SNP9)。探讨这一单核苷酸的多态性在中国北方人群脑血栓发病机制中的作用。方法应用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测20个脑血栓患者和他们家... 目的凝血因子Ⅸ基因在第六外显子23384～23387bp存在单核苷酸多态性(SNP9)。探讨这一单核苷酸的多态性在中国北方人群脑血栓发病机制中的作用。方法应用聚合酶链反应—限制性片断长度多态性(PCR-RFLP)的方法,检测20个脑血栓患者和他们家系,60例正常健康人群凝血因子Ⅸ第六外显子2338～23387bp多态性分布。结果20例脑血栓患者和40例他们的家系成员,在MnⅡ酶切后,可见307bp片断基因类型全部是A。对照组60例基因多态性基因型也显示为A,阳性对照可见A、G和AG。结论在这一等位基因位点脑血栓家系和正常人群基因多态性基因型均为A型。 展开更多
关键词 中国 脑血栓 家系 凝血因子 Ⅸ基因 SNP9 检测 单核苷酸多态性
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晚期胃肠道肿瘤正虚程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白关系 被引量：1
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作者 李鳌 陆文秀 +7 位作者 赵璐 袁旭 张勇 张强 朱晏伟 孙珏 范忠泽 许建华 《环球中医药》 CAS 2015年第3期295-298,共4页
目的探讨晚期胃肠道肿瘤正虚程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白之间的关系。方法普陀医院肿瘤科2012年4月1日到2013年4月10日IV期胃肠道肿瘤患者46例,以卡氏(Karnofsky Performance Status,KPS)评分、中医症候(气短、纳差、爪甲不荣)作为评... 目的探讨晚期胃肠道肿瘤正虚程度与外周血肿瘤缺氧相关蛋白之间的关系。方法普陀医院肿瘤科2012年4月1日到2013年4月10日IV期胃肠道肿瘤患者46例,以卡氏(Karnofsky Performance Status,KPS)评分、中医症候(气短、纳差、爪甲不荣)作为评价患者正虚指标,并根据正虚指标分别分组,采用酶联免疫吸附法检测患者血清中血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、骨桥蛋白(osteopontin,OPN)、碳酸酐酶IX(carbonic anhydrase IX,CAIX)水平。结果经成组t检验,晚期胃肠道肿瘤患者KPS≤60分组与KPS>60分组比较,前者VEGF、OPN、CAIX水平分别是后者的1.75倍(P<0.05)、1.10倍(P>0.05)、1.68倍(P<0.05)。晚期胃肠道肿瘤具有气短、纳差、爪甲不荣症状患者外周血VEGF、OPN、CAIX水平均明显高于无上述症状患者(爪甲不荣组CAIX除外),其中以VEGF指标均有统计学意义(P<0.05)。结论晚期胃肠道肿瘤正虚程度与外周血缺氧相关蛋白VEGF、OPN、CAIX相关。 展开更多
关键词 胃肠道肿瘤 正虚 缺氧相关蛋白 血管内皮生长因子 骨桥蛋白 碳酸酐酶IX
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重组AAV1/hFIX病毒制备及其体外转导培养细胞的实验研究
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作者 彭建强 郭莹 +2 位作者 吴小兵 袁振华 曹晖 《中国现代医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第18期2635-2638,共4页
目的制备携带人凝血因子IX基因的重组AAV1病毒(rAAV1/hFIX),体外转导C2C12细胞并检测hFIX的表达。方法通过"一株载体细胞/一株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1/hFIX,体外转导C2C12细胞后,检测细胞上清中FIX的表达量。... 目的制备携带人凝血因子IX基因的重组AAV1病毒(rAAV1/hFIX),体外转导C2C12细胞并检测hFIX的表达。方法通过"一株载体细胞/一株辅助病毒"的双因素包装策略制备出rAAV1/hFIX,体外转导C2C12细胞后,检测细胞上清中FIX的表达量。结果制备出了高纯度的rAAV1/hFIX病毒,转导C2C12细胞24h后在上清中即可检测到hFIX,连续检测了120h都有表达,24h最高表达量高达到(68.0±3.2)ng/24h。结论制备的rAAV1/hFIX病毒在体外培养细胞中能高水平表达hFIX,为应用基因治疗载体治疗血友病B的体内实验奠定了基础。 展开更多
关键词 重组腺相关病毒1 人凝血因子IX B型血友病 基因治疗
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大鼠学习记忆能力及其海马内TNF-α、IL-6含量的增龄性改变 被引量：3
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作者 金海 陈晨 +3 位作者 张明辉 吴芹 石京山 金凤 《合肥医学院学报》 2017年第3期238-242,共5页
目的探讨大鼠学习记忆能力及其海马内神经炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的增龄性改变。方法 SD大鼠42只,雌雄各半,分别为2月龄15只,6月龄13只,12月龄14只,Morris水迷... 目的探讨大鼠学习记忆能力及其海马内神经炎症因子肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)及白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)的增龄性改变。方法 SD大鼠42只,雌雄各半,分别为2月龄15只,6月龄13只,12月龄14只,Morris水迷宫检测不同月龄大鼠空间学习记忆能力,real time RT-PCR法检测大鼠海马TNF-α和IL-6 mRNA的表达,ELISA检测大鼠海马TNF-α和IL-6蛋白的含量。结果定位航行实验中,6月龄大鼠的平均逃避潜伏期最短,相比于12月龄,平均逃避潜伏期明显缩短(P<0.05),相比于2月龄,平均逃避潜伏期变化不明显(P>0.05),12月龄大鼠的学习成绩与2月龄比较无统计学意义(P>0.05);空间探索实验中,6月龄大鼠进入平台区次数最多、原平台象限滞留时间百分比及运动距离百分比最高,6月龄大鼠在原平台象限运动距离百分比较2月龄显著增加(P<0.05),而原平台象限滞留时间百分比及运动距离百分比变化不明显(P>0.05),6月龄大鼠进入平台区次数、原平台象限滞留时间百分比及原平台象限运动距离百分比与12月龄大鼠比较均显著增加(P<0.05),12月龄大鼠的学习成绩与2月龄大鼠比较差异无显著性(P>0.05)。real time RT-PCR结果表明,与2月龄及12月龄比较,6月龄大鼠海马TNF-α、IL-6 mRNA表达明显增高(P<0.01);ELISA结果显示,相比于2月龄及12月龄,6月龄大鼠海马TNF-α、IL-6蛋白含量均显著增高(P<0.01)。12月龄大鼠海马TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白含量与2月龄比较无统计学意义(P>0.05)。结论大鼠学习记忆能力的增龄性改变与海马TNF-α、IL-6 mRNA及蛋白水平的增龄性改变呈对应关系。 展开更多
关键词 学习记忆 大鼠 增龄 炎症 肿瘤坏死因子α 白细胞介素6
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