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Comparison of transient and stable expression of foot-and-mouth disease virus capsid proteins in mammalian cells 被引量:2
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作者 Ana Clara Mignaqui Vanesa Ruiz Andrés Wigdorovitz 《Advances in Bioscience and Biotechnology》 2013年第12期1024-1029,共6页
Foot-and-mouth disease is a highly contagious disease that produces severe economic losses in the livestock industry. This disease is being controlled by the use of an inactivated vaccine. However, the use of recombin... Foot-and-mouth disease is a highly contagious disease that produces severe economic losses in the livestock industry. This disease is being controlled by the use of an inactivated vaccine. However, the use of recombinant empty capsids as a subunit vaccine has been reported to be a promising candidate because it avoids the use of virus in the vaccine production. A plasmid containing the capsid precursor P12A and protease 3C sequences of foot-and-mouth disease virus (FMDV) was constructed and used to compare transient and stable expression in mammalian cells. When BHK-21 cells were transfected with the recombinant vector, protease 3C cleaved the capsid precursor P12A into the structural proteins VP0, VP1 and VP3. A sucrose gradient demonstrated that the structural proteins assembled into different subviral particles. Attempts to generate a stable cell line only allowed isolating low-level-expressing clones, probably due to the effect of protease 3C on the cells. Moreover, the recombinant protein yield achieved in transient expression assays was much higher than the one achieved in stable expression assays. Results indicate that mammalian cells are a good strategy to produce recombinant FMDV subviral particles. However, the alternative approach of transient gene expression in scalable systems should be used instead of the standard method that involves the generation of a stable cell line. 展开更多
关键词 EMPTY CAPSIDS Foot and MOUTH Disease Virus MAMMALIAN Cells Stable expression TRANSIENT ex-pression
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Person-independent expression recognition based on person-similarity weighted expression feature 被引量:1
2
作者 Huachun Tan Yujin Zhang +2 位作者 Hao Chen Yanan Zhao Wuhong Wang 《Journal of Systems Engineering and Electronics》 SCIE EI CSCD 2010年第1期118-126,共9页
A new method to extract person-independent expression feature based on higher-order singular value decomposition (HOSVD) is proposed for facial expression recognition. Based on the assumption that similar persons ha... A new method to extract person-independent expression feature based on higher-order singular value decomposition (HOSVD) is proposed for facial expression recognition. Based on the assumption that similar persons have similar facial expression appearance and shape, the person-similarity weighted expression feature is proposed to estimate the expression feature of test persons. As a result, the estimated expression feature can reduce the influence of individuals caused by insufficient training data, and hence become less person-dependent. The proposed method is tested on Cohn-Kanade facial expression database and Japanese female facial expression (JAFFE) database. Person-independent experimental results show the superiority of the proposed method over the existing methods. 展开更多
关键词 facial expression recognition person-independent ex-pression feature higher-order singular value decomposition feature estimation.
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输血依赖型地中海贫血的ex vivo和in vivo基因治疗的策略与实践
3
作者 王碧璇 贾玉艳 黄粤 《广西医科大学学报》 2025年第5期644-654,共11页
地中海贫血是由α-珠蛋白基因或β-珠蛋白基因发生突变或缺失,导致α-珠蛋白链或β-珠蛋白链合成减少或完全缺失而引起的一种遗传性溶血性疾病。部分中间型和重型地中海贫血患者主要依赖输血治疗,但长期输血会导致慢性铁过载,进而引发... 地中海贫血是由α-珠蛋白基因或β-珠蛋白基因发生突变或缺失,导致α-珠蛋白链或β-珠蛋白链合成减少或完全缺失而引起的一种遗传性溶血性疾病。部分中间型和重型地中海贫血患者主要依赖输血治疗,但长期输血会导致慢性铁过载,进而引发危及生命的并发症。同种异体造血干细胞(HSC)移植是一种能够治愈输血依赖型地中海贫血(TDT)的疗法,但是大多数患者缺乏匹配的供体。采用慢病毒载体携带α-珠蛋白基因或β-珠蛋白基因转导或经过基因编辑的自体HSC回输至患者的回体(ex vivo)基因治疗,已成为一种根治TDT的替代疗法。目前大部分TDT临床试验都是采用ex vivo基因治疗,但其存在清髓处理对患者身体有损伤、个体化治疗费用高、治疗过程操作复杂、质量控制难度大等缺点。TDT体内(in vivo)基因治疗是在体内靶向HSC直接进行修饰或编辑,是极具潜力的治疗策略,但是开发高效且安全的递送系统等方面仍面临挑战。本文综述了当前TDT ex vivo基因治疗相关临床试验的进展,以及用于实现in vivo基因治疗的递送载体,包括病毒载体、脂质纳米颗粒(LNP)和病毒样颗粒(VLP),系统比较各类方法的优势与局限,并展望未来技术优化的方向。 展开更多
关键词 输血依赖型地中海贫血 回体基因治疗 体内基因治疗 慢病毒载体 基因编辑 体内递送载体
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THE CLOSED-FORM SOLUTION OF VECTOR FINITE ELEMENT INTEGRAL EQUATIONS FOR THREE DIMENSIONAL ELECTROMAGNETIC ANALYSIS
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作者 Tian Jin Gong Li +2 位作者 Shi Xiaowei Lv Zhiqing Liu Xing 《Journal of Electronics(China)》 2011年第4期602-608,共7页
In this paper,a set of closed-form formulas for vector Finite Element Method(FEM) to analyze three dimensional electromagnetic problems is presented on the basis of Gaussian quadrature integration scheme.By analyzing ... In this paper,a set of closed-form formulas for vector Finite Element Method(FEM) to analyze three dimensional electromagnetic problems is presented on the basis of Gaussian quadrature integration scheme.By analyzing the open region problems,the first-order Absorbing Boundary Condition(ABC) is considered as the truncation boundary condition and the equation is carried out in a closed-form.Based on the formulas,the hybrid Expanded Cholesky Method(ECM) and MultiFrontal algorithm(MF) is applied to solve finite element equations.Using the closed-form solution,the elec-tromagnetic field of three dimensional targets can be studied sententiously and accurately.Simulation results show that the presented formulas are successfully and concise,which can be easily used to analyze three dimensional electromagnetic problems. 展开更多
关键词 vector Finite Element Method(FEM) Absorbing Boundary Condition(ABC) ex-panded Cholesky Method(ECM) MultiFrontal algorithm(MF)
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糜子SBP基因家族鉴定及在籽粒稃壳色形成中的表达分析 被引量:1
5
作者 郝子义 刘天鹏 +6 位作者 何继红 董孔军 任瑞玉 张磊 韦恒 李亚伟 杨天育 《甘肃农业大学学报》 北大核心 2025年第4期65-77,共13页
【目的】了解糜子SBP基因家族及在其籽粒稃壳色形成中的表达特征。【方法】采用生物信息学方法,全基因组鉴定了含有SBP结构域的SBP基因家族成员,并进一步分析了其染色体分布、蛋白理化性质、系统进化关系、基因结构、保守结构域、启动... 【目的】了解糜子SBP基因家族及在其籽粒稃壳色形成中的表达特征。【方法】采用生物信息学方法,全基因组鉴定了含有SBP结构域的SBP基因家族成员,并进一步分析了其染色体分布、蛋白理化性质、系统进化关系、基因结构、保守结构域、启动子区域的顺式作用元件及在糜子白、黄、褐籽粒稃壳色形成中的表达特征。【结果】糜子含有38个SBP基因,不均匀的分布在18条染色体上,PmSBP蛋白的氨基酸序列长度为122-1109aa,等电点为5.49-10.32,家族成员含有1-11个外显子,亚细胞定位于细胞核、叶绿体中。糜子38个SBP基因的蛋白聚类分析显示,该蛋白家族可分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ5个亚家族,亚家族Ⅲ成员具有相对复杂的结构。顺式作用元件分析显示,在糜子SBP家族基因存在共同的顺式作用元件,如光响应、激素响应、分生组织表达和调控种子特异性等。白、黄、褐色籽粒品种晋黍8号、陇糜12号和张778稃壳色形成期转录组及qRT-PCR分析显示,糜子SBP基因家族成员中PmSBP33、PmSBP8、PmSBP17、PmSBP37、PmSBP12、PmSBP14、PmSBP1、PmSBP7、PmSBP23和PmSBP16在3个品种籽粒中的表达量较高,且品种间表达量差异显著。通过与谷子、拟南芥和水稻同源基因比对,推测PmSBP1和PmSBP7与糜子籽粒发育相关。【结论】鉴定出38个糜子SBP基因家族成员,在糜子籽粒稃壳中的表达量差异明显,且PmSBP1和PmSBP7与糜子籽粒形态建成密切相关。 展开更多
关键词 糜子 SBP基因家族 转录因子 生物信息学分析 表达特征
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高丛蓝莓细胞色素CYP81家族的鉴定及表达分析
6
作者 王卓依 邱佳琪 +6 位作者 张颖 俞蕾 刘良淼 李永强 陈文荣 郭卫东 杨莉 《分子植物育种》 北大核心 2025年第2期387-395,共9页
高丛蓝莓(Vaccinium corymbosum)是一种高经济价值作物,其果实因富含花青苷等次生代谢物,具有较高的营养价值与经济价值。CYP81是植物特有的A型细胞色素CYP450亚家族,广泛参与防御途径和化合物代谢过程,但有关蓝莓CYP81亚家族的成员数... 高丛蓝莓(Vaccinium corymbosum)是一种高经济价值作物,其果实因富含花青苷等次生代谢物,具有较高的营养价值与经济价值。CYP81是植物特有的A型细胞色素CYP450亚家族,广泛参与防御途径和化合物代谢过程,但有关蓝莓CYP81亚家族的成员数量、基因结构和表达模式等尚不清楚。本研究利用高丛蓝莓‘Draper’基因组测序数据鉴定CYP81家族基因,并对这些家族成员进行生物信息学分析;根据高丛蓝莓VcCYP81与拟南芥CYP81蛋白的序列比对,构建系统进化树;利用实验室前期获取的转录组数据分析VcCYP81基因在南高丛蓝莓‘奥尼尔’与‘蓝雨’坐果期的表达谱,以及利用实时荧光定量PCR(qPCR)技术分析差异表达基因在2个品种花果发育进程中的表达模式。基于拟南芥AtCYP81基因序列,检索‘Draper’基因组数据库获得43个Vc CYP81家族成员,分析发现这些VcCYP81家族成员分别包含2~8个外显子,且大部分成员包含6个排列顺序相同的保守基序。进化树分析将VcCYP81进一步分为VcCYP81D7-1~VcCYP81D7-7与VcCYP81K 8个亚家族,其中D7-1,D7-2,D7-4及D7-5亚家族成员间高度保守,而VcCYP81K亚家族成员与拟南芥同源序列聚类。结合转录组数据分析VcCYP81亚家族基因在‘奥尼尔’与‘蓝雨’幼果中的表达丰度,发现大部分家族成员表达丰度较低或不表达,而VcCYP81D7-2亚家族成员的表达水平极显著高于其他成员。进一步分析2个品种幼果期差异表达基因gene-18.47和gene-34.48在整个花芽膨大与果实发育时期的相对表达,发现2个基因在‘奥尼尔’与‘蓝雨’花芽与果实中的表达差异显著。本研究为进一步研究高丛蓝莓VcCYP81基因对果实生长发育及次生代谢物的生物合成与代谢等提供理论参考。 展开更多
关键词 蓝莓 VcCYP81基因 生物信息学分析 全基因组鉴定 表达分析
原文传递
生物钟基因调控昼夜节律影响抑郁症研究进展
7
作者 文可奕 张云妍 +5 位作者 王芳易 周盈 李翔宇 马粼潞 王雨桐 傅一笑 《中国神经精神疾病杂志》 北大核心 2025年第9期565-570,共6页
抑郁症与昼夜节律双向影响,提示其与生物钟系统密切相关。下丘脑视交叉上核中的生物钟受到生物钟基因调控。近年在临床和基础研究中观察到抑郁症与生物钟基因具有多层面关联。如研究发现抑郁症患者脑组织BMAL1、PER2、PER3存在显著相位... 抑郁症与昼夜节律双向影响,提示其与生物钟系统密切相关。下丘脑视交叉上核中的生物钟受到生物钟基因调控。近年在临床和基础研究中观察到抑郁症与生物钟基因具有多层面关联。如研究发现抑郁症患者脑组织BMAL1、PER2、PER3存在显著相位异常,患者血浆中CRY1、ARNTL、PER1蛋白表达显著下降,具有良好的诊断价值;敲除CLOCK、BMAL1的小鼠出现抑郁样行为;PER1、PER3等基因的单核苷酸多态性直接影响抑郁症发病风险;BMAL1、PER3及CLOCK基因甲基化水平与抑郁症状密切相关;抗抑郁治疗如氯胺酮,可以通过下调PER2等发挥抗抑郁作用。本文对抑郁症与生物钟基因调控的不同表达方式及相关治疗方式进行综述,以期为抑郁症的诊断和个体化治疗策略提供新的理论依据。 展开更多
关键词 生物钟基因 抑郁症 昼夜节律 睡眠障碍 DNA甲基化 单核苷酸多态性 基因表达调控
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颅缝与非颅缝处未成熟硬脑膜成骨基因在颅缝闭合过程中差异性表达的研究
8
作者 佟凌虹 董艳芳 +2 位作者 张春阳 敖铭泽 乌日丽格 《内蒙古医学杂志》 2025年第7期792-799,共8页
目的通过探讨颅缝与非颅缝处硬脑膜成熟过程中基因差异表达的规律,以及硬脑膜调节颅缝发育过程中的作用及其调控分子机制,以期为颅骨发育异常疾病的治疗策略提供实验依据。方法取10日龄SD大鼠,分为两组,分别为原位组、旋转组,每组60只,... 目的通过探讨颅缝与非颅缝处硬脑膜成熟过程中基因差异表达的规律,以及硬脑膜调节颅缝发育过程中的作用及其调控分子机制,以期为颅骨发育异常疾病的治疗策略提供实验依据。方法取10日龄SD大鼠,分为两组,分别为原位组、旋转组,每组60只,共120只。以人字缝为圆心,0.5 cm为半径分离颅骨,原位组的颅骨分离后原位覆盖,旋转组的颅骨分离后旋转180°覆盖。饲养3周后处死,HE染色观察颅缝闭合情况;利用二代测序检测两组中mRNA表达差异,进行生物信息分析。采用RT-qPCR及Western-blot方法对差异表达较高的基因进行验证。结果(1)HE染色结果:在术后3周时,旋转组相较于原位组的颅缝处的骨胶原纤维组织增厚并有向骨组织间隙内生长的趋势。(2)二代测序结果:通过生物信息学技术对原位组和旋转组的硬脑膜及骨组织的差异表达基因进行分析发现,上调基因主要参与神经递质的传递和运输以及细胞对外界生物刺激的应答反应等生物学过程。进一步的功能富集分析表明,cAMP信号通路在差异表达基因中呈现显著富集。(3)相关基因验证发现,cAMP信号通路表达量在非颅缝处下方硬脑膜较普通颅骨下方硬脑膜升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论颅缝处与非颅缝处硬脑膜基因表达存在差异,二代测序结果显示非颅缝处硬脑膜cAMP信号通路表达量升高,此通路可能是硬脑膜调控颅缝闭合的重要细胞信号通路。 展开更多
关键词 颅缝生长 硬脑膜 二代测序技术 基因差异表达 cAMP信号通路 颅骨发育 成骨基因
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大豆ADF基因家族的全基因组鉴定及生物信息学分析
9
作者 张锋 王红对 +1 位作者 张中起 高法振 《山东农业科学》 北大核心 2025年第6期15-27,共13页
肌动蛋白解聚因子(ADF)在植物生长发育及胁迫响应中发挥关键作用,但其在大豆中的研究仍有限。本研究通过生物信息学方法,利用HMMER3.0、MCScanX、MEGA 11等工具,对大豆ADF基因家族进行全基因组鉴定并分析其理化性质、基因结构、保守基... 肌动蛋白解聚因子(ADF)在植物生长发育及胁迫响应中发挥关键作用,但其在大豆中的研究仍有限。本研究通过生物信息学方法,利用HMMER3.0、MCScanX、MEGA 11等工具,对大豆ADF基因家族进行全基因组鉴定并分析其理化性质、基因结构、保守基序、染色体分布、进化关系及表达特征。结果表明,从大豆基因组中共鉴定出18个ADF基因,命名为GmADF1—GmADF18,其编码蛋白序列长度为117~169 aa,分子量为13.80~19.49 kDa,理论等电点在5.13~7.93之间,均为亲水性蛋白,均定位于细胞质,蛋白保守基序呈现高度一致性,基因外显子数目为2个或3个。染色体定位显示这18个ADF基因分布于13条染色体,其中10号染色体上的最多(3个)。共线性分析检测到25对大豆ADF旁系同源基因,其进化主要受纯化选择驱动。系统进化树将大豆ADF蛋白分为5个亚族,与野生大豆亲缘关系最近。启动子分析揭示大豆ADF基因具有大量胁迫响应元件和激素响应元件,暗示其可能参与多种胁迫响应。蛋白互作网络显示大豆ADF蛋白与肌动蛋白及含POZ结构域的蛋白互作,可能参与细胞骨架动态调控。组织特异性表达表明,部分基因在花、根、种子等器官中高表达;胁迫表达分析显示,GmADF8、GmADF14、GmADF16在盐、干旱及淹水胁迫下显著上调,而GmADF5的表达在低温胁迫下受抑制。qRT-PCR分析进一步验证了盐和干旱胁迫下大豆ADF基因的表达特征,GmADF2在盐胁迫早期响应上调表达,GmADF2和GmADF8在干旱胁迫早期响应上调表达。本研究结果可为深入探究大豆ADF基因家族在非生物胁迫响应中的功能机制提供重要理论依据。 展开更多
关键词 大豆 ADF基因家族 全基因组鉴定 生物信息学分析 基因表达 胁迫响应
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颗粒化重组戊型肝炎病毒衣壳蛋白及其抗原性与免疫原性 被引量:27
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作者 何志强 张军 +5 位作者 李少伟 林鉴 刘如石 陈毅歆 王颖彬 夏宁邵 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期262-268,共7页
过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋... 过去的研究发现大肠杆菌表达的戊型肝炎病毒 (HEV)衣壳蛋白ORF2的aa3 94_60 6片段NE2可以形成同源多聚体 ,并具有良好的免疫保护性 ,但纯化后的免疫原性较弱。这里表达了 3个NE2蛋白的N端延伸突变体 ,发现对应于ORF2aa3 68_60 6的重组蛋白HEV 2 3 9在体外可以形成颗粒性抗原。HEV 2 3 9抗原颗粒与戊肝患者血清反应性良好 ,对中和性单克隆抗体 8C11的反应性与NE2抗原相当 ,而对另一中和性单克隆抗体 8H3的反应性较NE2抗原有显著提高 ,表明HEV 2 3 9抗原颗粒具有比NE2更好的抗原性。纯化后的HEV 2 3 9抗原颗粒直径约为 15~3 0nm。铝佐剂吸附的HEV 2 3 9免疫Balb c小鼠的半数有效剂量 (ED5 0 )在 0 0 8~ 0 2 5μg之间 ,而同样以铝佐剂吸附的NE2抗原 60 μg剂量免疫的抗体阳转率仅 2 5% ,表明HEV 2 3 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒 衣壳蛋白 疫苗 颗粒性抗原 原核表达 抗原性 免疫原性
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干旱胁迫对马铃薯类黄酮和类胡萝卜素合成关键酶基因表达的影响 被引量:24
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作者 范敏 金黎平 +3 位作者 黄三文 谢开云 刘庆昌 屈冬玉 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第4期535-542,共8页
利用马铃薯抗旱二倍体材料H145和对干旱敏感二倍体材料H214,通过半定量RT-PCR方法研究了干旱胁迫0、7、10、12、14d时叶片和根系中3-二氢黄酮羟化酶(F3H)基因、黄酮合成酶(FLS)基因和β-胡萝卜素羟化酶1(HYD-1)基因的表达状况。结果表明... 利用马铃薯抗旱二倍体材料H145和对干旱敏感二倍体材料H214,通过半定量RT-PCR方法研究了干旱胁迫0、7、10、12、14d时叶片和根系中3-二氢黄酮羟化酶(F3H)基因、黄酮合成酶(FLS)基因和β-胡萝卜素羟化酶1(HYD-1)基因的表达状况。结果表明:干旱胁迫过程中马铃薯品系H145和H214叶片和根系中F3H基因、FLS基因、HYD-1基因的表达量在轻度或中度干旱胁迫下有不同程度的增加,但品系H145在干旱的早期叶片中F3H基因表达量比根系中增加快,并且叶片中FLS基因和HYD-1基因受干旱诱导的表达持续时间比根系中长;品系H214叶片中F3H基因受干旱诱导表达持续的时间比根系中长,在干旱的早期叶片里FLS基因和HYD-1基因表达量没有根系中增加快。说明F3H、FLS和HYD-1基因参与了马铃薯抗旱反应,但不同的品系这些基因起作用的方式可能不同。 展开更多
关键词 马铃薯 干旱胁迫 类黄酮 类胡萝卜素 基因表达
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富硒益生菌对罗非鱼幼鱼生长和抗氧化水平的影响 被引量:14
12
作者 柯浩 刘振兴 +4 位作者 曹艳林 马艳平 郝乐 马江耀 梁志凌 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第5期1229-1237,共9页
本试验旨在研究富硒益生菌对罗非鱼幼鱼生长及抗氧化水平的影响。试验选取600尾罗非鱼幼鱼,随机分为5组,每组设3个重复,每个重复随机放养初始体重为(12.40±0.13) g的罗非鱼幼鱼40尾。其中,对照组饲喂硒含量为0.257 mg/kg的... 本试验旨在研究富硒益生菌对罗非鱼幼鱼生长及抗氧化水平的影响。试验选取600尾罗非鱼幼鱼,随机分为5组,每组设3个重复,每个重复随机放养初始体重为(12.40±0.13) g的罗非鱼幼鱼40尾。其中,对照组饲喂硒含量为0.257 mg/kg的基础饲料,其他4组分别饲喂在基础饲料中添加由富硒酵母菌、酵母菌、乳酸菌组成的富硒益生菌的试验饲料。4种试验饲料中富硒酵母菌的添加量折算为硒添加量分别为0(A组)、0.4(B组)、0.6(C组)、0.8 mg/kg(D组),乳酸菌的添加量均为3.04×10^5 CFU/g,并通过调节酵母菌添加量使4种试验饲料中添加的总活菌数相同。试验期为70 d。结果表明:D组和C组分别在第50~60天和第60~70天阶段表现出最高的特定生长率,并均显著高于对照组(P<0.05)。 C组血清谷胱甘肽过氧化物酶( GPx)活性在第30天和第50天均显著高于A组(P<0.05);对照组血清GPx活性在第60天显著低于其他各组(P<0.05)。在第30天,血清过氧化氢酶(CAT)活性以C组最高、A组最低,各组间均差异显著(P<0.05);对照组血清CAT活性在第60天显著低于A组、B组和C组(P<0.05)。 C组血清超氧化物歧化酶(SOD)活性在第30天和第50天显著高于其他各组(P<0.05)。各组罗非鱼的肝脏谷胱甘肽过氧化物酶1(GPx1) mRNA相对表达量均随饲养天数的延长呈现出上升态势,至第50天达到最高值后开始呈下降的趋势。在第50天,A组和C组的肝脏GPx1 mRNA的相对表达量显著高于其他各组(P<0.05),且以C组的值最高。由上述结果可知,在含硒0.257 mg/kg的基础饲料中添加0.6 mg/kg的富硒益生菌(以硒计)可促进罗非鱼幼鱼(体重12~55 g/尾)的生长,提高其抗氧化水平。 展开更多
关键词 富硒益生菌 罗非鱼 生长 GPxl mRNA相对表达量 抗氧化水平
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猪链球菌2型人源分离株截短的溶菌酶释放蛋白基因的克隆及原核表达 被引量:10
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作者 王海丽 王长军 +2 位作者 陆承平 潘秀珍 唐家琪 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期178-180,共3页
目的:克隆及表达猪链球菌2型(S.suis2)人源分离株Habb截短溶菌酶释放蛋白(MRP)基因。方法:根据S.suis2mrp基因的序列设计引物,克隆和分析江苏海安患者分离株Habb截短mrp基因(tmrp),构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp。在大肠杆菌中诱导带有... 目的:克隆及表达猪链球菌2型(S.suis2)人源分离株Habb截短溶菌酶释放蛋白(MRP)基因。方法:根据S.suis2mrp基因的序列设计引物,克隆和分析江苏海安患者分离株Habb截短mrp基因(tmrp),构建原核表达质粒pGEX4T-2-mrp。在大肠杆菌中诱导带有谷胱甘肽转移酶(GST)标签的融合蛋白tMRP-GST表达;经亲和层析法纯化后,用凝血酶酶切去除重组蛋白中的GST,制备纯化的截短MRP(tMRP)抗原。用Westernblot检测重组抗原的活性。结果:序列分析表明,获得的tmrp基因长957bp;原核表达的融合蛋白tMRP-GST的相对分子质量(Mr)约61000;凝血酶处理的tMRP抗原的Mr约为35000。Westernblot分析显示,MRP-GST、tMRP蛋白均可与MRP多克隆抗血清发生特异性反应。结论:成功地克隆人源分离株Habb截短的mrp基因,并在原核系统实现高效表达,制备的纯化抗原tMRP具有良好的抗原性,为开展相关免疫学研究奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌2型 溶菌酶释放蛋白 融合表达
原文传递
川芎嗪对大鼠慢性缺氧性肺动脉高压的保护作用及其与NOS基因表达的关系 被引量:25
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作者 张珍祥 牛汝楫 +2 位作者 徐永健 段生福 戴爱国 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期130-133,共4页
以慢性常压缺氧的方法复制了大鼠慢性缺氧性肺动脉高压模型,观察了川芎嗪(LTZ80mg·kg^(-1),iP)对慢性缺氧性肺动脉高压的预防作用及cGMP含量(血浆和肺小动脉)和肺组织一氧化氮合成酶(NOS)基因的mRNA表达之变化.结果表明,慢性缺氧... 以慢性常压缺氧的方法复制了大鼠慢性缺氧性肺动脉高压模型,观察了川芎嗪(LTZ80mg·kg^(-1),iP)对慢性缺氧性肺动脉高压的预防作用及cGMP含量(血浆和肺小动脉)和肺组织一氧化氮合成酶(NOS)基因的mRNA表达之变化.结果表明,慢性缺氧大鼠肺动脉平均压明显升高,但cGMP含量明显降低,肺组织NOS基因mRNA表达明显减弱;cGMP含量与肺动脉平均压呈明显负相关;LTZ对正常大鼠肺动脉压、cGMP含量和肺组织NOS基因的mRNA表达无明显影响,但可使慢性缺氧大鼠上述指标逆转.结果提示慢性缺氧大鼠肺组织NOS基因mRNA表达降低是慢性缺氧性肺动脉高压发病的机制之一,而LTZ增强了慢性缺氧大鼠肺NOS基因mRNA的表达可能是其预防慢性缺氧性肺动脉高压发生的重要机制. 展开更多
关键词 川芎嗪 肺循环 一氧化氮合成酶 基因表达
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β-葡聚糖与硒、维生素E联合添加对凡纳滨对虾组织生化指标及免疫、抗氧化相关酶mRNA表达的影响 被引量:16
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作者 刘群芳 曹俊明 +5 位作者 黄燕华 王国霞 文远红 周婷婷 孙智武 刘小玲 《动物营养学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期1045-1053,共9页
本试验旨在研究在饲料中联合添加β-葡聚糖(βG)与硒(Se)、维生素E对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织生化指标及免疫、抗氧化相关酶mRNA表达的影响。在基础饲料中分别添加不同水平的βG、Se(蛋氨酸硒形式)和维生素E(维生素E醋酸... 本试验旨在研究在饲料中联合添加β-葡聚糖(βG)与硒(Se)、维生素E对凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)组织生化指标及免疫、抗氧化相关酶mRNA表达的影响。在基础饲料中分别添加不同水平的βG、Se(蛋氨酸硒形式)和维生素E(维生素E醋酸酯形式),配制成5种试验饲料,其组合及添加量分别为0、300 mg/kgβG、300 mg/kgβG+0.2 mg/kg Se、300 mg/kgβG+100 mg/kg维生素E、300 mg/kgβG+0.2 mg/kg Se+100 mg/kg维生素E,并分别记作G0、G1、G2、G3和G4。选取初始体质量为(0.83±0.02)g的凡纳滨对虾800尾,随机分为5组,每组4个重复,每个重复40尾虾,分别投喂1种试验饲料。养殖周期为5周。结果表明:与G0组相比,G1、G4组的血清总蛋白含量显著降低(P<0.05),G4组的血清尿酸含量和谷丙转氨酶活性显著升高(P<0.05)。血清总胆固醇、甘油三酯和葡萄糖含量与谷草转氨酶活性以及肝胰腺总蛋白含量与谷丙转氨酶、谷草转氨酶活性组间差异不显著(P>0.05)。肝胰腺酚氧化酶原mRNA相对表达量,G4组显著高于其他各组(P<0.05),G2组显著高于G1组(P<0.05)。与G0组相比,G1、G2、G3和G4组肝胰腺溶菌酶mRNA相对表达量无显著差异(P>0.05);与G1组相比,G2、G3和G4组肝胰腺溶菌酶mRNA相对表达量均有所降低,且G4组达到显著降低(P<0.05)。肝胰腺超氧化物歧化酶mRNA相对表达量以G2组为最高,显著高于G3组(P<0.05)。G4组的肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶mRNA相对表达量最高,与G2组差异不显著(P>0.05),但显著高于G0、G1和G3组(P<0.05)。由此得出,饲料中βG与Se二者联合添加能一定程度地提高凡纳滨对虾的免疫防御功能,可作为凡纳滨对虾的复合免疫增强剂。 展开更多
关键词 凡纳滨对虾β-葡聚糖 维生素E 组织生化指标 MRNA表达
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hTERT基因核心启动子调控的TRAIL基因表达载体的构建及对卵巢癌细胞凋亡的影响 被引量:5
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作者 李红梅 宋天保 +4 位作者 于月成 曹云新 王红英 宋晖 张明 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期243-246,共4页
目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法... 目的:构建了人端粒酶逆转录酶(humantelomeraseresersetranscription,hTERT)基因核心启动子调控的肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(TNF-relatedapoptosisinducingligand,TRAIL)基因真核表达载体并观察其对卵巢癌细胞凋亡的诱导作用。方法:从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR技术扩增了TRAIL基因片段。测序正确后,利用基因重组方法将TRAIL基因克隆入带有hTERT基因核心启动子pIRES2-EGFP真核表达载体中。获得由hTERT基因核心启动子调控的绿色荧光蛋白和带有效应型TRAIL基因的真核表达载体hTER-Tpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL。用脂质体转染法,将其转染卵巢癌细胞系SKOV3细胞中,应用RT-PCR法检测转染前后卵巢癌细胞中外源基因的表达情况,以流式细胞术检测TRAIL对卵巢癌细胞的细胞周期的影响及诱导凋亡的作用。结果:经酶切鉴定及测序结果证实,所构建的重组载体正确。转染hTERTpromoter-pIRES2-EGFP-TRAIL载体后,SKOV3细胞的增殖受到抑制,出现明显凋亡。结论:hTERT基因核心启动子在卵巢癌细胞中可特异性地调控其下游TRAIL基因的表达,并发挥其促凋亡作用。构建由hTERT基因核心启动子调控的表达载体,可能是一种新型和有希望的肿瘤治疗的途径。 展开更多
关键词 hTERT基因核心启动子 TRAIL基因 表达载体 卵巢癌细胞 凋亡
原文传递
贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化 被引量:16
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作者 杨陟华 范保星 +4 位作者 陆颖 曹珍山 于水 樊飞跃 朱茂祥 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第9期944-948,共5页
背景与目的:实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀(depleteduranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因... 背景与目的:实验研究和流行病学调查结果表明,铀可广泛地影响人体健康,但其远期效应,特别是致癌性,还缺乏明确的结论。本文模拟人吸入贫铀(depleteduranium,DU)气溶胶的情形,研究难溶性贫铀诱发人支气管上皮细胞恶性转化及肺癌相关基因表达谱。方法:用难溶性贫铀氧化物(dUO2)作用腺病毒-12/SV40病毒永生化的人支气管上皮细胞(BEAS-2B),通过观察不同代龄细胞的倍增时间、血清抗性、半固体琼脂克隆形成率及裸鼠成瘤性,鉴定细胞的恶性转化特性;用213个肺癌相关基因的芯片对贫铀诱发的转化BEAS-2B细胞的基因表达谱进行检测。结果:贫铀作用后的第5代BEAS-2B细胞倍增时间明显缩短,血清抗性显著增强;第10代细胞具有锚着独立性生长特性(半固体琼脂克隆形成);第15代裸鼠体内成瘤。二甲亚砜(DMSO)对贫铀诱发的BEAS-2B细胞恶性转化有明显保护效果。213个肺癌相关基因的芯片检测结果表明,转化细胞中有70多个基因的表达水平发生明显改变,其中10余个基因表达水平明显下降。结论:贫铀在体外具有致癌性。 展开更多
关键词 贫铀 人支气管上皮细胞 细胞恶性转化 基因表达
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杧果MGAPDH同源基因的克隆及其表达分析 被引量:11
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作者 罗聪 何新华 +2 位作者 胡颖 谭超 欧世金 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1019-1024,F0003,共7页
甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码... 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH)是糖代谢和能量代谢过程中的关键酶。根据GAPDH基因保守序列设计PCR引物,利用RT-PCR和改良RACE技术,首次从杧果中分离克隆出MGAPDH同源基因的cDNA全长序列。该序列全长为1 356 bp,开放阅读框为1 203 bp,编码401个氨基酸。利用分子生物学软件对MGAPDH蛋白进行生物信息学分析,结果显示:MGAPDH蛋白分子量为42.8 ku,等电点为8.9;该蛋白包含2个功能域,即NADB_Rossmannsuperfamily和Gp_dh_C superfamily;MGAPDH蛋白不含信号肽序列和跨膜结构,是非分泌蛋白,位于叶绿体中。氨基酸序列进化分析结果显示,杧果MGAPDH蛋白可能与光合作用有关。半定量分析显示,杧果MGAPDH同源基因在杧果不同组织中均表达,并且表达水平差异不明显,说明杧果MGAPDH同源基因可作为杧果基因差异表达的内参基因。 展开更多
关键词 杧果 甘油醛-3-磷酸脱氢酶(GAPDH) 表达分析 序列分析
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石蒜儿茶酚氧位甲基转移酶基因克隆与原核表达 被引量:6
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作者 梁丽建 江玉梅 +4 位作者 夏冰 蒋明敏 彭峰 何树兰 汪仁 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期23-28,共6页
采用同源克隆与RACE相结合的方法,首次从石蒜叶片中克隆到可能与加兰他敏生物合成相关的儿茶酚氧位甲基转移酶基因,命名为LrCOMT。核酸序列分析显示,该cDNA全长1 246bp,开放阅读框1 101bp,编码366氨基酸。氨基酸序列分析与比对发现,LrC... 采用同源克隆与RACE相结合的方法,首次从石蒜叶片中克隆到可能与加兰他敏生物合成相关的儿茶酚氧位甲基转移酶基因,命名为LrCOMT。核酸序列分析显示,该cDNA全长1 246bp,开放阅读框1 101bp,编码366氨基酸。氨基酸序列分析与比对发现,LrCOMT编码的氨基酸序列具有COMT蛋白的特征区域,且与鸢尾、玉米、烟草等植物COMT的同源性大于60%。将LrCOMT基因连接到原核表达载体pET-29a上,转化大肠杆菌BL21(DE3)的原核表达结果显示,重组蛋白受IPTG诱导表达,分子量大小约为40kD,与已报道的其他植物COMT大小基本一致。 展开更多
关键词 石蒜 儿茶酚氧位甲基转移酶基因 加兰他敏 原核表达
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人组织era基因mRNA的表达谱 被引量:7
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作者 纪宗玲 柴玉波 +3 位作者 陈苏民 张俊杰 陈南春 吴元明 《第四军医大学学报》 北大核心 2001年第18期1650-1652,共3页
目的 研究人 era基因 m RNA在不同组织、不同细胞系的表达水平 .方法 用 α([32 p]d CTP标记人 era编码区基因作为探针 ,分别用 Northern杂交和斑点杂交分析含 12种不同成人组织 m RNA的 Multiple tissue northern(MTN)blot膜和含 76... 目的 研究人 era基因 m RNA在不同组织、不同细胞系的表达水平 .方法 用 α([32 p]d CTP标记人 era编码区基因作为探针 ,分别用 Northern杂交和斑点杂交分析含 12种不同成人组织 m RNA的 Multiple tissue northern(MTN)blot膜和含 76种成人、胎儿及常用细胞系 m RNA的 Multipletissue expression (MTE) array膜 ,并用同位素扫描系统对杂交结果进行图像分析 .结果  Northern blot杂交所检测的 12种组织中均有位于 2 .2 kb处的杂交条带 ,斑点杂交显示人era m RNA在所检测的 76种组织中均有表达 ,但表达水平有很大差异 ,在神经系统、某些胎儿组织以及某些肿瘤细胞中高表达 .结论 人 era m RNA表达于所有检测的组织或细胞系 ,可能为一种组成性表达的基因 . 展开更多
关键词 基因 核酸杂交 基因表达 ERA基因
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