大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位基因的克隆与鉴定 被引量：5

1

作者 成大荣 徐建生 +4 位作者 吕玲 唐波 曹军 孙怀昌 高崧 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2004年第5期43-46,共4页

根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位 (FedF/ab)的基因 (fedF/ab)序列 ,设计了 1对引物 ,利用PCR技术从大肠埃希氏菌F10 7/ 86、YCED1、YCED2、C、D和 12F株中分别扩增获得了一段序列 ,并克隆至 pGEM T载体 ,获得了重组质粒TF10 7... 根据已发表的大肠埃希氏菌F18ab菌毛F亚单位 (FedF/ab)的基因 (fedF/ab)序列 ,设计了 1对引物 ,利用PCR技术从大肠埃希氏菌F10 7/ 86、YCED1、YCED2、C、D和 12F株中分别扩增获得了一段序列 ,并克隆至 pGEM T载体 ,获得了重组质粒TF10 7F、TYCED1F、TYCED2F、TCF、TDF、T12FF。经琼脂糖凝胶电泳、序列测定及分析 ,6个重组质粒的大小均为 90 3bp ,与fedF/ab基因大小一致。其中大肠埃希氏菌F10 7/ 86、YCED1、C和 12F株的fedF基因序列完全相同 ;只有YCED2株在第 181位碱基处存在 1个C→T的无义变异差异 ,D株在第 6 5 5位碱基处存在 1个T→C变异差异并在氨基酸水平出现 1个S→P变异。结果表明 。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 f18ab 菌毛 F亚单位 基因 克隆 仔猪水肿病

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致猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛单克隆抗体的研制及其初步应用 被引量：4

2

作者 吴晓东 高崧 +1 位作者 张如宽 刘秀梵 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期19-21,共3页

将致猪水肿病大肠杆菌 F18ab菌毛提纯 ,以其免疫 BAL B/ c小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,经 3次融合 ,共筛选出 4株能稳定分泌针对 F18ab菌毛的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株 4 G8、4 H11、4 A2和 3A12 ,腹水单抗的直接凝集价最高可达 ... 将致猪水肿病大肠杆菌 F18ab菌毛提纯 ,以其免疫 BAL B/ c小鼠 ,利用淋巴细胞杂交瘤技术 ,经 3次融合 ,共筛选出 4株能稳定分泌针对 F18ab菌毛的特异单克隆抗体的杂交瘤细胞株 4 G8、4 H11、4 A2和 3A12 ,腹水单抗的直接凝集价最高可达 1∶ 32 0 0。免疫印迹试验表明 ,4株腹水单抗均可特异识别 F18ab菌毛 Mr 15 0 0 0左右的主要亚单位多肽。应用所研制的单抗对 11株猪水肿病大肠杆菌分离株 F18ab菌毛表达情况进行了检测 ,结果显示 ,上述分离株中F18ab菌毛的出现率为 72 .7% (8/ 11) ,检出的 F18ab菌毛阳性分离株的 O血清型均为 O1 39。 展开更多

关键词 大肠杆菌 猪 水肿病 f18ab菌毛 单克隆抗体

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产志贺毒素样大肠杆菌F18ab菌毛操纵子基因的体外非诱导系统的表达和鉴定

3

作者 吴娟 朱春红 +7 位作者 郁磊 羊扬 朱军 舒燕 包文斌 吴圣龙 Dieter M Schifferli 朱国强 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期1444-1447,1477,共5页

以产志贺毒素样大肠杆菌(SLTEC)F18ab血清型标准菌株107/86基因组DNA为模板,利用PCR技术成功扩增出编码F18ab完整菌毛操纵子fed基因,克隆入表达载体pBR322,经限制性内切酶酶切分析,DNA琼脂糖电泳鉴定并结合序列测定分析,构建和筛选出含... 以产志贺毒素样大肠杆菌(SLTEC)F18ab血清型标准菌株107/86基因组DNA为模板,利用PCR技术成功扩增出编码F18ab完整菌毛操纵子fed基因,克隆入表达载体pBR322,经限制性内切酶酶切分析,DNA琼脂糖电泳鉴定并结合序列测定分析,构建和筛选出含fed完整基因正确插入的pBR322-fed重组质粒,将上述重组质粒转化至不含任何菌毛结构的大肠杆菌SE5000,该表达重组菌能分别与兔抗F18ab亚单位蛋白FedF高免血清、鼠抗F18ab菌毛a单因子单克隆抗体、兔抗F18ab菌毛高免血清和抗F18ab菌毛IgG抗体产生明显的凝集反应。用热抽提法分别抽提和纯化SLTEC F18ab标准株107/86和重组菌SE5000(pBR322-fed)体外表达的F18ab菌毛,纯化菌毛经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色获单一相对分子质量约为15 000蛋白条带。Western-blotting结果表明:兔抗F18ab菌毛高免血清能特异性识别SLTEC F18ab标准株107/86和重组菌SE5000(pBR322-fed)所提纯的单一主要结构蛋白。用重组菌SE5000(pBR322-fed)进行易感仔猪小肠上皮细胞体外黏附试验和黏附抑制试验,结果表明:重组菌SE5000(pBR322-fed)和SLTEC F18ab标准株107/86一样具有较强的黏附易感仔猪小肠上皮细胞的能力,而兔抗F18ab菌毛高免血清能有效地抑制上述重组菌SE5000(pBR322-fed)和SLTEC F18ab标准株107/86对易感仔猪小肠上皮细胞的黏附结合。 展开更多

关键词 产志贺毒素样大肠杆菌 f18ab菌毛 fed基因 表达 黏附

原文传递

猪水肿病大肠杆菌F18ab菌毛A亚单位与志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位的联合表达

4

作者 姜连连 董国雄 +2 位作者 徐建生 董辉 黄兵 《动物医学进展》 CSCD 2005年第5期80-84,共5页

扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F1... 扩增、克隆和表达了水肿病大肠杆菌的致病因子F18ab 菌毛的主要亚单位FedA全基因(包括信号肽序列),并与现有的另一致病因子志贺样毒素Ⅱ型变异体A亚单位基因(stx 2eA)连接,然后进行联合表达。同时用已制备的抗Stx 2eA 单克隆抗体和抗F18ab菌毛单克隆抗体对联合表达的融合蛋白质进行检测鉴定。 展开更多

关键词 仔猪水肿病 f18ab菌毛 志贺样毒素Ⅱ型变异体 联合表达 融合蛋白

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致猪水肿病大肠杆菌毒力因子二重PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

5

作者 杨明柳 吴斌 +4 位作者 汤细彪 蔡利军 刘国平 蔡旭旺 陈焕春 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第9期996-999,共4页

本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法... 本试验分别针对志贺样毒素Ⅱ型变异体(SLT-Ⅱe)B亚基和F18ab菌毛fedA亚基保守序列设计2对引物,扩增长度分别为230 bp和510 bp,通过条件优化,建立了一种快速鉴定致猪水肿病大肠杆菌同时确定其致病因子的二重聚合酶链式反应(PCR)检测方法,对阳性扩增产物测序,结果都有很高的保守性。特异性试验和灵敏性试验表明:与其他6种猪常见致病菌(产毒多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、波氏杆菌、副猪嗜血杆菌、沙门菌和链球菌)无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为101cfu(D600为0.002)。通过该二重PCR检测方法对2004—2006年自猪肺、脑组织中分离的216株大肠杆菌进行鉴定,得到6株致猪水肿病大肠杆菌,其中3株既具有菌毛又产水肿毒素,另外3株仅产水肿毒素;菌毛阳性菌株占毒素阳性菌株的50%。 展开更多

关键词 致猪水肿病大肠杆菌 聚合酶链式反应 水肿毒素 f18ab菌毛

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致猪水肿病大肠埃希菌多重PCR检测方法的建立及应用 被引量：5

6

作者 李伟杰 赵耘 +3 位作者 魏财文 岂晓鑫 田野 蒋桃珍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第3期537-543,共7页

本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性... 本研究旨在建立一种快速鉴定致猪水肿病大肠埃希菌的多重PCR检测方法。分别针对大肠埃希菌16SrDNA、志贺毒素Stx2eA亚基和菌毛F18ab A亚基保守序列设计合成3对特异性引物,优化多重PCR反应条件,并进行特异性和敏感性检测。结果显示,阳性对照菌株扩增产物大小分别为1 062、733和313bp。特异性和灵敏性检测结果表明,与肠炎沙门菌、多杀性巴氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、副猪嗜血杆菌、支气管败血波氏杆菌和猪链球菌等猪常见致病菌均无交叉反应;菌体直接扩增法最低检出量为1 875CFU。利用建立的多重PCR检测方法对分离收集的128株大肠埃希菌进行鉴定,得到36株致猪水肿病大肠埃希菌,其中30株既有菌毛F18ab又产志贺毒素Stx2e,另外6株仅产志贺毒素Stx2e。结果表明,本试验所建立的多重PCR检测方法对致猪水肿病大肠埃希菌的快速诊断和流行病学调查具有一定的应用价值。 展开更多

关键词 猪水肿病 大肠埃希菌 志贺毒素Stx2e 菌毛f18ab

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大肠埃希氏菌F18菌毛FedF蛋白的表达与鉴定 被引量：3

7

作者 成大荣 徐建生 +2 位作者 丁爱云 孙怀昌 高崧 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第4期272-276,共5页

根据已发表的F18菌毛F亚单位的基因序列(fedF)设计了1对引物,利用PCR技术分别扩增到F18ab和F18ac菌毛的fedF编码序列,并按预定的阅读框架分别插入表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedF/ab与pPFedF/ac,... 根据已发表的F18菌毛F亚单位的基因序列(fedF)设计了1对引物,利用PCR技术分别扩增到F18ab和F18ac菌毛的fedF编码序列,并按预定的阅读框架分别插入表达载体pGEX 6p 1中谷胱甘肽转移酶(GST)基因的下游,获得重组质粒pPFedF/ab与pPFedF/ac,然后转化大肠埃希氏菌BL21获得重组菌PPFedF/ab与PPFedF/ac。测序结果表明,fedF编码序列大小均为837 bp,与GenBank中登录的FedF 结构编码序列(Z26520)大小一致。通过对菌体裂解物进行SDS PAGE电泳分析以及Western blotting鉴定,证明重组大肠埃希氏菌PPFedF/ab与PPFedF/ac均可以表达融合蛋白形式的FedF(分别命名为GST FedF/ab与GST FedF/ac)。 展开更多

关键词 大肠埃希氏菌 菌毛 f18ab F18ac FedF 表达

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^(188)Re-HAb18F(ab′)_2对荷肝癌动物的实验研究 被引量：5

8

作者 边惠洁 陈志南 +4 位作者 汪静 冯强 米力 余晓玲 邓敬兰 《中华核医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期280-281,共2页

关键词 肝癌 ^188Re-HAb18F(ab′)2 放射疗法

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抗人肝癌单抗片段抗体HAb18F(ab')_2的冻干工艺研究 被引量：7

9

作者 冯强 米力 +2 位作者 余晓玲 黄子才 陈志南 《生物技术通讯》 CAS 2002年第5期356-357,共2页

选择适合于HAb18F(ab')2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab')2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(... 选择适合于HAb18F(ab')2片段抗体的冻干保护剂及其冻干工艺,是确保该生物制品的质量关键之一,对不同种类和不同浓度的保护剂进行了研究,结果表明10%蔗糖对HAb18F(ab')2片段抗体冻干样品的剂型、外观、残水量(<3%)、复溶时间(<10s)、纯度(>95%)及稳定性没有影响。研究优化与保护剂相结合的适用于HAb18F(ab')2片段抗体的最佳冻干工艺,为抗体片段扩大生产提供依据。 展开更多

关键词 抗人肝癌单抗 片段抗体 HAb18f(ab)2 冻干工艺

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大肠杆菌F18菌毛操纵子全基因克隆、表达及生物学活性 被引量：4

10

作者 张建军 朱国强 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期790-794,共5页

利用PCR技术以猪产肠毒素大肠杆菌F18标准菌株107/86和2134P基因组DNA为模板成功地扩增出编码F18ab和F18ac完整菌毛操纵子fed基因。将它们分别克隆入表达质粒载体pET-22b(+),结合酶切和核苷酸序列分析证明了PCR预期扩增产物的正确性。... 利用PCR技术以猪产肠毒素大肠杆菌F18标准菌株107/86和2134P基因组DNA为模板成功地扩增出编码F18ab和F18ac完整菌毛操纵子fed基因。将它们分别克隆入表达质粒载体pET-22b(+),结合酶切和核苷酸序列分析证明了PCR预期扩增产物的正确性。然后将克隆的重组载体DNA转化至大肠杆菌BL21(DE3),构建和筛选出分别含F18ab和F18ac完整fed基因的重组菌,经过IPTG诱导表达,在电镜下观察到上述两种重组菌能分别大量表达F18ab和F18ac菌毛。用热抽提法提纯其诱导表达的F18ab和F18ac菌毛,经SDS-PAGE电泳和考马斯亮蓝染色发现提纯后菌毛获单一分子量约为15kDa蛋白条带,免疫家兔后制备出高效价的兔抗血清,玻板凝集试验和Western blot结果表明:体外诱导表达的F18ab和F18ac菌毛具有和野生F18菌毛相同的抗原性。用表达F18ab和F18ac菌毛的上述2株重组菌分别进行小肠上皮细胞体外吸附试验和吸附抑制试验,结果表明:2株重组菌和野生菌株一样具有较强的粘附易感仔猪小肠上皮细胞的能力,而用表达F18ab和F18ac重组菌提纯的菌毛制备出兔抗血清都能有效地抑制上述重组菌或野生菌株对易感仔猪小肠上皮细胞的吸附结合。 展开更多

关键词 产肠毒素大肠杆菌 F18菌毛 fed基因表达 生物活性

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经肝动脉灌注^(131)Ⅰ标记肝癌单抗片段[HAb_(18)F(ab’)_2]治疗原发性肝癌的护理 被引量：3

11

作者 江俊 吴少平 卢武胜 《西南国防医药》 CAS 2004年第5期538-539,共2页

关键词 经肝动脉灌注 ^131I 肝癌 单抗片段 HAb18F(ab’)2 原发性肝癌 护理措施 肿瘤

暂未订购