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基于改进的EfficientNet-B0网络的失能老人表情识别研究
1
作者 李苏 何巍 《四川师范大学学报(自然科学版)》 2026年第1期97-105,共9页
为了能够更好地关注失能老人的情绪状态,针对传统模型在处理大规模参数、长时间训练以及捕获长距离依赖方面的问题,同时确保模型的轻量化以便于部署,提出一种改进的EfficientNet-B0模型用于表情识别.首先,利用迁移学习加速模型训练,以... 为了能够更好地关注失能老人的情绪状态,针对传统模型在处理大规模参数、长时间训练以及捕获长距离依赖方面的问题,同时确保模型的轻量化以便于部署,提出一种改进的EfficientNet-B0模型用于表情识别.首先,利用迁移学习加速模型训练,以减少对大规模数据的需求和加快训练速度;然后,对EfficientNet-B0结构进行了简化处理,可以降低模型的复杂度,提高运算效率;最后,引入非局部模块以增强全局特征关联性.实验结果显示,改进的EfficientNet-B0模型在RAF-DB和FER2013两个数据集上的识别率分别为88.40%和75.30%,这表明改进的方法在提高EfficientNet-B0模型性能方面取得了一定的成效. 展开更多
关键词 失能老人 表情识别 长距离依赖 迁移学习 非局部模块
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猪lncRNA5791的表达模式及互作蛋白质分析 被引量：1
2
作者 张冬杰 马守正 +1 位作者 汪亮 刘娣 《江苏农业学报》 北大核心 2025年第1期112-118,共7页
为了揭示冷刺激下lncRNA5791的应答模式,本研究利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)、核质分离技术、RNA沉降(Pull down)技术全面分析lncRNA5791生物功能。结果表明,lncRNA5791在冷刺激处理的民猪背部脂肪和腹股沟脂肪中相对表达量较高,... 为了揭示冷刺激下lncRNA5791的应答模式,本研究利用实时荧光定量PCR技术(qRT-PCR)、核质分离技术、RNA沉降(Pull down)技术全面分析lncRNA5791生物功能。结果表明,lncRNA5791在冷刺激处理的民猪背部脂肪和腹股沟脂肪中相对表达量较高,在臀部脂肪中相对表达量较低。冷刺激处理后猪不同部位脂肪中lncRNA5791的相对表达量均极显著高于常温对照(P<0.01)。lncRNA5791定位于猪的9号染色体,其在细胞核和细胞质中均有分布。在脂肪细胞增殖期,lncRNA5791的表达持续受到抑制;在脂肪细胞分化期,lncRNA5791的相对表达量呈现先升高后下降的趋势。质谱分析结果表明,lncRNA5791可能与膜联蛋白A2(ANXA2)、泛素A52残留核糖体蛋白融合产物1(UBA52)和组蛋白H4(H4)互作。本研究结果为揭示lncRNA5791在冷刺激应答中的具体调控机制奠定了重要基础。 展开更多
关键词 猪 lncRNA5791 相对表达量 亚细胞定位 互作蛋白
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基于扩展局部二值模式的多尺度人脸表情识别方法 被引量：1
3
作者 胡黄水 戚星烁 +1 位作者 王出航 王玲 《吉林大学学报(理学版)》 北大核心 2025年第5期1427-1436,共10页
针对人脸表情识别在复杂环境下姿态和光照鲁棒性差的问题,提出一种融合扩展局部二值模式和多尺度网络结构的人脸表情识别方法.该方法通过扩展传统局部二值模式的感受野并增强像素间的空间联系,减少光照对人脸表情识别的噪声干扰;通过将... 针对人脸表情识别在复杂环境下姿态和光照鲁棒性差的问题,提出一种融合扩展局部二值模式和多尺度网络结构的人脸表情识别方法.该方法通过扩展传统局部二值模式的感受野并增强像素间的空间联系,减少光照对人脸表情识别的噪声干扰;通过将特征图在通道维度均匀分为若干子集并利用不同数量相同卷积块的方式提取特征图的多尺度特征,有效处理人脸姿态变化.在数据集Fer2013和RAF-DB上的实验结果表明,该方法可有效提高人脸表情识别的准确率和鲁棒性,为复杂环境下的人脸表情识别提供了有效解决方案. 展开更多
关键词 人脸表情识别 局部二值模式 多尺度网络 卷积神经网络
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棉花GhCRK26基因克隆、亚细胞定位及表达分析
4
作者 李静 庞博 +9 位作者 张茹 扎尔加玛丽·阿不都别克 王正瑞 史顺宇 范珍珍 马晶晶 陈佳林 宋武 李生梅 高文伟 《华北农学报》 北大核心 2025年第6期62-70,共9页
富含半胱氨酸类受体激酶作为受体激酶重要亚家族,在植物生长发育中发挥关键作用。旨在解析GhCRK26基因与棉花纤维发育的关系,为棉花纤维品质改良提供理论基础。选用陆地棉系9和海岛棉新海16,采集纤维发育不同时期样本及根、茎、叶组织... 富含半胱氨酸类受体激酶作为受体激酶重要亚家族,在植物生长发育中发挥关键作用。旨在解析GhCRK26基因与棉花纤维发育的关系,为棉花纤维品质改良提供理论基础。选用陆地棉系9和海岛棉新海16,采集纤维发育不同时期样本及根、茎、叶组织。通过qRT-PCR分析GhCRK26基因表达模式;利用PCR技术克隆GhCRK26基因;借助生物信息学工具构建系统发育树,预测蛋白理化性质、跨膜结构及信号肽;运用PlantCare数据库分析启动子顺式作用元件;通过亚细胞定位试验明确蛋白定位。结果表明,GhCRK26基因在2个品种开花后10,20,30 d的表达量呈现极显著差异;在系9中叶片的表达水平最高,在新海16中,茎与叶的表达量未表现出显著差异。成功克隆获得2049 bp的CDS序列,编码682个氨基酸。进化树显示,GhCRK26蛋白与野西瓜苗亲缘关系最远,与夏威夷棉、海岛棉最近;该蛋白为亲水不稳定蛋白,含跨膜结构和信号肽;启动子区鉴定到茉莉酸甲酯和脱落酸响应元件;亚细胞定位证实其定位于细胞膜。以上研究为进一步深入解析GhCRK26基因在纤维发育中的功能提供了依据。 展开更多
关键词 棉花 纤维 GhCRK26 基因克隆 表达分析 亚细胞定位
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考虑碳交易的快慢车时刻表与停站方案综合优化
5
作者 贾富强 李恺强 +2 位作者 李引珍 马成正 冯子婷 《交通运输系统工程与信息》 北大核心 2025年第1期113-121,159,共10页
为构建可持续绿色城市轨道交通运输系统,降低城市轨道交通运营阶段碳排放量,本文提出结合碳交易的城市轨道交通快慢车时刻表与停站方案优化方法。首先,刻画不同乘客类型的乘车路径选择机理,提出乘客旅行时间计算方法;其次,通过计算列车... 为构建可持续绿色城市轨道交通运输系统,降低城市轨道交通运营阶段碳排放量,本文提出结合碳交易的城市轨道交通快慢车时刻表与停站方案优化方法。首先,刻画不同乘客类型的乘车路径选择机理,提出乘客旅行时间计算方法;其次,通过计算列车的牵引、通风空调、照明、信号系统碳排量,并将快慢车停站方案的碳排放量与碳交易相结合,反馈至企业运营成本中;然后,构建最小化乘客出行成本和企业运营成本的双目标非线性优化模型,设计越行站确定和基于Gurobi分区计算的两阶段求解算法;最后,给出算例,以验证模型和算法的有效性。通过算例分析可知,不同的越行站位置会产生不同的结果,相较于站站停模式,考虑碳交易的城市轨道交通快慢车开行模式使得乘客旅行时间降低5.8%,碳排放量降低17.4%,企业运营成本缩减5.3%。研究结果表明:考虑碳交易的快慢车组织在降低乘客旅行时间、碳排放量和企业运营成本方面效果显著,随着碳达峰的临近碳价格逐步上涨,碳交易机制将有效降低企业运营成本,激励企业积极地减少碳排放,从而推动城市轨道交通的可持续发展。 展开更多
关键词 城市交通 碳交易 Gurobi 快慢车 时刻表 停站方案
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紫花苜蓿MsNF-YB5基因的克隆及表达特性分析 被引量：1
6
作者 王之杰 张万军 《草地学报》 北大核心 2025年第3期686-695,共10页
研究发现异源表达拟南芥(Arabidopsis thaliana)QQS基因可显著提高紫花苜蓿的抗逆性,而MsNF-YB5是其发挥功能的关键内源基因。为探究MsNF-YB5在紫花苜蓿(Medicago sativa L.)胁迫响应过程中的功能,本研究克隆并完成了MsNF-YB5的生物信... 研究发现异源表达拟南芥(Arabidopsis thaliana)QQS基因可显著提高紫花苜蓿的抗逆性,而MsNF-YB5是其发挥功能的关键内源基因。为探究MsNF-YB5在紫花苜蓿(Medicago sativa L.)胁迫响应过程中的功能,本研究克隆并完成了MsNF-YB5的生物信息学分析、亚细胞定位、转录自激活检测及胁迫下的表达模式分析。结果显示,克隆获得的MsNF-YB5 cDNA编码156个氨基酸,与蒺藜苜蓿(Medicago truncatula)MtNF-YB5相似度最高,该基因启动子区域含有参与茉莉酸甲酯、脱落酸、防御与胁迫反应的顺式作用元件;亚细胞定位结果显示其具有细胞核定位,截短N端后具有酵母转录自激活活性。MsNF-YB5受盐胁迫、渗透胁迫、低氮胁迫、冷胁迫及脱落酸处理诱导表达。本研究为进一步研究MsNF-YB5功能以提高紫花苜蓿抗逆性提供了基础。 展开更多
关键词 紫花苜蓿 MsNF-YB5 亚细胞定位 自激活活性 胁迫表达模式
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油莎豆CeDHN1基因的克隆与表达分析
7
作者 郭静远 陈怡 +2 位作者 孔华 郭运玲 贾瑞宗 《热带农业科学》 2025年第7期1-7,共7页
油莎豆播种期长、产量高,是目前已知唯一在块茎器官中积累大量油脂的特种经济作物,具有广阔的综合利用前景。为了进一步提高油莎豆的品质和产量,积极筛选和鉴定相关的抗性基因,研究基于转录组数据,以油莎豆热研1号为材料,采用RT-PCR技... 油莎豆播种期长、产量高,是目前已知唯一在块茎器官中积累大量油脂的特种经济作物,具有广阔的综合利用前景。为了进一步提高油莎豆的品质和产量,积极筛选和鉴定相关的抗性基因,研究基于转录组数据,以油莎豆热研1号为材料,采用RT-PCR技术克隆了油莎豆脱水素基因CeDHN1包含完整ORF在内的708 bp cDNA序列。序列分析表明,CeDHN1预测编码235个氨基酸,理论分子量为25.97 kDa,等电点为5.2,总平均疏水指数为-1.383,不稳定系数为42.81,属于不稳定亲水蛋白。CeDHN1蛋白含有3个保守区域,即2个K片段和一个S片段,属于SKn型脱水素。亚细胞定位结果显示,CeDHN1定位在烟草叶片的细胞核。qRT-PCR分析显示,CeDHN1在油莎豆的根中的表达丰度最高,且显著高于其他组织。这些结果将为下一步的功能鉴定奠定坚实的基础。 展开更多
关键词 油莎豆 脱水素 基因克隆 表达分析 亚细胞定位
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水稻抗褐飞虱基因Bph3调控蛋白B8AK41的外源表达、纯化及亚细胞定位 被引量：1
8
作者 卿冬进 卢柏亦 +8 位作者 彭宇婧 戴高兴 陈韦韦 李经成 周维永 黄所生 潘英华 黄娟 邓国富 《西南农业学报》 北大核心 2025年第1期107-114,共8页
【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建... 【目的】外源表达获得B8AK41蛋白,并检测B8AK41蛋白亚细胞定位,为研究该蛋白在水稻抗褐飞虱上的生物学功能提供基础。【方法】对B8AK41蛋白序列进行跨膜区预测,构建原核表达载体诱导外源蛋白表达,纯化目标蛋白并鉴定蛋白多肽序列;构建双元表达载体并转入水稻原生质体检测蛋白亚细胞定位。【结果】通过对B8AK41蛋白的跨膜结构域分析,发现该蛋白第47~99位氨基酸区域可能存在跨膜结构域,因此选取第100~374位氨基酸进行外源表达蛋白片段。通过SDS-PAGE电泳分析外源表达的B8AK41蛋白,结果显示B8AK41蛋白在28℃IPTG诱导下成功表达,采用亲和层析方法可纯化得到分子量在35~40 kD的His6-B8AK41-His6融合蛋白。通过质谱分析纯化得到的蛋白,其中有3条属于B8AK41蛋白的肽段,证明外源表达纯化的B8AK41蛋白完全正确。采用荧光共聚焦显微镜观察到B8AK41蛋白定位在细胞内质网上。【结论】水稻抗褐飞虱基因Bph3的正调控蛋白B8AK41的非跨膜区能够在大肠杆菌中表达,通过亲和层析方法纯化得到融合蛋白His6-B8AK41-His6,后续可将B8AK41蛋白用于抗体制备。B8AK41蛋白定位在水稻细胞内质网上,为研究蛋白功能提供基础。 展开更多
关键词 水稻 褐飞虱 Bph3基因 B8AK41蛋白 外源表达 亚细胞定位
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基于不对称非局部高效信道注意时空网络面部表情识别
9
作者 闫静杰 孙雯静 +2 位作者 顾晓娜 周晓阳 魏金生 《南京邮电大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第3期77-86,共10页
为了从信道域、时间域、空间域多维度进行表情特征提取和学习,提出了一种新的不对称非局部高效信道注意时空网络(Asymmetric Non‑local Efficient Channel Attention Spatial‑temporal Net‑work,ANECASN)并应用于面部表情识别。ANECASN... 为了从信道域、时间域、空间域多维度进行表情特征提取和学习,提出了一种新的不对称非局部高效信道注意时空网络(Asymmetric Non‑local Efficient Channel Attention Spatial‑temporal Net‑work,ANECASN)并应用于面部表情识别。ANECASN主要包含3个模块:第一个模块为轻量型的不对称非局部模块,用于捕获长序列依赖关系,并在该模块中使用金字塔汇集优化特征选择机制以获得较好的局部情感特征,改善深度卷积运算在长序列上计算效率低且情感识别率低的问题;第二个模块为高效信道注意模块,给有利于情感识别的通道以高权重,可在不降维的同时实现局部跨信道交互,降低模型复杂度并增强情感的非线性表达能力以实现性能提优;第三个模块为时空LSTM模块,可通过学习情感特征的空间相关性以及情感特征序列的时间相关性,促进时空之间的信息交互。选择Multimodal和RAMAS数据库进行实验,结果表明,ANECASN在Multimodal Data‑base上达到了61.54%的识别率,在RAMAS上达到了42.49%的识别率,相较于基线ResNet‑50提高了至少5%。 展开更多
关键词 人脸表情 不对称非局部高效信道注意时空网络 不对称非局部 高效注意信道 时空LSTM
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文学与影视作品审美观新转向:方言征用与人物形象
10
作者 胡伟 《长江学术》 2025年第3期67-75,共9页
近年来,方言高频出现于文学及影视作品之中,避免了审美疲劳,显示了审美观的新转向。方言表现了人的神理,再现了典型环境中的典型人物,表达了人的文化内涵,是民众身份的符号标记。《白鹿原》《宝水》《繁花》《八佰》等作品的成功,会激... 近年来,方言高频出现于文学及影视作品之中,避免了审美疲劳,显示了审美观的新转向。方言表现了人的神理,再现了典型环境中的典型人物,表达了人的文化内涵,是民众身份的符号标记。《白鹿原》《宝水》《繁花》《八佰》等作品的成功,会激励更多现实主义作品使用方言。方言征用彰显了中国人物、中国故事、中国声音、中国气派。 展开更多
关键词 语言艺术 语言表达 人物塑造 方言叙事 地域色彩
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基于快慢车模式的宁波市域铁路象山线配线方案研究 被引量：2
11
作者 姚燕明 王韬 +1 位作者 宗二凯 漆天扬 《城市轨道交通研究》 北大核心 2025年第3期159-164,169,共7页
[目的]为支撑宁波市域形成“一主、一副、多中心”的市域空间格局的南翼重要辐射线,特对宁波市域铁路象山线(以下简称“象山线”)开行快慢车模式下的配线方案设计进行研究。[方法]依据客流预测结果,深入剖析全线断面客流及组团客流的特... [目的]为支撑宁波市域形成“一主、一副、多中心”的市域空间格局的南翼重要辐射线,特对宁波市域铁路象山线(以下简称“象山线”)开行快慢车模式下的配线方案设计进行研究。[方法]依据客流预测结果,深入剖析全线断面客流及组团客流的特征,并计算长距离通勤客流在本线客流中的占比,以此为基础,研究判定开行大站快车的必要性。结合本线的行车间隔、行车对数以及慢车与快车在线路上的运行时分,科学计算越行站的设置数量及其具体位置。同时,兼顾换乘便捷性要求,以提升客流服务水平;并依据线网规划,综合考量折返功能、远期延伸需求及工程条件预留,全面规划全线配线方案。[结果及结论]遵循象山线的功能定位及规划标准,最小行车间隔设定为2.5 min,结合牵引计算结果及停站时长,确定在塘溪站与大徐站设置越行站并配备越行线。大目湾站作为初期终点站,站后配置交叉渡线以满足折返作业,并预留延伸条件。横溪站作为规划宁波轨道交通12号线与象山线的接轨站及车辆段接轨站,站前与站后均设置交叉渡线,以满足接轨、折返及存车需求。南部新城站作为停车场接轨站,站后设停车场出入线及交叉渡线,确保折返与存车功能的实现。云龙火车站增设站前单渡线,以增强运营灵活性;贤庠站站前则配置故障车停车线及单渡线,以满足故障车辆的停放需求。 展开更多
关键词 市域铁路 快慢车模式 配线方案
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马铃薯StSnRK1α的基因表达及蛋白诱导分析
12
作者 蔡诚诚 李罗品 +4 位作者 刘石锋 温和 王强 杨翠芹 王西瑶 《四川农业大学学报》 北大核心 2025年第4期1026-1033,共8页
【目的】旨在通过StSnRK1α的生物信息学、基因表达及蛋白诱导分析,初步挖掘其在马铃薯生长发育调控中的功能,为后续功能及分子育种研究提供重要实验材料和理论依据。【方法】通过PCR扩增、烟草亚细胞定位实验从马铃薯块茎中克隆StSnRK... 【目的】旨在通过StSnRK1α的生物信息学、基因表达及蛋白诱导分析,初步挖掘其在马铃薯生长发育调控中的功能,为后续功能及分子育种研究提供重要实验材料和理论依据。【方法】通过PCR扩增、烟草亚细胞定位实验从马铃薯块茎中克隆StSnRK1α基因并进行生物信息学分析,结合qRT-PCR及激酶活性测定探究其在马铃薯不同组织中的基因表达及蔗糖处理后的激酶活性变化情况,并利用原核表达实验探究其蛋白诱导最佳条件。【结果】StSnRK1α基因编码区长度为1545 bp,编码514个氨基酸残基,系统发育分析表明其与番茄(Solanum lycopersicum)等茄科作物中的同源蛋白具有较近的亲缘关系,亚细胞定位分析表明该蛋白定位在细胞核和细胞质膜中。基因表达及激酶活性分析表明,StSnRK1α在马铃薯叶片、茎、块茎、根组织中呈现表达依次递减的趋势,而在块茎贮藏期间表达逐渐上升,并且其激酶活性会受到蔗糖的显著诱导。此外,原核表达实验表明StSnRK1α可以在BL21中大量表达,且最佳诱导条件为28℃~37℃及1 mmol/L的IPTG。【结论】StSnRK1α是马铃薯源库转化中的关键功能基因,且其编码蛋白主要以包涵体形式存在。 展开更多
关键词 马铃薯 StSnRK1α 基因表达 亚细胞定位 原核表达
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HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后生殖器官中的表达与定位
13
作者 成力童 南京宏 +4 位作者 李天安 颜秋 王琪 赵兴绪 张勇 《华北农学报》 北大核心 2025年第2期230-238,共9页
为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精... 为探究热休克蛋白60(HSP60)对双峰驼不同发育阶段睾丸及排卵前后卵巢、子宫及输卵管的影响及调控作用,以双峰驼睾丸为材料,克隆HSP60的CDS区序列,利用ProParam及MEGA 7.0等软件对其进行生物信息学分析,利用聚合酶链式反应(PCR)、苏木精和伊红(H&E)染色、免疫组织化学法(IHC)、实时荧光定量PCR(qPCR)及蛋白免疫印迹(Western Blot)等探究其表达规律。克隆结果显示:HSP60的编码区(CDS)长度为1722 bp,编码537个氨基酸,双峰驼HSP60基因与单峰驼及羊驼的核苷酸和氨基酸序列同源性较近。qPCR结果显示:HSP60在双峰驼不同发育阶段睾丸中均有表达,且性成熟后(3,5,7岁)睾丸中的表达水平显著高于3月龄;排卵前后卵巢、子宫及输卵管中均有HSP60的mRNA表达,且排卵后卵巢和子宫中的mRNA水平显著高于排卵前,而在输卵管中排卵前后无显著差异。Western Blot结果表明:HSP60在不同发育阶段睾丸中的表达趋势与mRNA水平相似,随着年龄的递增蛋白表达水平升高;而排卵后卵巢、子宫及输卵管中HSP60的蛋白水平显著高于排卵前。免疫组织化学法显示:HSP60蛋白主要定位于双峰驼的睾丸支持细胞、间质细胞及部分生精细胞,卵巢的颗粒细胞,子宫内膜的腺细胞以及肌细胞等。结果表明,HSP60参与双峰驼睾丸发育及精子生成过程,同时参与诱导排卵及减数分裂的调控过程。 展开更多
关键词 双峰驼 HSP60 睾丸 诱导排卵 表达定位
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多交路和快慢车协同运营的市域(郊)铁路通过能力评估方法
14
作者 朱建昊 陈军华 +3 位作者 郑汉 王志美 黄兆察 郭凤骞 《中国铁道科学》 北大核心 2025年第5期247-258,共12页
随着我国城市客运需求日趋复杂,为实现市域(郊)铁路多交路和快慢车协同运营下的通过能力快速评估,提出1种基于运行图结构推理和关键控制点分析的评估方法。首先,基于已知的越行站与折返线配置,通过运行图的结构推理识别铁路通道的关键... 随着我国城市客运需求日趋复杂,为实现市域(郊)铁路多交路和快慢车协同运营下的通过能力快速评估,提出1种基于运行图结构推理和关键控制点分析的评估方法。首先,基于已知的越行站与折返线配置,通过运行图的结构推理识别铁路通道的关键控制点,并推导运行图最小周期的通用式;其次,引入小交路慢车数量的计算方法,提出多交路快慢车组合下的最小周期评估方法,并设计基于控制点的搜索算法,以组合搜索策略求解最大运输能力;最后,通过多类型线路的实例分析验证模型的有效性。结果表明:单交路模式下快慢车1∶1组合的通过能力最低,为13列·h^(-1);多交路模式下,快慢车1∶1组合的通过能力最低,但随着慢车或小交路列车数量增加,通过能力显著提升;当大交路慢车、快车和小交路慢车开行数量之比为1∶2∶0至1∶2∶3时,通过能力从14列·h^(-1)增至19列·h^(-1)。该方法构建了市域(郊)铁路多交路快慢车协同运营能力评估的理论框架,可服务于线路规划与运输组织决策。 展开更多
关键词 快慢车 全线大交路 区域小交路 通过能力评估 模拟仿真验证
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鸡毒支原体磷酸甘油酸变位酶的亚细胞定位及免疫原性分析
15
作者 赵宇馨 祁晶晶 +7 位作者 尚原冰 李浩然 刘婷 王宇 王少辉 田明星 高崧 于圣青 《中国动物传染病学报》 北大核心 2025年第3期42-50,共9页
鸡毒支原体(MG)感染鸡、鸭、鹅等多种禽类,引起慢性呼吸道疾病,导致产蛋率下降、生长发育受阻,给养禽业造成的经济损失大。磷酸甘油酸变位酶(PGM)是一种参与糖酵解和葡萄糖异生的重要酶,研究表明PGM在一些病原菌的膜表面分布,并能结合... 鸡毒支原体(MG)感染鸡、鸭、鹅等多种禽类,引起慢性呼吸道疾病,导致产蛋率下降、生长发育受阻,给养禽业造成的经济损失大。磷酸甘油酸变位酶(PGM)是一种参与糖酵解和葡萄糖异生的重要酶,研究表明PGM在一些病原菌的膜表面分布,并能结合宿主细胞的胞外基质蛋白,在病原菌致病过程中发挥重要作用,而MG中的PGM蛋白(MGPGM)相关方面的研究少见报道。对MGPGM进行原核表达、亚细胞定位检测及免疫原性分析,为进一步探索MGPGM的生物学功能奠定基础。通过PCR扩增MG的pgm全基因序列(MGpgm),连接表达载体pET-28a(+)并进行原核表达及纯化,获得重组MGPGM(rMGPGM)蛋白;制备抗rMGPGM兔血清,提取MG菌的全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白,与抗rMGPGM兔血清进行Western blot反应,分析其在MG菌中的亚细胞定位情况;抗rMGPGM兔血清与MG菌进行悬浮免疫荧光分析,测定PGM在MG的膜表面定位情况;用MG Rlow感染阳性鸡血清与rMGPGM蛋白进行Western blot反应,分析其免疫原性。在大肠杆菌BL21中成功表达rMGPGM蛋白,制备的兔抗rMGPGM血清抗体效价为102400,Western blot显示抗rMGPGM的兔血清能与MG全菌蛋白、膜蛋白以及胞浆蛋白反应,且MGPGM不仅在胞浆中大量分布,也少量分布在膜蛋白组分中;悬浮免疫荧光试验进一步证实MG的细胞膜表面有PGM蛋白分布;且MG感染血清与rMGPGM蛋白具有明显反应条带,说明rMGPGM具有较好的免疫原性。文章证实了MGPGM蛋白在MG的膜表面分布,同时还具有较好的免疫原性,为进一步研究MGPGM蛋白在MG致病过程中的作用提供参考。 展开更多
关键词 鸡毒支原体 磷酸甘油酸变位酶 原核表达 亚细胞定位 免疫原性
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大黄鱼虹彩病毒ORF 121R蛋白的表达及亚细胞定位
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作者 吴彩霞 刘晓东 +6 位作者 池洪树 谢岸桦 陈秀霞 许斌福 郑在予 潘滢 龚晖 《福建农业学报》 北大核心 2025年第6期577-584,共8页
【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学... 【目的】解析大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)开放阅读框(Open reading frame,ORF)121R蛋白的免疫原性与亚细胞定位,探究其在病毒致病机制中的潜在作用。【方法】以LYCIV ORF121R蛋白为研究对象,通过生物信息学分析手段,进行同源蛋白之间的序列对比,并预测其亚细胞定位;将目的基因通过同源重组方法分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121R-EGFP;诱导表达并纯化ORF121R-His重组蛋白,将其免疫小鼠制备多克隆抗体,并通过ELISA、Western-blotting和细胞间接免疫荧光等手段评估抗体效价及特异性;以ORF 121R-EGFP质粒转染EPC细胞后,利用激光共聚焦显微镜观察ORF121R-EGFP的亚细胞定位。【结果】LYCIV ORF 121R蛋白与传染性脾肾坏死病毒(Infectious spleen and kidney necrosis virus,ISKNV)中具有高免疫原性的ORF 117R蛋白氨基酸序列一致性为79.96%,且预测定位于细胞质。orf121R全长1377 bp,将其分别克隆至pET32a及pEGFP-N1载体中,成功构建重组质粒ORF 121R-His和ORF 121REGFP。经亲和纯化获得可溶性ORF 121R-His重组蛋白,其分子量为72.6 kDa,用该重组蛋白制备的多克隆抗体效价为1∶128000,可特异性识别天然病毒蛋白;ORF 121R-EGFP在鲤上皮瘤(Epithelioma papulosum cyprini,EPC)细胞中呈现胞质特异性分布,荧光信号均匀富集于核周区域。【结论】LYCIV ORF 121R主要定位于细胞质中,该蛋白良好的免疫原性与特异性,使其成为潜在的疫苗候选抗原和诊断靶标,为开发针对LYCIV的特异性防控策略提供了新的可能性。 展开更多
关键词 大黄鱼虹彩病毒 ORF 121R蛋白 蛋白表达 亚细胞定位
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中华绒螯蟹Bco1基因的表达模式及其对高pH胁迫的响应
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作者 熊静怡 张敏 +5 位作者 杨宗霖 陈晓武 姜晓东 成永旭 赵金山 吴旭干 《上海海洋大学学报》 北大核心 2025年第3期486-498,共13页
结合生物信息学、实时荧光定量PCR、原位杂交及HPLC技术研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)Bco1基因的序列特征、时空表达模式和亚细胞定位,并探讨了高pH慢性胁迫下肝胰腺的Es-Bco1表达量、色泽及类胡萝卜素含量的变化。结果表明:(1)... 结合生物信息学、实时荧光定量PCR、原位杂交及HPLC技术研究了中华绒螯蟹(Eriocheir sinensis)Bco1基因的序列特征、时空表达模式和亚细胞定位,并探讨了高pH慢性胁迫下肝胰腺的Es-Bco1表达量、色泽及类胡萝卜素含量的变化。结果表明:(1)Es-Bco1开放阅读框(Open reading frame,ORF)全长1614 bp,编码537个氨基酸,属于RPE65超家族,并与三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)BCO1高度相似;(2)Es-Bco1在多个组织中均有表达,高表达于内膜、眼柄和肝胰腺;蜕壳周期中蜕壳后期(AB期)肝胰腺Es-Bco1表达量最高;卵巢发育阶段Ⅰ~Ⅲ期的肝胰腺Es-Bco1表达量显著上升,此后显著下降;(3)原位杂交结果显示,在蜕壳AB期和卵巢发育Ⅲ期,Es-Bco1 mRNA主要定位于肝胰腺的F细胞(纤维细胞)和R细胞(吸收细胞)中;(4)幼蟹在pH 8.0(对照)、9.0和10.0条件下胁迫30 d后,肝胰腺中的Es-Bco1表达水平显著上调,其肝胰腺亮度值(L^(*))、黄度值(b^(*))、总类胡萝卜素及β-胡萝卜素含量显著下降。综上,中华绒螯蟹Bco1主要在内膜、眼柄和肝胰腺中表达,且在蜕壳后期和卵巢Ⅲ期肝胰腺中高表达。此外,高pH胁迫可导致肝胰腺中Es-Bco1上调,降低类胡萝卜素含量,表明Bco1在中华绒螯蟹响应高pH胁迫过程中类胡萝卜素裂解起着重要作用。 展开更多
关键词 中华绒螯蟹 β-胡萝卜素15 15′加氧酶(BCO1) 基因表达 亚细胞定位 PH胁迫
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神经营养因子neuritin在人体组织中的表达及验证 被引量：1
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作者 孟平平 朱井玲 +2 位作者 曹建 魏瑜 罗星 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第6期505-509,共5页
目的基于生物信息学探讨神经营养因子neuritin(NRN1)在人体组织中的表达并验证。方法利用人类蛋白图谱(HPA)数据库对NRN1基因进行组织表达谱分析;分别利用实时定量PCR和免疫组织化学检测NRN1 mRNA及蛋白表达。利用已构建的pEGFP-C1-neur... 目的基于生物信息学探讨神经营养因子neuritin(NRN1)在人体组织中的表达并验证。方法利用人类蛋白图谱(HPA)数据库对NRN1基因进行组织表达谱分析;分别利用实时定量PCR和免疫组织化学检测NRN1 mRNA及蛋白表达。利用已构建的pEGFP-C1-neuritin绿荧光蛋白融合表达载体转染人肾上皮细胞系293细胞,免疫荧光检测293细胞中NRN1蛋白定位情况;同时检测小鼠海马神经元细胞系HT22细胞中内源性NRN1蛋白定位情况。结果HPA数据库分析结果显示,NRN1主要在大脑皮层、甲状旁腺、脂肪组织、胎盘等组织中表达。验证结果显示,NRN1在上述组织中均有表达,其中,脑及脾脏组织中表达量最高。免疫荧光结果显示NRN1在HT22细胞主要定位在细胞膜上;在293细胞主要定位在细胞质中。结论NRN1在人体脑、心脏、肝脏、肺、小肠以及卵巢等多种组织中表达,在脑组织中呈高表达。NRN1主要定位在细胞膜及细胞质中。 展开更多
关键词 NEURITIN 组织分布 表达谱 免疫组织化学 亚细胞定位
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小麦TaWRKY70的克隆、亚细胞定位与表达分析
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作者 卢振华 梁晨 +7 位作者 张丽 佟可心 陈小强 李明 丁博 邱丽娜 谢晓东 王俊斌 《华北农学报》 北大核心 2025年第5期12-19,共8页
为系统解析WRKY转录因子家族成员在小麦生长发育调控及非生物胁迫应答中的作用,研究了TaWRKY基因在干旱、高盐、低温等逆境条件下的表达模式特征。以普通小麦品种中国春为材料,通过分子克隆技术获得TaWRKY70基因,其编码区全长885 bp,编... 为系统解析WRKY转录因子家族成员在小麦生长发育调控及非生物胁迫应答中的作用,研究了TaWRKY基因在干旱、高盐、低温等逆境条件下的表达模式特征。以普通小麦品种中国春为材料,通过分子克隆技术获得TaWRKY70基因,其编码区全长885 bp,编码294个氨基酸的不稳定亲水性蛋白。生物信息学分析表明,该蛋白具有典型的WRKYGQK保守结构域及C_(2)HC型锌指结构,符合第Ⅲ类WRKY转录因子的分类特征。通过启动子顺式作用元件分析发现,TaWRKY70启动子区域存在参与茉莉酸甲酯响应、脱落酸响应、乙烯响应等调控元件。基因共表达分析表明,TaWRKY70与小麦对激素响应、对微生物的防御反应、对寒冷等非生物胁迫的应答等多个抗逆过程相关。系统进化树分析表明,TaWRKY70蛋白与大麦、玉米、高粱和谷子等禾本科作物的WRKY70亲缘关系较近。亚细胞定位结果证明,TaWRKY70定位于细胞核,符合转录因子特征。通过表达模式分析发现,TaWRKY70在小麦根、茎、叶、幼穗和籽粒中均有表达,并且在根和叶中表达较高。在非生物胁迫下,TaWRKY70在脱落酸和低温处理下表达下调,在水杨酸、Na Cl、PEG6000和高温处理下表达上调。综上,通过克隆小麦TaWRKY70基因并分析其表达模式,为下一步解析TaWRKY70参与小麦抗逆的分子机制提供了基础。 展开更多
关键词 小麦 TaWRKY70 基因克隆 亚细胞定位 表达分析
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油莎豆MYB转录因子基因CeMYB154克隆及耐盐功能分析
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作者 程珊 王会伟 +6 位作者 陈晨 朱雅婧 李春鑫 别海 王树峰 陈献功 张向歌 《生物技术通报》 北大核心 2025年第6期218-228,共11页
【目的】油莎豆MYB转录因子基因CeMYB154参与盐胁迫响应过程,克隆及表征油莎豆CeMYB154并分析其耐盐功能,为油莎豆耐盐育种提供分子基础和基因资源。【方法】基于油莎豆参考基因组信息,克隆CeMYB154的全长CDS序列,利用生物信息学软件对... 【目的】油莎豆MYB转录因子基因CeMYB154参与盐胁迫响应过程,克隆及表征油莎豆CeMYB154并分析其耐盐功能,为油莎豆耐盐育种提供分子基础和基因资源。【方法】基于油莎豆参考基因组信息,克隆CeMYB154的全长CDS序列,利用生物信息学软件对其氨基酸序列特征及其启动子上顺式作用元件进行分析,利用分子生物学技术对其进行亚细胞定位和转录激活验证。构建CeMYB154过表达载体,利用农杆菌介导法转化拟南芥,并对过表达株系的耐盐表型和生理指标进行分析。【结果】成功克隆了长度为780 bp的CeMYB154 CDS序列,其编码蛋白序列中2个典型的MYB结构域,属于R2R3型MYB转录因子。蛋白序列比对分析显示,CeMYB154蛋白在多个物种间序列高度保守。启动子区域含有多种激素(如ABA)响应以及MYB响应相关顺式作用元件。此外,亚细胞定位和转录激活分析显示,CeMYB154是一个具有转录激活活性的核转录因子。成功创制了过表达CeMYB154转基因拟南芥,获得了纯合T3转基因阳性株系。在盐胁迫下,与野生型拟南芥相比,转基因植株幼苗生长状态(叶片大小、颜色以及根长)较好;并且,转基因植株中MDA和H2O2含量均显著降低,而CAT、POD和SOD抗氧化酶活性则显著增强,表明过表达CeMYB154基因提高了拟南芥的耐盐性。【结论】油莎豆CeMYB154具有正向调控盐胁迫响应的功能,过表达CeMYB154基因可以增强抗氧化酶活性而提高转基因植株的耐盐性。 展开更多
关键词 油莎豆 盐胁迫 MYB转录因子 转录激活 功能分析 过表达 亚细胞定位 抗氧化酶
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