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Eupergit C_(250L)固定化D-海因酶及其催化性质 被引量：2
1
作者 丁成勇 徐晓滢 +2 位作者 马喆 刘辉 姚忠 《生物加工过程》 CAS CSCD 2006年第4期41-45,共5页
D-海因酶是海因酶法制备D-氨基酸的关键酶。利用Burkholderic cepecia1003菌发酵产酶,所得海因酶纯化后,以Eupergit C250L为载体进行共价固定化。分别考察了酶液蛋白浓度、固定化时间对蛋白固定量和酶活回收率的影响以及固定化前后海因... D-海因酶是海因酶法制备D-氨基酸的关键酶。利用Burkholderic cepecia1003菌发酵产酶,所得海因酶纯化后,以Eupergit C250L为载体进行共价固定化。分别考察了酶液蛋白浓度、固定化时间对蛋白固定量和酶活回收率的影响以及固定化前后海因酶催化性质的变化。结果表明:较高的酶液蛋白浓度和较长的固定化时间均有助于改善海因酶的固定化效果;固定化可显著提高海因酶的最适作用温度,但对其最适作用pH影响不大;固定化后海因酶对D,L-BH和MH的米氏常数均有较大幅度的降低。固定化酶反应器的实验表明:40℃下,底物(D,L-BH)1.0 g.L-1,体积流速1.0 mL.min-1,经21 h转化,产物N-Phe质量浓度可达0.47 g.L-1,转化率达43.21%。 展开更多
关键词 海因酶 eupergit C250L 固定化 性质
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Eupergit手性配体交换色谱固定相的制备及应用
2
作者 丁然 Van bracht. Hendrik +2 位作者 Stock. Elke Thomas-Helmut Scheper Danneel. Hans-Jürgen 《山西化工》 2013年第5期1-5,共5页
介绍了以Eupergit C 250L为载体,L-羟脯氨酸盐为手性配体,通过两者间的"一步交联反应",制备出一种新型的Eupergit手性配体交换固定相。交联反应过程简单、高效、副反应少。尝试通过此大颗粒的Eupergit手性配体固定相对丝氨... 介绍了以Eupergit C 250L为载体,L-羟脯氨酸盐为手性配体,通过两者间的"一步交联反应",制备出一种新型的Eupergit手性配体交换固定相。交联反应过程简单、高效、副反应少。尝试通过此大颗粒的Eupergit手性配体固定相对丝氨酸手性对映异构体进行拆分,得到了良好的拆分结果。为将来在工业领域内,通过使用制备型拆分柱来拆分手性氨基酸的设想提供了有利的技术支持。 展开更多
关键词 eupergit(R)C 250L 手性固定相 配体交换色谱 对映体分离
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颗粒状固定化青霉素酰化酶的研究 被引量：16
3
作者 韩辉 徐冠珠 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期204-208,共5页
将巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegaterium)胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚合物载体EupergitC颗粒环氧基团上 ,制成的颗粒状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 40 0 μ/g左右。固定化酶水解青霉素的最适 pH8 0 ,最适温度为 55℃。在pH6 0... 将巨大芽孢杆菌 (Bacillusmegaterium)胞外青霉素酰化酶通过共价键结合到聚合物载体EupergitC颗粒环氧基团上 ,制成的颗粒状固定化青霉素酰化酶表现活力达 1 40 0 μ/g左右。固定化酶水解青霉素的最适 pH8 0 ,最适温度为 55℃。在pH6 0～ 8 5、温度低于 40℃时固定化酶活力稳定。在 pH8 0、温度 37℃时 ,固定化酶对青霉素的表现米氏常数Ka为 2×1 0 - 2 mol/L ;苯乙酸为竞争性抑制剂 ,抑制常数Kip为 2 8× 1 0 - 2 mol/L ;6 APA为非竞争性抑制剂 ,抑制常数Kia为 0 1 2 5mol/L。固定化酶水解青霉素 ,投料浓度为 8% ,在使用 2 0 0批后 ,保留活力 80 %左右 ,6 APA收率平均达 89 48%。 展开更多
关键词 巨大芽孢杆菌 固定化青霉素酰化酶 环氧基 eupergit C
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粘质沙雷氏菌脂肪酶的固定化及催化拆分反式3-(4’-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯 被引量：8
4
作者 龙章德 许建和 潘江 《催化学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期175-179,共5页
对粘质沙雷氏菌脂肪酶进行了固定化研究,确定硅藻土和环氧树脂EupergitC是较好的固定化载体.固定化后酶的热稳定性、pH稳定性及储存稳定性均明显提高.以EupergitC共价固定的脂肪酶,其操作稳定性比硅藻土吸附酶好,重复使用10批次后,剩余... 对粘质沙雷氏菌脂肪酶进行了固定化研究,确定硅藻土和环氧树脂EupergitC是较好的固定化载体.固定化后酶的热稳定性、pH稳定性及储存稳定性均明显提高.以EupergitC共价固定的脂肪酶,其操作稳定性比硅藻土吸附酶好,重复使用10批次后,剩余酶活力还有50%左右,戊二醛交联对EupergitC固定化酶稳定性的提高没有明显效果,而硅藻土吸附酶经戊二醛交联后稳定性有所提高,经5批次反应后剩余酶活力还有50%.使用交联后的硅藻土固定化酶(1g,200U),在两相搅拌反应器(工作体积200ml,甲苯∶水体积比=1)中对地尔硫卓手性前体(±)-反式3-(4’-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯((±)-MPGM)(有机相浓度为0.5mol/L)进行了催化拆分,经5批次反应后,共得纯(2R,3S)-(-)-MPGM18.6g,产品光学纯度(对映体过量)>99%,总收率为37.2%. 展开更多
关键词 粘质沙雷氏菌 脂肪酶 固定化 对映选择性水解 反式3-(4’-甲氧苯基)缩水甘油酸甲酯 硅藻土 环氧树脂 eupergit C
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固定化γ-谷氨酰转肽酶的催化特性研究 被引量：3
5
作者 肖彦羚 周治 +2 位作者 姚忠 徐虹 韦萍 《现代化工》 CAS CSCD 北大核心 2009年第S2期147-149,151,共4页
B.subtilisNX-2产γ-谷氨酰转肽酶(GGT)经纯化后,以Eupergit C250 L为载体进行了共价固定化,固定化酶活回收率为17.59%,蛋白回收率为32.74%;活性位点滴定的结果表明固定化后,GGT活性位点浓度为游离酶的79.8%。固定化酶的最适pH和温度分... B.subtilisNX-2产γ-谷氨酰转肽酶(GGT)经纯化后,以Eupergit C250 L为载体进行了共价固定化,固定化酶活回收率为17.59%,蛋白回收率为32.74%;活性位点滴定的结果表明固定化后,GGT活性位点浓度为游离酶的79.8%。固定化酶的最适pH和温度分别为9.5和50℃,且温度和pH适用范围均有所扩大。测定得到了固定化GGT对供体(γGPNA)的米氏常数为Km=2.7463 mmol.L-1,谷氨酰基化反应催化常数为Kcat=2 670.01 min-1,较游离酶有所降低。固定化酶的温度及pH稳定性均较游离酶有大幅度提高,经50 d贮藏(4℃)和25个批次转化后,固定化GGT的残余活力仍可达初始值的79%。 展开更多
关键词 固定化 Γ-谷氨酰转肽酶 eupergitC250L 活性位点滴定
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固定化粪产碱杆菌青霉素G酰化酶的制备
6
作者 张怡婷 张柏超 +4 位作者 钱梦瑶 徐婷婷 倪楠 周芝兰 陈玮 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2014年第12期1430-1432,共3页
粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶通过共价结合在环氧型载体Eupergit C上,通过对酶质量浓度、固定化反应时间、pH值以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件:375mg比活力5 000U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适... 粪产碱杆菌来源的青霉素G酰化酶通过共价结合在环氧型载体Eupergit C上,通过对酶质量浓度、固定化反应时间、pH值以及反应温度等条件的考察,确定了最优固定化条件:375mg比活力5 000U/g的重组粪产碱杆菌青霉素G酰化酶蛋白对应1g载体,最适pH 8.0,反应温度30℃。反应120h后制得固定化青霉素G酰化酶活力达到220U/g,固定化酶效率为10.7%。该固定化酶可在含饱和乙酸丁酯磷酸缓冲液中彻底水解青霉素G钾盐。经过15批连续水解反应,固定化酶仍保持95%的活力,展现出良好的稳定性。 展开更多
关键词 固定化酶 粪产碱杆菌 青霉素G酰化酶 eupergitC
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