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丙型肝炎病毒(HCV)荧光PCR(F-PCR)试剂盒的研制及与免疫学方法的比较 被引量:10
1
作者 程钢 何蕴韶 +1 位作者 周新宇 李虎 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第7期464-468,共5页
目的:用荧光PCR(Fluorescence PCR,F-PCR)方法研制丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)RNA检测试剂盒,通过临床验证,考核其性能,并与免疫学方法比较。方法:F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧... 目的:用荧光PCR(Fluorescence PCR,F-PCR)方法研制丙型肝炎病毒(Hepatitis C Virus,HCV)RNA检测试剂盒,通过临床验证,考核其性能,并与免疫学方法比较。方法:F-PCR是PCR和荧光探针杂交技术结合所产生的PCR方法。由于采用完全闭管荧光检测,避免了PCR后处理导致的假阳性污染;又采用了荧光检测技术,可以提高检测的灵敏度。结果:设计合成了HLV F-PCR诊断试剂盒。检测了 512份临床血清标本,以美国 Abbott公司的HCV ELISA诊断试剂盒和美国Biotronics公司的HCV荧光RT-PCR诊断试剂盒(B-PCR)为对照。阳性率30.5%,灵敏度97.3%,特异性98.1%。结论:F-PC的灵敏度显著优于ELISA,也高于B-PCR;三者的特异性无统计学差异。F-PCR试剂盒可以检测HCV的真实感染情况,对于临床诊断和疗效考察有一定的指导意义。 展开更多
关键词 荧光PCR 丙型肝炎病毒 诊断试剂盒 HCV 丙型肝炎 诊断 免疫学诊断 荧光聚合酶链反应
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F亚群禽白血病病毒SYBR GreenⅠ荧光定量PCR方法的建立 被引量:1
2
作者 潘洪艳 李锦群 +2 位作者 李琪 袁伊琳 曹伟胜 《广东畜牧兽医科技》 2025年第2期23-29,共7页
为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适... 为精准检测F亚群禽白血病病毒(ALV⁃F),该研究针对ALV⁃F流行毒株env基因设计了一对特异性引物F1/F2,建立了ALV⁃F的SYBR GreenⅠ荧光定量PCR检测方法。条件优化试验结果显示,该方法最适退火温度为64.5℃,最适引物浓度为0.4μM。利用最适反应条件建立的标准曲线方程为y=-3.303x+42.525,R2=0.997,扩增效率E=100.8%,重组质粒标准品拷贝数与Ct值具有良好的线性关系。特异性试验结果表明,该方法仅能特异性检测ALV⁃F,对ALV⁃A、ALV⁃B、ALV⁃J、ALV⁃K、禽流感病毒(AIV)、马立克病毒(MDV)、网状内皮组织增生病病毒(REV)和鸡传染性贫血病病毒(CIAV)无交叉反应;敏感试验结果表明,该方法最低检测限度为4.67×10^(2)拷贝/μL,敏感性是普通PCR的1000倍;稳定性试验结果表明,批间和批内稳定性试验的变异系数均小于2%。利用该方法、ALV p27 ELISA和普通PCR方法分别对23份七彩山鸡胚所制备的原代细胞(PEF)样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率均为95.65%(22/23),而ALV p27 ELISA阳性检出率仅为39.13%(9/23),该方法与普通PCR总符合率为100%,与ALV p27 ELISA总符合率为43.48%;进一步利用该方法、病毒分离法(结合ALV p27 ELISA)和普通PCR方法分别对20份七彩山鸡抗凝血样品进行检测,结果显示该方法和普通PCR方法阳性检出率分别为100.00%(20/20)和75.00%(15/20),两者总符合率为75.00%,而病毒分离法阳性检出率为0.00%(0/20)。本研究建立的方法具有良好的特异性、敏感性和稳定性,能够有效检测临床样品,可以为ALV⁃F的精准检测提供技术支持。 展开更多
关键词 禽白血病 ALV⁃F SYBR GreenⅠ荧光定量PCR
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生食动物性水产品中单增李斯特氏菌TaqMan实时荧光PCR检测法和国标法的比较研究 被引量:1
3
作者 刘爱芳 郑尔美 +2 位作者 王涵铮 毛展华 朱伟志 《食品安全导刊》 2025年第14期75-83,共9页
目的:针对生食动物性水产品中单增李斯特氏菌的检测需求,系统比较TaqMan实时荧光PCR与国家标准检测法的技术特性,以优化检测流程并提升食源性致病菌监控效率。方法:通过特异性实验筛选TaqMan检测体系的最佳引物探针组合,验证其灵敏度与... 目的:针对生食动物性水产品中单增李斯特氏菌的检测需求,系统比较TaqMan实时荧光PCR与国家标准检测法的技术特性,以优化检测流程并提升食源性致病菌监控效率。方法:通过特异性实验筛选TaqMan检测体系的最佳引物探针组合,验证其灵敏度与检测稳定性;对5类市售生食水产品(泥螺、即食海蜇丝、呛蟹、北极虾、三文鱼)进行检测,评估两种方法的检测效能差异。结果:筛选获得LIS2最优引物探针组合,其检测灵敏度达6×10^(2) CFU·mL^(-1);20 d稳定性实验显示6×10^(3) CFU·mL^(-1)菌悬液的Ct值变异系数为1.89%,稳定性良好。在对20份市售样品的检测中,两种方法阳性检出率完全一致。TaqMan法单样检测耗时较国标法缩短至50 h,但需依赖核酸扩增设备。结论:TaqMan实时荧光PCR适用于大批量样本初筛,建议与噬菌体裂解技术联用实现活菌检测;国标法作为确认方法对阳性样本进行复核评估,可以确保检测合规。研究证实建立“分子初筛-培养确认”的联合检测体系可提升检测效率,为食品微生物快检技术标准化及生食水产品安全监管提供数据支撑。 展开更多
关键词 单增李斯特氏菌 TaqMan实时荧光PCR 生食动物性水产品 国标法
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肝片形吸虫种类鉴定PCR方法的建立 被引量:7
4
作者 罗洪林 钟晓艳 +2 位作者 汤忠进 胡晓峰 聂奎 《西南师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期86-90,共5页
为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,... 为了建立一种快速鉴定肝片吸虫种类的特异PCR方法,以肝片形吸虫基因组DNA为模板,以前后盘吸虫,胰阔盘吸虫,日本分体吸虫,牛弓首蛔虫、大片吸虫gDNA为对照,用肝片形吸虫特异性引物ITS-1、ITS-2进行PCR扩增,PCR产物经1.0%琼脂糖凝胶电泳,紫外透射仪观察;用核酸蛋白测定仪测定肝片形吸虫gDNA的浓度,然后将gDNA原液进行不同倍数的稀释,筛选最佳条件,进行敏感性检测.结果显示只有肝片吸虫样品有特异性条带,对照样品均呈阴性;可以检测到的最低DNA浓度分别为1.17 ng/μL、0.59 ng/μL. 展开更多
关键词 肝片吸虫 PCR 鉴定
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基于小麦白粉病菌rDNA ITS序列的PCR分子检测 被引量:17
5
作者 曾晓葳 骆勇 +1 位作者 周益林 段霞瑜 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期211-214,共4页
Wheat powdery mildew(Blumeria graminis f.sp.tritici) is the one of main wheat diseases in China.Based on the internal transcribed spacer(ITS) sequences of ribosome of B.graminis f.sp.tritici,three molecular primer pai... Wheat powdery mildew(Blumeria graminis f.sp.tritici) is the one of main wheat diseases in China.Based on the internal transcribed spacer(ITS) sequences of ribosome of B.graminis f.sp.tritici,three molecular primer pairs(F1/R,F2/R and F3/R) were designed to detect the fungal pathogen of wheat powdery mildew.The species specificity of these primers was confirmed.F1/R was demonstrated a higher sensitivity than the other two primer pairs,and could detect as low as 1 pg DNA of B.graminis f.sp.tritici.Furthermore,F1/R primer pair was used to detect the pathogen DNA extracted from wheat leaves showing chlorosis and typical symptoms of powdery mildew caused by artificial inoculation with B.graminis f.sp.tritici.The preliminary results demonstrated the usefulness of this primer pair and its potential applications in efficient detection of wheat powdery mildew pathogen from leaves with latent infections at early growth stages of wheat. 展开更多
关键词 小麦白粉病菌 PCR分子检测 ITS序列 RDNA 小麦病害 小麦产量 预测预报 白粉菌
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鸡毒支原体强毒株与F疫苗株双重PCR检测方法的建立 被引量:9
6
作者 丁亮 魏建忠 李郁 《中国微生态学杂志》 CAS CSCD 2011年第5期467-469,共3页
目的建立能同时检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR技术。方法根据鸡毒支原体(MG)R株的PvpA基因序列和F疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2对引物R1、R2和F1、F2,在单一PCR的基础上,建立检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR方法,并运用... 目的建立能同时检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR技术。方法根据鸡毒支原体(MG)R株的PvpA基因序列和F疫苗株假定的α磷酸海藻糖酶基因序列,设计2对引物R1、R2和F1、F2,在单一PCR的基础上,建立检测MG强毒株和F疫苗株的双重PCR方法,并运用该双重PCR方法对临床样品进行检测。结果在330 bp和444 bp处分别出现预期的特异性DNA扩增条带,敏感性试验显示该体系能检测出0.45 ng的MG R株DNA和0.25 ng的MG F疫苗株DNA。临床样品MG强毒株阳性检出率为79.69%,高于常规分离培养鉴定法。结论成功建立检测两种毒株的双重PCR技术,为根除鸡群中MG野毒株、建立无MG的阴性鸡群提供新的技术手段。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 R强毒株 F疫苗株 双重PCR
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鸭新城疫病毒山东株的分离鉴定 被引量:18
7
作者 张太翔 王炳军 +6 位作者 王裕 田国华 田国宁 张金玲 韩光来 韩亮 张丽萍 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2009年第7期148-151,共4页
笔者从病鸭体内分离到一株病毒,通过试验确定为新城疫病毒。参照世界动物卫生组织(OIE)规定的新城疫毒力判定的标准和方法,测定该分离株的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)分别为1.79和2.45。采用已经发表的鸡... 笔者从病鸭体内分离到一株病毒,通过试验确定为新城疫病毒。参照世界动物卫生组织(OIE)规定的新城疫毒力判定的标准和方法,测定该分离株的1日龄雏鸡脑内致病指数(ICPI)和6周龄鸡静脉致病指数(IVPI)分别为1.79和2.45。采用已经发表的鸡新城疫病毒序列设计引物,应用RT-PCR技术扩增鸭源新城疫病毒的F基因,并将其克隆至载体上,然后进行了核苷酸序列、氨基酸序列测定,结果表明该分离株为新城疫强毒株。 展开更多
关键词 鸭源新城疫 分离鉴定 F基因 RT-PCR 序列分析
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新城疫病毒(长春株)F蛋白基因的克隆和序列分析 被引量:24
8
作者 王兴龙 金宁一 +6 位作者 丁壮 金扩世 罗坤 郭志儒 王宏伟 欧阳红生 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第2期109-113,共5页
新城疫病毒(NDV)长春株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV长春株的全长F基因。将该F基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该F基因核苷酸长度为175... 新城疫病毒(NDV)长春株在鸡胚增殖后纯化,提取RNA,然后利用特异性引物,经RT-PCR一次性扩增出了NDV长春株的全长F基因。将该F基因插入pKS(-)后,进行了序列测定。序列分析表明,该F基因核苷酸长度为1758bp,编码553个氨基酸,序列中有6个糖基化位点,13个半胱氨酸残基,裂解位点区(112~117)氨基酸序列为Gly-Arg-Gln-Gly-Arg-Leu,与所有弱毒株在这一区域的序列(Gly-Arg/Lys-Gln-Gly/Ser-Arg-Leu)相符,证明长春株为弱毒株。同源性分析表明,长春株F基因与目前国外发表的其他NDVF基因相比,核苷酸序列同源性在88%~99%之间。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F蛋白基因 RT-PCR 序列分析
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鹅源副粘病毒NA-1株F蛋白基因的克隆及其载体的构建 被引量:15
9
作者 左玉柱 乔木 +4 位作者 王学理 向华 黄海楠 常爽 丁壮 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期436-438,共3页
鹅源副粘病毒分离株 NA- 1经 1 1日龄鸡胚增殖后收集尿囊液 ,浓缩 ,提取病毒基因组总 RNA,采用 RT- PCR方法 ,一次性扩增出与预期大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯回收后克隆入 p MD1 8- T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,对阳性... 鹅源副粘病毒分离株 NA- 1经 1 1日龄鸡胚增殖后收集尿囊液 ,浓缩 ,提取病毒基因组总 RNA,采用 RT- PCR方法 ,一次性扩增出与预期大小相符的特异性条带。将扩增产物提纯回收后克隆入 p MD1 8- T载体 ,经转化、筛选及酶切鉴定后 ,对阳性克隆进行了序列测定和序列分析。测序后拼接的 F基因长 1 6 72 bp,包含完整的开放阅读框 ( 1 6 6 2bp) ,编码 5 5 3个氨基酸 ,F蛋白裂解位点的氨基酸顺序为 1 1 2 R- R- Q- K- R- F1 1 7,与 NDV的强毒株特征相符 ,同时也与鹅副粘病毒分离株致病性试验结果相符。根据 NDV基因分型标准 ,鹅源副粘病毒 NA- 1株归属基因 型 NDV。将 F基因克隆入转座载体 p Fast Bac ,得到重组转座载体 PFF,将 PFF转化大肠杆菌 DH1 0 Bac,提取质粒 ,得到阳性重组穿梭载体 re- Bacm id。 展开更多
关键词 鹅副粘病毒病 F蛋白基因 RT-PCR 克隆 序列分析
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四株新城疫病毒流行株F基因的遗传变异分析 被引量:5
10
作者 王兴龙 金宁一 +5 位作者 丁壮 金扩世 米志强 王宏伟 郭志儒 殷震 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第2期123-126,共4页
设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,P1和P2 用于扩增新城疫病毒 (NDV)全长F基因 ,P3 和P4 用于扩增NDV部分F基因。通过RT_PCR一次性扩增了NDV四平株和长春株的全长F基因和青岛株、昌黎株的部分F基因。将这些基因分别克隆后 ,进行了序列测... 设计并合成了两对寡核苷酸引物 ,P1和P2 用于扩增新城疫病毒 (NDV)全长F基因 ,P3 和P4 用于扩增NDV部分F基因。通过RT_PCR一次性扩增了NDV四平株和长春株的全长F基因和青岛株、昌黎株的部分F基因。将这些基因分别克隆后 ,进行了序列测定和同源率、致病性、疏水性、抗原性和系统发育等比较分析。结果表明 ,四平株和长春株F基因同为176 2bp ,编码 5 5 3个氨基酸。两种F基因推导的氨基酸序列的疏水性相似 ,都具有 3个强疏水区 ,但亲水性有差异 ,抗原表位也有明显的不同 ,说明四平株和长春株F蛋白的抗原性不同。 4株NDVF基因序列 (1~ 813bp)和推导的氨基酸序列 (2 6 1aa)与我国台湾和国外有代表性的NDVF基因相同区域进行了比较和系统发育分析。总体上 ,核苷酸序列同源率在 82 .9%~ 97.5 %之间 ,推导的氨基酸序列同源率在 85 .8%~ 97.7之间 ,长春株与LaSota、TexasGB、Beaudette在同一亚群 ,四平株、昌黎株在同一亚群 ,青岛株为另一亚群。四平株、青岛株和昌黎株F蛋白裂解位点区 (112~ 117aa)的氨基酸序列与强毒株在这一区域的序列相符 ,证明这 3个NDV毒株是强毒株 ,长春株F蛋白裂解位点区的氨基酸序列与弱毒株的序列相符 。 展开更多
关键词 长春株 四平株 昌黎株 青岛株 新城疫病毒 流行株 F基因 遗传变异
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牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量:11
11
作者 李建 高航飞 +7 位作者 安维雪 牛同州 赵永春 遇培之 满都拉图 乌力吉那仁 王建国 申之义 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第6期1059-1064,共6页
本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检... 本研究旨在建立一种快速检测牛支原体(Mycoplasma bovis)的实时荧光定量PCR检测方法。根据GenBank中收录的牛支原体OPPD/F基因序列(登录号:AF130119),利用Primer 5.0软件设计特异性引物与TaqMan探针,以重组质粒作为绝对定量模板,构建检测牛支原体的TaqMan实时荧光定量PCR检测方法。结果显示该检测方法线性关系良好,标准曲线的相关系数R2=0.994,扩增效率E=1.280。荧光定量PCR法检测的敏感性是常规PCR的10倍;特异性良好,检测9种相关细菌和病毒均为阴性;重复性好,组内及组间样本检测Ct值均小于2%。牛支原体TaqMan实时荧光定量PCR检测方法较之于常规PCR方法有快速、特异性强、敏感性高、稳定性好的优点。 展开更多
关键词 牛支原体 0PPD/F基因 荧光定量PCR
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人乳头状瘤病毒16、18型感染的检测分析 被引量:3
12
作者 俞信忠 吴满武 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第12期1776-1777,共2页
目的了解健康体检妇女、宫颈炎和阴道炎患者人乳头状瘤病毒(HPV)16、18型的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对382例健康体检妇女、118例宫颈炎和阴道炎患者进行了人乳头状瘤病毒16、18型检测。结果在382例健康体检妇女中,... 目的了解健康体检妇女、宫颈炎和阴道炎患者人乳头状瘤病毒(HPV)16、18型的感染状况。方法采用荧光定量聚合酶链反应技术,对382例健康体检妇女、118例宫颈炎和阴道炎患者进行了人乳头状瘤病毒16、18型检测。结果在382例健康体检妇女中,检测出人乳头状瘤病毒16型阳性标本2例、人乳头状瘤病毒18型阳性标本1例,阳性率分别为0.52%、0.26%;在118例宫颈炎和阴道炎患者中检测出人乳头状瘤病毒16型阳性标本8例、人乳头状瘤病毒18型阳性标本3例,阳性率分别为6.78%、2.54%;健康体检妇女组与宫颈炎和阴道炎患者组比较,人乳头状瘤病毒16、18型感染率,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论在宫颈炎和阴道炎患者中人乳头状瘤病毒16、18型均有较高的感染率。 展开更多
关键词 人乳头状瘤病毒 荧光定量聚合酶链反应 宫颈炎 阴道炎
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新城疫病毒(青岛株)F蛋白基因的克隆和序列分析 被引量:8
13
作者 王兴龙 金宁一 +6 位作者 丁壮 金扩世 米志强 郭志儒 李太元 吕杰 殷震 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期113-116,共4页
参考新城疫病毒 ( NDV)长春株的 F基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV青岛株(野毒 )的 F基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩出的 F基因核苷酸长度为 792 bp,编码 2 6 1个氨基酸 ,包括完整的 F2片段和部分 F1片段。... 参考新城疫病毒 ( NDV)长春株的 F基因序列设计了 1对特异性引物 ,应用 RT-PCR对 NDV青岛株(野毒 )的 F基因进行了扩增 ,扩增产物克隆后测序。扩出的 F基因核苷酸长度为 792 bp,编码 2 6 1个氨基酸 ,包括完整的 F2片段和部分 F1片段。裂解位点区 ( 1 1 2~ 1 1 7aa)氨基酸序列为 Arg-Arg-Gln-Arg-Arg-Phe,与国外发表的强毒株序列相符 ,证明青岛株为强毒株。根据该基因推导的氨基酸序列 ,与国内外发表的 NDVF蛋白氨基酸序列相比 ,同源性为 88.1 %~ 94 .3%。 展开更多
关键词 新城疫病毒 F蛋白基因 RT-PCR 序列分析 基因克隆 青岛株
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B亚型禽偏肺病毒逆转录套式PCR检测方法的建立与应用 被引量:6
14
作者 薛聪 刁有祥 +4 位作者 唐熠 陈琳 鞠小军 崔京腾 欧全宾 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期171-174,180,共5页
根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高... 根据GenBank发布的B亚型禽偏肺病毒Fusion(F)基因的保守序列设计2对引物,建立了一种适用于B亚型禽偏肺病毒的逆转录套式PCR检测方法。采用该方法对B亚型禽偏肺病毒山东分离株进行检测,可以特异性地扩增出415bp的目的片段。此方法具有高度特异性和敏感性,以H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、传染性喉气管炎病毒作为模板进行扩增,结果均为阴性。经检测,该方法第1次PCR扩增的敏感性为107copies/μL,第2次扩增的敏感性为102copies/μL,第2次扩增敏感性比第1次高105倍。应用本方法对采自山东省不同地区的64份可疑临床病料进行检测,最终从64份疑似病料中检测出37份为阳性。结果表明,所建立的套式PCR检测方法具有特异、敏感、实用等优点,为B亚型禽偏肺病毒的快速诊断以及深入研究奠定了基础。 展开更多
关键词 B亚型禽偏肺病毒 F基因 逆转录套式PCR
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一个快速响应干旱的F-box基因的克隆和表达分析 被引量:9
15
作者 尹恒 余琴鸯 +1 位作者 安利佳 李文利 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期1027-1034,共8页
F-box是Skp1-Cullin1-F-box(SCF)型泛素连接酶E3的重要组成部分,在泛素化介导的蛋白质降解中选择性识别靶蛋白。本文从谷子苗期干旱胁迫条件下构建的转录组文库中克隆了与耐旱早期响应相关的F-box基因,命名为SiFBX(GenBank登录号为KC252... F-box是Skp1-Cullin1-F-box(SCF)型泛素连接酶E3的重要组成部分,在泛素化介导的蛋白质降解中选择性识别靶蛋白。本文从谷子苗期干旱胁迫条件下构建的转录组文库中克隆了与耐旱早期响应相关的F-box基因,命名为SiFBX(GenBank登录号为KC252635.1)。该基因全长510 bp,编码170个氨基酸。蛋白质结构预测表明,该蛋白含有丰富的精氨酸、亮氨酸、丝氨酸,缺少跨膜结构域及信号肽序列。系统进化分析表明,该基因与已报道的EID1和FBW4亲缘关系较近。在该基因上游1.9 kb序列处,预测到启动子的核心序列及与多种逆境胁迫相关的调控序列。荧光定量PCR分析表明,该基因分别在正常干旱、PEG和ABA诱导下,表达量出现显著变化。 展开更多
关键词 谷子 干旱响应 F-BOX gRT-PCR
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应用逆转录套式PCR检测新城疫病毒核酸 被引量:12
16
作者 黄庚明 辛朝安 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第4期295-299,共5页
选择NDV融合蛋白保守的编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCR法 ,通过检测NDV感染的实验室病料和临床病料。结果表明 ,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约 0 .3pg的NDVRNA ,攻毒后... 选择NDV融合蛋白保守的编码区域 ,设计并合成了一对外引物和一对内引物 ,建立并优化了检测新城疫病毒核酸的逆转录套式PCR法 ,通过检测NDV感染的实验室病料和临床病料。结果表明 ,逆转录套式PCR法最低能鉴别出约 0 .3pg的NDVRNA ,攻毒后第 8天还能从非免疫鸡和SPF鸡泄殖腔拭子中检出NDV ,第 8天非免疫鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 5 / 10 ,第 8天SPF鸡泄殖腔拭子中NDV的最大检出率为 6/ 10。对非免疫鸡和SPF鸡的泄殖腔中NDV最佳检出时间均在攻毒后第 5天。逆转录套式PCR方法对临床样品中NDV的最大检出率为 6/ 7。经核酸杂交验证 ,该法具有很高的特异性和敏感性 ,也比较简便快速 ,为从分子水平探讨NDV的发病机理、临床早期快速诊断提供了新的研究手段。 展开更多
关键词 新城疫病毒 融合蛋白基因 逆转录套式PCR 检测 病毒核酸
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应用PCR-RFLP和巢式PCR检测黄瓜尖镰孢菌 被引量:7
17
作者 陈微 李永刚 文景芝 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期209-214,共6页
以3株黄瓜尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumarinum)、23株镰孢菌属(Fusarium spp.)真菌和分离自土壤的20株真菌、6株细菌和7株放线菌为材料,采用化学裂解法提取总DNA,进行PCR-RFLP和巢式PCR检测,试验证明PCR-RFLP程序不能完全... 以3株黄瓜尖镰孢菌(Fusarium oxysporum f. sp. cucumarinum)、23株镰孢菌属(Fusarium spp.)真菌和分离自土壤的20株真菌、6株细菌和7株放线菌为材料,采用化学裂解法提取总DNA,进行PCR-RFLP和巢式PCR检测,试验证明PCR-RFLP程序不能完全区分Fusarium属内不同种,而巢式PCR对黄瓜尖镰孢菌具有特异性。运用优化的PCR-RFLP和巢式PCR检测程序对染病黄瓜组织进行了检测,结果表明,两种方法均可在接种发病早期(未显症时)检测出黄瓜枯萎病菌,PCR-RFLP在感病品种接种后3d即可检测到病原菌,而巢式PCR在接种后5d才能检测到病原菌。 展开更多
关键词 黄瓜枯萎病 黄瓜尖镰孢菌 PCR—RFLP 巢式PCR
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马铃薯接骨木镰刀菌的分子检测 被引量:3
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作者 高云飞 闵凡祥 +5 位作者 王文重 杨帅 魏琪 吕典秋 郭梅 吕涛 《中国马铃薯》 2015年第1期28-33,共6页
接骨木镰刀菌是马铃薯干腐病的主要致病菌,给黑龙江省马铃薯造成了一定的经济损失。采用马铃薯干腐病引物LDJ1对马铃薯干腐病、马铃薯晚疫病、马铃薯早疫病、马铃薯黑痣病的致病菌的ITS序列进行测定,只有马铃薯干腐病菌扩增出560 bp特... 接骨木镰刀菌是马铃薯干腐病的主要致病菌,给黑龙江省马铃薯造成了一定的经济损失。采用马铃薯干腐病引物LDJ1对马铃薯干腐病、马铃薯晚疫病、马铃薯早疫病、马铃薯黑痣病的致病菌的ITS序列进行测定,只有马铃薯干腐病菌扩增出560 bp特异性片段。再分别对接骨木镰刀菌、燕麦镰刀菌和茄病镰孢变种的ITS序列进行BLAST比对分析,针对接骨木镰刀菌设计了特异引物L2,扩增特异性产物为278 bp,该引物所建立的PCR检测体系可检测DNA含量在50 pg/μL以上的目的基因。 展开更多
关键词 马铃薯 ITS PCR 接骨木镰刀菌 分子检测
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鹅副粘病毒上海株的分子鉴定 被引量:9
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作者 单松华 邹键 +3 位作者 姚龙涛 胡永强 何水林 龚祖埙 《上海农业学报》 CSCD 2002年第4期70-73,共4页
对新近分离的鹅副粘病毒SF0 2株采用RT PCR方法 ,扩增部分F基因进行测序 ,其裂解位点的序列为112 R R Q K R F117,与新城疫病毒强毒株的特征相符。通过对其F基因与我国大陆新城疫强毒F4 8E9株、疫苗毒Lasota株比较 ,发现该毒株的F基因... 对新近分离的鹅副粘病毒SF0 2株采用RT PCR方法 ,扩增部分F基因进行测序 ,其裂解位点的序列为112 R R Q K R F117,与新城疫病毒强毒株的特征相符。通过对其F基因与我国大陆新城疫强毒F4 8E9株、疫苗毒Lasota株比较 ,发现该毒株的F基因已发生了较大的变异 ,而与1999年在我国台湾省流行的新城疫病毒基因Ⅶ型有很高的同源性。 展开更多
关键词 上海株 分子鉴定 鹅副粘病毒 新城疫病毒 F基因 序列分析 RT-PCR
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正交试验优化八角ISSR-PCR反应体系 被引量:1
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作者 冯丹 宁德鲁 +4 位作者 陈少瑜 李勇杰 张艳丽 吴涛 陈海云 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期65-69,共5页
利用正交试验设计研究Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物(UBC 886)、dNTP、Mg2+浓度5个因素对云南八角ISSR-PCR反应的影响,建立其最佳反应体系。结果表明:25μL的反应体系中5个因子的最佳水平为:Mg2+3 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板0... 利用正交试验设计研究Taq DNA聚合酶、DNA模板、引物(UBC 886)、dNTP、Mg2+浓度5个因素对云南八角ISSR-PCR反应的影响,建立其最佳反应体系。结果表明:25μL的反应体系中5个因子的最佳水平为:Mg2+3 mmol/L、Taq DNA聚合酶0.5 U、DNA模板0.016 ng、引物0.8μmol/L、dNTPs 0.2 mmol/L。PCR最佳反应程序为:94℃预变性5 min;94℃变性30 s,46℃退火45 s,72℃延伸1 min,40次循环;72℃最后延伸7 min,4℃保存。 展开更多
关键词 八角 ISSR-PCR反应 正交设计 体系优化
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