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云南省香格里拉市犬棘球绦虫感染因素分析
1
作者 李奔福 肖丹 +9 位作者 陆春花 史帅 严信留 字金荣 彭佳 李建雄 王正青 徐倩 吴方伟 杨亚明 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期281-285,共5页
从传染病网络直报系统、医院等收集香格里拉市有既往病例,以本地感染病例为线索,选择患病率高的建塘、小中甸和格咱镇为调查点。根据2019—2021年香格里拉市三个乡镇传染源犬监测数据,行政村的犬粪抗阳性率分为高、中、低3层,每层随机抽... 从传染病网络直报系统、医院等收集香格里拉市有既往病例,以本地感染病例为线索,选择患病率高的建塘、小中甸和格咱镇为调查点。根据2019—2021年香格里拉市三个乡镇传染源犬监测数据,行政村的犬粪抗阳性率分为高、中、低3层,每层随机抽取1~3个自然村作为研究点。2022年6月采用整群随机抽样法,每户采集1条犬粪样,随机采集路边无主犬/流浪犬粪样,每个乡(镇)调查犬200只以上,采用ELISA法犬粪抗原检测,家犬进行感染因素分析。共调查犬1587只,阳性64只,阳性率为4.03%(64/1587),其中家犬和无主犬或流浪犬棘球绦虫抗原阳性率分别为3.16%(35/1107)和6.04%(29/480)(χ^(2)=6.265,P<0.05)。建塘、小中甸和格咱镇阳性率分别为4.60%(41/891)、3.18%(14/440)和3.52%(9/256),各乡镇棘球绦虫粪抗原阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=12.030,P<0.05)。家犬感染以及其因素分析中,家犬公母阳性率分别是3.48%和2.68%,犬年龄组10周岁以上阳性率为4.11%,家犬性别和年龄组差异无统计学意义(χ^(2)=1.184、2.384,均P>0.05)。狼狗阳性率为5.56%,放养犬阳性率为36.36%,近3个月内没有驱虫犬阳性率为3.79%,投喂过病变脏器犬阳性率为17.20%。家犬品种、犬饲养方式和近3个月内是否驱过虫的犬和是否投喂过病变脏器的犬阳性率差异有统计学意义(χ^(2)=15.431、49.121、5.291、65.391,均P<0.05),Logistic回归分析显示4个因素均与犬棘球绦虫感染有显著关系。香格里拉市犬棘球绦虫感染率处于较高水平,应当着重强化对传染源犬的防控工作。 展开更多
关键词 棘球绦虫 感染因素 分析 云南省 香格里拉市
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新疆南疆地区小型啮齿动物多房棘球蚴感染现状与基因型 被引量：2
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作者 赵江山 王蒴 +2 位作者 张月 张海亭 杨涵琪 《中国热带医学》 北大核心 2025年第1期46-51,共6页
目的掌握新疆南疆地区小型啮齿动物多房棘球蚴感染现状及基因型,为当地制定防控措施提供理论依据。方法2023年在新疆和静县、阿图什市、乌恰县捕获小型啮齿类动物并剖检,从病变脏器中提取DNA,对Cox1和Nad2基因进行PCR扩增及测序,并应用M... 目的掌握新疆南疆地区小型啮齿动物多房棘球蚴感染现状及基因型,为当地制定防控措施提供理论依据。方法2023年在新疆和静县、阿图什市、乌恰县捕获小型啮齿类动物并剖检,从病变脏器中提取DNA,对Cox1和Nad2基因进行PCR扩增及测序,并应用MEGA软件构建系统进化树,用DnaSP软件进行基因多态性分析,应用NetWork10进行基因单倍型网络图绘制。结果在3个县(市)共捕捉小型啮齿动物1541只,以普通田鼠(817只,占比53.01%)和小林姬鼠(433至,占比28.1%)为主;经剖检和PCR鉴定,共发现13只小型啮齿动物感染多房棘球蚴,总感染率为0.84%(13/1541),其中11只为普通田鼠,感染率为1.35%(11/817),2只为小林姬鼠,感染率为0.46%(2/433),普通田鼠与小林姬鼠的棘球蚴感染率的差异无统计学意义(χ^(2)=2.15,P>0.05)。和静县、阿图什市、乌恰县小型啮齿动物多房棘球蚴感染率分别为1.40%(7/500)、1.14%(6/527)及0(χ^(2)=6.77,P<0.05)。系统进化树结果显示,13个分离株均属亚洲型。DNA多态性分析结果显示,Cox1基因序列单倍型多样性结果为Hd=0.834±0.054,低核苷酸多样性结果为Pi=0.00460±0.00087;Nad2单倍型多样性结果为Hd=0.758±0.076,核苷酸多样性结果为Pi=0.00599±0.00159,Cox1和Nad2基因存在高单倍体多样性和低核苷酸多样性。单倍型网络图显示,13条Cox1基因序列以H1为主单倍型,H2、H3、四川(AB477012)、新疆(MH259773)、哈萨克斯坦(AB461415)呈散射状分布,与之相连;13条Nad2基因序列与新疆(OP628494)、日本(OP628493)、哈萨克斯坦(AB461406)归为H1单倍型。结论新疆南疆地区和静县与阿图什市存在多房棘球蚴小型啮齿动物感染,普通田鼠和小林姬鼠可作为当地多房棘球绦虫的优势中间宿主,Cox1和Nad2基因存在遗传变异,13个分离株的基因型均为亚洲基因型,单倍型以H1为主。 展开更多
关键词 新疆南疆地区 小型啮齿动物 多房棘球蚴 基因型
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骨桥蛋白和p38MAPK信号通路在多房棘球蚴原头节发育中的作用
3
作者 徐刚 毛艺 +6 位作者 胡帅 葛宇飞 徐志 张玉梦 谢士伟 张宏伟 张示杰 《动物医学进展》 北大核心 2025年第1期9-15,共7页
为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选... 为明确骨桥蛋白(OPN)和多房棘球蚴(Echinococcus multilocularis,Em)p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号通路在Em发育过程的作用,剖检感染Em 4~6月的长爪沙鼠,提取Em原头节后,分别用不同浓度的p38MAPK抑制剂(SB202190)处理Em原头节,选取合适的SB202190浓度后在体外将原头节分为DMSO组、anti-p38MAPK组、PBS组、OPN组、OPN+anti-p38MAPK组,采用伊红染色、caspase-3试剂盒检测caspase-3、EDU和Hoechst染色、活性氧(ROS)检测探针检测原头节的活性、凋亡和增殖情况。结果显示,抑制Em的SB202190适宜浓度为20μmol/L,SB202190增加Em的伊红染色率、caspase-3水平,减少EDU阳性、ROS水平,OPN可减少Em伊红染色率、caspase-3水平,增加EDU阳性率、ROS水平,且SB202190可逆转OPN对Em的结果,这些结果表明SB202190可抑制Em的活性和增殖、促进凋亡并与浓度正相关,而OPN可促进Em的活性和增殖、抑制凋亡,且SB202190可逆转OPN对Em的作用。研究结果为OPN和p38MAPK信号通路可能成为治疗多房棘球蚴病的新分子靶点提供证据。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 多房棘球蚴病 骨桥蛋白 P38丝裂原活化蛋白激酶
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多房棘球蚴感染巨噬细胞中CD47和SIRPα表达变化与抑制作用的研究
4
作者 魏盼龙 张耀刚 +5 位作者 张涛 杨紫晗 侯静 田美媛 黄登亮 马艳艳 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第1期84-90,102,共8页
目的探究多房棘球蚴感染对巨噬细胞CD47与信号调节蛋白α(SIRPα)表达水平及巨噬细胞功能的影响,为探索多房棘球蚴病(AE)发病机制提供依据。方法收集30例AE患者的肝脏病理组织,选取病灶周围0.5 cm处的病灶近旁肝组织(CLT)和超过病灶2 c... 目的探究多房棘球蚴感染对巨噬细胞CD47与信号调节蛋白α(SIRPα)表达水平及巨噬细胞功能的影响,为探索多房棘球蚴病(AE)发病机制提供依据。方法收集30例AE患者的肝脏病理组织,选取病灶周围0.5 cm处的病灶近旁肝组织(CLT)和超过病灶2 cm以上的病灶远端肝组织(DLT),石蜡切片行免疫组化、冰冻切片行免疫荧光,观察分析CLT和DLT中CD47和SIRPα的表达水平。小鼠单核巨噬细胞白血病细胞(RAW264.7)与多房棘球蚴原头节共培养(细胞数∶原头节数=500∶1),分别于加入原头节前、共培养24和48 h后收集细胞,流式细胞术、细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR(qPCR)检测巨噬细胞CD47和SIRPα的表达变化。RAW264.7细胞分为对照组、感染组、抑制剂组和抑制剂感染组(1×10^(5)个/组),感染组和抑制剂感染组加入原头节(200个/组)、抑制剂组和抑制剂感染组加入CD47/SIRPα结合抑制剂(NCGC00138783TFA,10µmol/L),共培养48 h后加入增强型绿色荧光蛋白(EGFP)标记的大肠埃希菌(1×10^(6)个/组),荧光观察后流式细胞术检测巨噬细胞吞噬能力变化,qPCR检测巨噬细胞极化标志物和细胞因子mRNA相对转录水平的变化。两组间比较采用独立样本t检验或配对t检验,多组间比较用单因素方差分析,多重比较使用Tukey’s HSD法。结果免疫组化结果显示,AE患者CLT的CD47、SIRPα阳性细胞分别占(61.99±3.61)%、(54.06±1.85)%,均高于DLT的(57.08±3.38)%、(40.77±1.49)%(t=9.434、58.840,均P<0.01);免疫荧光结果显示,CLT的CD47/SIRPα皮尔逊相关系数为0.66±0.02,高于DLT的0.45±0.01(t=7.624,P<0.01)。流式检测结果显示,共培养24和48 h后的巨噬细胞CD47中位荧光强度分别为8259.00±66.01和9445.00±41.58,均高于加入原头节前的5603.00±193.40(HSD=0.691、0.735,均P<0.01);共培养24和48 h后的巨噬细胞SIRPα中位荧光强度分别为3123.00±184.60和2931.00±54.08,均高于加入原头节前的2508.00±43.15(HSD=0.491、0.235,均P<0.01)。qPCR结果显示,共培养24和48 h后的巨噬细胞CD47 mRNA相对转录水平分别为1.80±0.02和1.64±0.01,均高于加入原头节前的0.99±0.01(HSD=0.098、0.125,均P<0.01);加入原头节前、共培养24和48 h后的巨噬细胞SIRPαmRNA相对转录水平分别为1.00±0.02、0.52±0.05和1.27±0.03,24 h后低于加入原头节前(HSD=0.015,P<0.01),48 h后高于加入原头节前(HSD=0.105,P<0.01)。免疫荧光结果显示,共培养24和48 h后的CD47/SIRPα皮尔逊相关系数分别为0.920±0.001和0.990±0.001,均高于加入原头节前的0.770±0.001(HSD=0.091、0.135,均P<0.01)。荧光结果显示,抑制剂感染组的EGFP平均荧光强度为8923.0±49.3,高于感染组的7537.0±29.3(HSD=0.205,P<0.01);流式检测结果显示,抑制剂感染组的EGFP平均荧光强度为21.54±0.03,高于感染组的18.55±0.51(HSD=0.327,P<0.01)。qPCR结果显示,抑制剂感染组M1型标志物诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、CD86的mRNA相对转录水平分别为20.87±0.40、40.64±0.75,均高于感染组的5.38±0.11和3.79±0.05(HSD=0.194、0.261,均P<0.01);M2型标志物精氨酸酶1(Arg1)、CD206的mRNA相对转录水平分别为48.76±2.22、6.33±0.06,均低于感染组的83.28±0.58和12.33±0.12(HSD=0.283、0.164,均P<0.01)。抑制剂感染组M1型细胞因子白细胞介素6(IL-6)、IL-1β、、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的mRNA相对转录水平分别为3896.00±176.70、271.30±8.39和4.90±0.10,均高于感染组的2869.00±89.55、154.90±2.61和3.04±0.03(HSD=0.712、0.625、0.693,P<0.05、0.01、0.01);M2型细胞因子IL-10、转化生长因子β(TGF-β)的mRNA相对转录水平分别为127.40±4.92、1.34±0.03,均低于感染组的380.30±8.55和1.61±0.02(HSD=0.324、0.163,均P<0.01)。结论多房棘球蚴感染后巨噬细胞的CD47和SIRPα表达升高、吞噬能力下降,特异性抑制CD47/SIRPα结合能够改善巨噬细胞吞噬功能并促进巨噬细胞向M1型极化。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 免疫检查点 吞噬作用 巨噬细胞极化
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一种多房棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶体外荧光底物酶活性检测方法
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作者 陈嘉瑀 戴瑶 +7 位作者 王顺娟 肖杨 闫鑫宗 刘通 袁智浩 史凯丽 李润乐 汤锋 《中国人兽共患病学报》 北大核心 2025年第1期23-31,共9页
目的构建多房棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶(leucyl aminopeptidase,LAP)体外荧光酶活性检测方法,并与化学发色底物酶活性检测方法进行对比。方法确立荧光底物体外酶活性检测方法的反应条件,并通过分子对接、抑制率、精密度对比荧光底物L-亮氨... 目的构建多房棘球绦虫亮氨酸氨基肽酶(leucyl aminopeptidase,LAP)体外荧光酶活性检测方法,并与化学发色底物酶活性检测方法进行对比。方法确立荧光底物体外酶活性检测方法的反应条件,并通过分子对接、抑制率、精密度对比荧光底物L-亮氨酸-7-氨基-4-甲基香豆素盐酸盐(Leu-AMC)与化学发色底物L-亮氨酸-4-硝基苯氨(Leu-pNA)之间的差异。结果分子对接结果显示荧光底物Leu-AMC与蛋白的亲和力大于化学发色底物Leu-pNA。通过观察改变反应条件对荧光强度的影响,确立荧光酶活性检测方法在反应温度为37℃、反应pH为9.0、蛋白浓度为800 nmol/L、反应时长60 min的情况下该检测方法反应效果明显。Leu-AMC在5μmol/L的底物浓度和底物浓度变化的情况下有明显的反应效果和反应差异,通过加入不同抑制剂,荧光底物检测方法相较于化学发色底物检测方法存在组间差异。结论本研究构建了以Leu-AMC为底物的多房棘球蚴亮氨酸氨基肽酶体外荧光酶活性检测方法,与化学发色底物相比该方法灵敏度更高。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 LAP Leu-AMC 酶活性
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多房棘球蚴感染小鼠模型淋巴结记忆性T细胞及其相关因子表达分析
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作者 李寅时 阿迪莱·多力坤 +9 位作者 邓冰清 阿比旦·艾尼瓦尔 孙胜 肖雯颖 葛聪蕙 唐娜 李静 王慧 姜涛 张传山 《中国血吸虫病防治杂志(中英文)》 北大核心 2025年第2期136-143,189,共9页
目的探讨不同阶段多房棘球蚴感染对小鼠淋巴结记忆性T(memory T,Tm)细胞及其亚群表达水平的影响,为多房棘球蚴病免疫治疗提供新思路。方法24只6~9周龄C57BL/6J小鼠随机分成感染组和对照组,每组12只;感染组小鼠经肝门静脉注射3000个原头... 目的探讨不同阶段多房棘球蚴感染对小鼠淋巴结记忆性T(memory T,Tm)细胞及其亚群表达水平的影响,为多房棘球蚴病免疫治疗提供新思路。方法24只6~9周龄C57BL/6J小鼠随机分成感染组和对照组,每组12只;感染组小鼠经肝门静脉注射3000个原头节,对照组小鼠注射相同体积生理盐水。于感染后第4、12、24周,每组小鼠分别各随机取3只处死,取淋巴结组织后采用苏木精⁃伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色法观察感染组小鼠淋巴结组织病理变化。通过免疫组织化学染色观察小鼠淋巴结组织中T淋巴细胞表面标志物CD3、CD4和CD8分子表达及定位。提取不同感染时间两组小鼠淋巴结淋巴细胞悬液,采用流式细胞术检测Tm细胞亚型及其分泌的细胞因子水平。结果多房棘球蚴感染后4周,HE染色显示感染组小鼠淋巴结被膜下的皮质和副皮质区域结构呈弥漫性改变。免疫组织化学染色结果显示,感染组和对照组小鼠淋巴结组织中均有CD3、CD4和CD8分子表达。流式细胞术检测结果显示,感染后4周,感染组小鼠淋巴结中CD4^(+)Tm[(55.3±4.8)%vs.(38.8±6.1)%;t=-4.259,P<0.05]、CD4^(+)组织驻留记忆性T(tissue⁃resident memory T,Trm)细胞比例[(57.7±3.7)%vs.(34.1±11.2)%;t=-3.990,P<0.05]均显著高于对照组;感染后24周,感染组小鼠淋巴结中CD4^(+)Tm[(34.6±3.2)%vs.(23.3±7.5)%;t=-2.764,P<0.05]、CD4^(+)Trm细胞比例[(44.0±1.9)%vs.(31.2±1.5)%;t=-4.039,P<0.05]亦显著高于对照组。感染后4周[(56.8±2.7)%vs.(43.9±5.2)%;t=-4.416,P<0.01]和12周[(25.4±2.7)%vs.(12.0±2.6)%;t=-2.552,P<0.05],感染组小鼠淋巴结中CD8^(+)Tm细胞比例均显著高于对照组;感染后24周,感染组小鼠淋巴结中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)⁃α^(+)CD4^(+)T[(15.7±5.0)%vs.(49.4±6.4)%;t=7.150,P<0.01]、TNF⁃α^(+)CD8^(+)T细胞比例[(20.7±5.5)%vs.(57.5±8.4)%;t=-6.694,P<0.01]和TNF⁃α^(+)CD8^(+)Tm细胞比例[7.0%(1.0%)vs.31.0%(11.0%);Z=-2.236,P<0.05]均显著低于对照组。结论多房棘球蚴感染不同阶段小鼠淋巴结组织中Tm细胞均增加,以Trm细胞增加为主;晚期感染阶段,小鼠淋巴结组织中CD8^(+)Tm细胞分泌效应分子TNF⁃α能力减弱,可能有助于多房棘球蚴慢性寄生。 展开更多
关键词 多房棘球蚴病 多房棘球蚴 淋巴结 记忆性T细胞 组织驻留记忆性T细胞
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小鼠多房棘球蚴感染过程中IFITM3与Foxp3相互作用的研究
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作者 袁振 地达尔·叶尔革命 +5 位作者 王菲 姜涛 段明军 阿尔孜古丽·吐尔逊 齐新伟 单骄宇 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第4期503-510,共8页
目的探究小鼠多房棘球蚴感染过程中干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)与叉头框P3蛋白(Foxp3)相互作用关系。方法从保种沙鼠肝脏组织中收集多房棘球蚴原头节,腹腔注射建立多房棘球蚴感染C57BL/6J小鼠模型。分别于感染后15、30、60、90 d安乐... 目的探究小鼠多房棘球蚴感染过程中干扰素诱导跨膜蛋白3(IFITM3)与叉头框P3蛋白(Foxp3)相互作用关系。方法从保种沙鼠肝脏组织中收集多房棘球蚴原头节,腹腔注射建立多房棘球蚴感染C57BL/6J小鼠模型。分别于感染后15、30、60、90 d安乐处死小鼠收集肝脏组织,设置未感染对照组。通过苏木精‑伊红(HE)染色法,Masson染色和免疫组化染色观察不同感染时间点小鼠肝脏组织病理变化。通过蛋白质免疫印迹(Western blotting)进一步检测肝组织IFITM3和Foxp3蛋白的相对表达量。HEK‑293T细胞转染IFITM3‑ShRNA干扰质粒(ShIFITM3‑1、ShIFITM3‑2、ShIFITM3‑3),筛选最优敲低片段进行剂量依赖性实验(以0、0.5、1.0、1.5、2.0μg转染),进一步检测Foxp3表达变化。采用AutoDock软件进行IFITM3‑Foxp3分子对接分析,随后将带标签质粒HA‑IFITM3与Flag‑Foxp3a转染至HEK‑293T细胞中,提取细胞总蛋白,进行免疫共沉淀验证二者相互作用。结果HE染色结果显示,多房棘球蚴感染小鼠肝组织结构紊乱、炎性细胞浸润逐渐加重。Masson染色结果显示对照组无明显蓝染区,感染组蓝染面积逐渐增加,感染后15、30、60、90 d蓝染面积占比分别是(22.12±3.09)%、(28.57±2.1)%、(41.20±2.01)%、(58.30±2.21)%(F=135.60,P<0.01)。免疫组化染色结果显示IFITM3阳性表达率由对照组(20.18±7.25)%上升至感染后90 d的(56.22±4.49)%(F=25.40,P<0.05);Foxp3阳性表达率由对照组(2.12±1.49)%上升至感染后90 d的(59.10±4.45)%(F=106.30,P<0.05)。Western blotting检测结果显示,IFITM3相对表达量在感染后15 d下降至0.27±0.04,随后上升,至感染后90 d达1.01±0.05(F=52.37,P<0.05);Foxp3相对表达量随感染时间延长逐步升高,由对照组的0.03±0.01增加至90 d时的0.97±0.03(F=143.20,P<0.05);二者表达水平呈正相关(R2=0.6873,P<0.05)。ShIFITM3‑1、ShIFITM3‑2、ShIFITM3‑3质粒的转染均使IFITM3相对表达量降低(为0.32±0.02、0.23±0.05、0.53±0.09),其中ShIFITM3‑2敲低效率最佳(F=37.05,P<0.01);Foxp3相对表达量随0、0.5、1.0、1.5、2.0μg的ShIFITM3‑2转染后逐渐降低,分别为1.10±0.14、0.62±0.05、0.52±0.04、0.49±0.01、0.33±0.05(F=42.06,P<0.01)。分子对接表明,IFITM3与Foxp3的对接评分为-312 kcal/mol,具有良好的亲和作用。免疫共沉淀实验结果表明,IFITM3与Foxp3存在相互作用关系。结论小鼠多房棘球蚴感染过程中IFITM3与Foxp3存在相互作用关系,二者表达水平与肝组织损伤程度呈正相关。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 干扰素诱导的跨膜蛋白3 叉头框P3蛋白 蛋白互作关系
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多房棘球蚴Calpain A基因克隆、表达及其多克隆抗体制备
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作者 李慧敏 张少华 +5 位作者 张月玥 王帅 生鸿鹏 李雅琪 王得先 蒋佳颖 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第1期8-13,共6页
目的分析并克隆多房棘球蚴Calpain A(Em-Calpain A)基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,进行体外诱导表达并制备兔多克隆抗体。方法从WormBase数据库下载多房棘球绦虫Em-Calpain A基因ORF序列。采用ProtParam、SMART等在线工... 目的分析并克隆多房棘球蚴Calpain A(Em-Calpain A)基因开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)序列,进行体外诱导表达并制备兔多克隆抗体。方法从WormBase数据库下载多房棘球绦虫Em-Calpain A基因ORF序列。采用ProtParam、SMART等在线工具对其理化性质、蛋白结构域等进行分析和预测;利用MEGA 7.0软件的邻接法构建系统进化树。提取原头蚴总RNA并反转录为cDNA,PCR扩增Calpain A基因,构建pET28a-Em-Calpain A原核表达载体,经异丙基硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达重组蛋白,纯化后免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,采用10%SDS-PAGE、Western blot和ELISA对重组蛋白纯度和抗体滴度及反应性进行鉴定。结果序列分析表明Em-Calpain A基因ORF长度为2469 bp,编码822个氨基酸,推测理论分子质量约92.13 ku,等电点为5.3。蛋白结构分析显示Em-Calpain A具有1个高度保守的钙蛋白酶样硫醇蛋白酶结构域(CysPc)、1个钙蛋白酶Ⅲ结构域(CalpainⅢ)和2个E、F的螺旋-环-螺旋结构(EF-hand),说明其属于钙蛋白酶家族。系统进化分析显示Em-Calpain A序列与带科绦虫聚于一类,与肝片吸虫、日本血吸虫、人、犬、牛及原虫亲缘关系较远。重组蛋白主要以包涵体形式表达,蛋白分子质量约为93 ku,与预测分子质量大小基本一致。ELISA检测结果显示制备的多克隆抗体效价达1∶262144;该抗体可特异性识别His-Em-Calpain A和原头蚴天然Calpain A蛋白。结论成功构建Em-Calpain A基因的原核表达系统并制备了其多克隆抗体,为研究该基因的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 Calpain A 序列分析 基因克隆 表达纯化 多克隆抗体
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成纤维活化蛋白在泡球蚴感染所致肝纤维化中的作用
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作者 郑雪 张宏斌 +7 位作者 石博文 李小童 孙涛 薛俊隆 李亮 林仁勇 毕晓娟 程路峰 《中国热带医学》 北大核心 2025年第11期1467-1472,共6页
目的探讨成纤维活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在泡球蚴感染引起肝纤维化过程中的作用。方法选取C57BL/6雌性小鼠通过肝门静脉注射泡球蚴生理盐水混悬液构建泡球蚴感染模型,分别感染1、3、6个月后取出小鼠肝脏组织,HE染... 目的探讨成纤维活化蛋白(fibroblast activation protein,FAP)在泡球蚴感染引起肝纤维化过程中的作用。方法选取C57BL/6雌性小鼠通过肝门静脉注射泡球蚴生理盐水混悬液构建泡球蚴感染模型,分别感染1、3、6个月后取出小鼠肝脏组织,HE染色和天狼星红染色检查肝脏组织病理学变化,免疫组织化学法检测α-平滑肌肌动蛋白(alphasmooth muscle actin,α-SMA)、胶原Ⅰ(collagen typeⅠ,COL1A1)和FAP表达情况,检测肝纤维化程度。RT-qPCR和West⁃ern blot检测小鼠肝脏组织中α-SMA、COL1A1、胶原Ⅲ(collagen typeⅢ,COL3A1)和FAP mRNA及蛋白表达。采用相关分析法分析FAP表达与肝纤维化的相关性。结果在泡球蚴感染1、3、6个月小鼠肝纤维化模型中,HE显示小鼠肝脏病理变化加重,天狼星红染色显示胶原纤维组织增多(阳性面积分别为1372±769.2、2952±555.5、6594±1708.0),差异有统计学意义(P<0.01)。免疫组化、Western blot和RT-qPCR结果显示,α-SMA、COL1A1和FAP表达随时间上升,α-SMA阳性面积分别为1533±669.7、3005±690.5和6596±1649.0,COL1A1阳性面积分别为1990±432.8、3849±627.6和6527±1027.0,FAP阳性面积分别为956.9±192.5、1875±414.0、3537±888.3,与对照组比较差异有统计学意义(P<0.01),且均呈时间依赖。此外,FAP阳性面积与天狼星红染色、α-SMA和COL1A1纤维组织阳性面积均呈正相关(R^(2)_(sirius red)=0.6452,P<0.01;R^(2)_(α-SMA)=0.6515,P<0.01;R^(2)_(COL1A1)=0.8118,P<0.01)。结论FAP可能参与了泡球蚴感染引起的肝纤维化的发生和发展,有望成为评估肝纤维化程度及治疗肝纤维化的潜在靶点。 展开更多
关键词 肝纤维化 成纤维活化蛋白 泡型棘球蚴病 泡球蚴
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细粒棘球绦虫EgBAL蛋白的生物信息学分析及原核表达
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作者 赵文卿 薄新文 +6 位作者 普娜 张玉霞 陈旭珂 张艳艳 孙艳 齐萌 王正荣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第2期801-810,共10页
[目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(Ge... [目的]探究细粒棘球绦虫(Echinococcus granulosus)胆盐活化脂肪酶(EgBAL)的生物信息学特征并进行原核表达,检测EgBAL重组蛋白的免疫原性,为囊性棘球蚴病疫苗抗原筛选提供理论依据。[方法]从NCBI数据库获取细粒棘球绦虫EgBAL基因序列(GenBank登录号:HM748917),设计特异性引物,以细粒棘球绦虫原头蚴cDNA为模板,通过PCR扩增并克隆EgBAL基因。使用Mega 7.0软件,通过邻接法(NJ)构建系统进化树,运用生物信息学软件对EgBAL蛋白理化性质和结构特征进行预测分析。构建含EgBAL基因重组pET-22b质粒,并转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞诱导表达EgBAL重组蛋白,通过SDS-PAGE检测蛋白表达情况,并进行纯化。利用Western blotting分析重组蛋白的免疫原性。[结果]细粒棘球绦虫EgBAL基因片段大小为1 020 bp。系统进化树显示,EgBAL蛋白与中华树鼩EgBAL蛋白处于同一分支,进化距离较近,相似性高达99.60%。生物信息学分析显示,EgBAL基因全长1 014 bp,编码337个氨基酸,EgBAL蛋白分子质量为37 089.59 u,理论等电点为4.77,不稳定指数为44.72,为不稳定蛋白,脂肪系数为66.11,亲水性为-0.429,为亲水性蛋白,无跨膜区域及信号肽。EgBAL蛋白具有14个潜在B细胞抗原表位,二级结构包括α-螺旋、延伸链、β-转角和无规则卷曲,分别占27.90%、12.76%、12.76%和56.08%。此外,EgBAL蛋白含有35个磷酸化位点,其中包括12个丝氨酸磷酸化位点、16个苏氨酸磷酸化位点和7个酪氨酸磷酸化位点。本研究成功构建重组pET-22b-EgBAL质粒,诱导表达得到EgBAL重组蛋白大小约38 ku。Western blotting结果显示,该重组蛋白可被细粒棘球绦虫感染的昆明小鼠和犬的阳性血清识别,具有良好的免疫原性。[结论]本研究成功克隆了细粒棘球绦虫EgBAL基因、表达了EgBAL重组蛋白,并初步证实重组EgBAL蛋白具有较好的免疫原性,提示其有作为囊型棘球蚴病疫苗或诊断候选抗原的潜力,为进一步研究EgBAL蛋白的功能提供了科学依据。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgBAL基因 生物信息学分析 原核表达
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细粒棘球绦虫钙网蛋白的原核表达及功能初步鉴定
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作者 普娜 薄新文 +5 位作者 赵文卿 陈旭珂 张玉霞 张艳艳 孙艳 王正荣 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 北大核心 2025年第2期223-230,共8页
目的原核表达细粒棘球绦虫钙网蛋白,并对其功能进行初步探索。方法以细粒棘球绦虫原头节cDNA为模板,PCR扩增目的基因,连接至pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET28a-CRT,将测序正确的重组质粒转化至表达菌BL21诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚... 目的原核表达细粒棘球绦虫钙网蛋白,并对其功能进行初步探索。方法以细粒棘球绦虫原头节cDNA为模板,PCR扩增目的基因,连接至pET-28a(+)载体,构建重组质粒pET28a-CRT,将测序正确的重组质粒转化至表达菌BL21诱导表达,经十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺(SDS-PAGE)电泳以及蛋白质免疫印迹(Westernblotting)分析鉴定rEgCRT;应用在线生物信息学分析软件分析EgCRT表达蛋白理化性质及部分生物学功能;rEgCRT免疫小鼠制备多克隆抗体,并用间接ELISA和Westernblotting检测其抗体效价及反应原性;应用间接免疫荧光分析CRT在原头节和成虫体内的分布以及rEgCRT与犬小肠上皮细胞的结合;应用RT-qPCR方法分析crt基因在虫体不同发育阶段转录水平及rEgCRT(实验组,PBS为对照组)对犬小肠上皮细胞凋亡、焦亡的影响。结果CRT蛋白分子式为C_(2033)H_(3051)N_(511)O_(650)S_(9),预测EgCRT蛋白α-螺旋占24.05%、无规则卷曲占60.00%,延伸链结构占15.95%。EgCRT与多房棘球绦虫和猪带绦虫的CRT在系统进化树上聚在一大分支。成功诱导表达纯化获得纯度较高且相对分子量约为50000的rEgCRT;免疫学特性鉴定表明rEgCRT具有较好的抗原特异性;间接免疫荧光试验发现EgCRT可分别定位于原头节表皮层和成虫表皮层及部分实质组织。RT-qPCR分析结果显示,成虫阶段EgCRT的表达水平(24.83±0)高于原头节阶段(27.05±0.008)(t=45.76,P<0.01)。间接免疫荧光分析结果显示,rEgCRT共孵育的犬小肠上皮细胞有绿色荧光聚集。RT-qPCR结果显示,培养24 h后实验组和对照组Bax相对转录水平分别为31.63±0.001、24.17±0.027(t=7.94,P<0.01),表达上调;Bcl-2相对转录水平分别为34.55±0.070、19.65±0.042(t=15.70,P<0.01),表达下调;IL-18相对转录水平分别为25.62±0.067、20.93±0.014(t=5.05,P<0.01),表达下调;IL-1β相对转录水平分别为28.18±0.001、28.71±0.020(t=0.26,P>0.05),表达下调。结论rEgCRT具有良好的抗原性,EgCRT在细粒棘球绦虫不同虫期均有表达,且其可能在细粒棘球绦虫固着、定植或生长发育中具有重要的作用;此外,rEgCRT与犬SIECs发生黏附并调节细胞的凋亡、焦亡,可能参与感染过程或宿主免疫应答,具有作为潜在疫苗候选分子、药物靶标的应用前景。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 钙网蛋白 克隆表达 免疫荧光 分子功能
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通过对比转录组分析法寻找多房棘球绦虫成囊与成虫发育差异基因
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作者 闫鑫宗 肖杨 +7 位作者 戴瑶 刘文婧 李俊秀 崔家咏 祁悦林 陈嘉瑀 李润乐 胥瑾 《中国高原医学与生物学杂志》 2025年第2期104-110,共7页
目的拟通过对比转录组分析法寻找多房棘球绦虫成囊与成虫发育差异基因。方法基于负二项分布原理利用生物信息学edgeR软件对NCBI数据库的多房棘球绦虫不同发育阶段(原头蚴、囊泡和成虫)转录组测序数据进行对比分析,并用Benjamini-Hochber... 目的拟通过对比转录组分析法寻找多房棘球绦虫成囊与成虫发育差异基因。方法基于负二项分布原理利用生物信息学edgeR软件对NCBI数据库的多房棘球绦虫不同发育阶段(原头蚴、囊泡和成虫)转录组测序数据进行对比分析,并用Benjamini-Hochberg法校正P值。将获取的基因通过Wormbase Parasite数据库注释,再进一步通过生物信息学GO软件对差异基因进行分子功能、生物进程及细胞组分分析,通过生物信息学KEGG软件对差异基因进行通路显著性富集分析。结果对比分析NCBI数据库的多房棘球绦虫不同发育阶段(原头蚴、囊泡和成虫)转录组测序数据的结果显示,从原头节向囊泡的发育过程中,有2910个阶段性差异基因,通过GO、KEGG富集分析发现,差异基因主要富集在细胞质囊泡形成等过程,涉及糖酵解、糖异生和三羧酸循环信号通路等能量代谢通路;从原头节向成虫的发育过程中,有5950个阶段性差异基因,通过GO、KEGG富集分析发现,差异基因主要富集在运动发育等过程,涉及雌激素信号通路等分化免疫相关通路。在成囊分化过程中,糖酵解途径中的乳酸脱氢酶等3个糖酵解代谢酶和三羧酸有氧代谢途径中的苹果酸脱氢酶等3个关键酶表达上调;而在成虫分化过程中,糖酵解途径中的果糖二磷酸脱氢酶等6个关键酶表达上调。结论通过对比转录组分析发现,多房棘球绦虫原头节成囊与成虫分化关键基因存在高度差异性;多房棘球绦虫在成囊分化过程中的能量代谢呈现出以无氧糖酵解和有氧三羧酸循环并存的特征,而在成虫分化过程中的能量代谢呈现出无氧糖酵解代谢特征。 展开更多
关键词 多房棘球绦虫 转录组 基因
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细粒棘球绦虫MAPⅡ生物信息学分析及其在虫体不同阶段表达差异研究
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作者 陈旭珂 普娜 +8 位作者 张玉霞 赵文卿 赵家欣 黄俊程 魏琳颖 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第7期3286-3296,共11页
【目的】研究甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(methionine aminopeptidaseⅡ,MAPⅡ)的分子特征、反应原性及其在虫体不同发育阶段的表达情况,提供一种对终末宿主具有保护作用的疫苗候选抗原。【方法】对MAPⅡ蛋白进行生物信息学分析,包括系统进化树... 【目的】研究甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(methionine aminopeptidaseⅡ,MAPⅡ)的分子特征、反应原性及其在虫体不同发育阶段的表达情况,提供一种对终末宿主具有保护作用的疫苗候选抗原。【方法】对MAPⅡ蛋白进行生物信息学分析,包括系统进化树构建、理化性质分析及信号肽、跨膜区、抗原表位、磷酸化和糖基化位点、二级结构、三级结构预测。通过原核系统表达MAPⅡ蛋白并验证重组蛋白的抗原性,同时进行虫体不同发育阶段转录水平分析。【结果】细粒棘球绦虫MAPⅡ蛋白与终末宿主犬、中间宿主绵羊中MAPⅡ蛋白亲缘关系较远。MAPⅡ蛋白由453个氨基酸组成,分子质量为51023.75 u,不稳定系数为36.6,为稳定蛋白;平均疏水性指数为-0.609,亲水性较好。不存在信号肽与跨膜区。MAPⅡ蛋白具有良好的B细胞线性表位,共有38个磷酸化位点,1个N-糖基化位点。MAPⅡ蛋白二级结构以α-螺旋和无规则卷曲为主,占比分别为33.55%和51.88%;三级结构预测显示其为单体蛋白,GMQE值为0.85。通过原核系统表达出的MAPⅡ重组蛋白能与感染细粒棘球绦虫犬的阳性血清结合,抗原性良好。MAPⅡ蛋白在原头蚴阶段和成虫阶段均有表达,且成虫阶段表达量显著高于原头蚴阶段(P<0.05)。【结论】MAPⅡ蛋白结构稳定,具有优势抗原表位,MAPⅡ重组蛋白免疫原性良好,其在细粒棘球绦虫不同发育阶段特别是成虫阶段发挥着重要作用,可作为细粒棘球绦虫终末宿主疫苗候选抗原。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 甲硫氨酸氨基肽酶Ⅱ(MAPⅡ) 生物信息学 原核表达 转录水平
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热休克蛋白70抑制剂联合阿苯达唑干预对多房棘球蚴感染小鼠病灶活性和淋巴细胞亚群的影响
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作者 阿迪莱·多力坤 李寅时 +9 位作者 邓冰清 阿比旦·艾尼瓦尔 孙胜 肖雯颖 葛聪蕙 唐娜 李静 高春花 王慧 张传山 《新疆医科大学学报》 2025年第3期277-285,共9页
目的探讨热休克蛋白70抑制剂(Apoptozole,Az)联合阿苯达唑(Albendazole,ABZ)干预对多房棘球蚴感染小鼠模型病灶活性和淋巴细胞亚群的影响。方法无菌分离多房棘球绦虫原头节,以每只小鼠腹腔注射10000枚的剂量接种雌性Balb/c小鼠27只。在... 目的探讨热休克蛋白70抑制剂(Apoptozole,Az)联合阿苯达唑(Albendazole,ABZ)干预对多房棘球蚴感染小鼠模型病灶活性和淋巴细胞亚群的影响。方法无菌分离多房棘球绦虫原头节,以每只小鼠腹腔注射10000枚的剂量接种雌性Balb/c小鼠27只。在感染4周后,将27只小鼠随机分为对照组(腹腔注射1.4%DMSO)、Az组(腹腔注射4mg/kg Apoptozole)和Az+ABZ组(腹腔注射4 mg/kg Apoptozole+4 mg/kg ABZ),每组9只,每两天注射1次,连续注射6周。收集各组小鼠病灶组织样本进行石蜡包埋和HE染色,观察组织的病理学变化。采用免疫组化方法检测病灶组织中Em 18和Em 14-3-3蛋白的表达水平,评价病灶活性。分离小鼠肝脏、脾脏和腹腔淋巴细胞,采用流式细胞术检测和分析各组小鼠肝脏、脾脏和腹腔中淋巴细胞亚群的比例变化。结果HE染色结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠病灶组织中炎性细胞浸润比较明显。免疫组化结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠病灶组织中Em 14-3-3和Em 18蛋白表达水平降低,差异有统计学意义(P<0.001)。流式细胞术检测结果显示:与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠肝脏NK细胞和B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,Az+ABZ组小鼠肝脏T细胞表达比例降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,Az组小鼠肝脏B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.01)。与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠脾脏NK细胞表达比列有升高的趋势,T细胞表达比例有下降的趋势(P>0.05)。与对照组比较,Az组小鼠脾脏B细胞表达比例升高,差异有统计学意义(P<0.05)。与对照组比较,Az组和Az+ABZ组小鼠腹腔NK细胞和B细胞表达比例有升高的趋势,T细胞和CD8^(+)T细胞表达比例有下降的趋势(P>0.05)。与Az组比较,肝脏,脾脏,腹腔淋巴细胞中的NK细胞都有上调的趋势。结论热休克蛋白70抑制剂Apoptozole联合阿苯达唑干预多房棘球蚴感染小鼠模型,能够抑制病灶活性,促进NK细胞向肝脏中的募集,介导对多房棘球蚴病灶的抑制。 展开更多
关键词 多房棘球蚴 热休克蛋白70 淋巴细胞 病灶活性
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1例罕见的伴有盆腔巨大肿物的肝棘球蚴病报告
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作者 郑兴武 朱书君 +3 位作者 李建祺 单琳 付玉广 孟祥鑫 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第7期967-970,共4页
患者,女,45岁,平素月经规律,无痛经史。2024年6月19日因无诱因腹痛2天来院就诊。CT发现肝左叶及肝右叶上、下段见类圆形及不规则低密度囊状影,大小分别为7.4 cm×6.6 cm、7.6 cm×4.2 cm、9.6 cm×6.1 cm,可见囊壁及囊内分... 患者,女,45岁,平素月经规律,无痛经史。2024年6月19日因无诱因腹痛2天来院就诊。CT发现肝左叶及肝右叶上、下段见类圆形及不规则低密度囊状影,大小分别为7.4 cm×6.6 cm、7.6 cm×4.2 cm、9.6 cm×6.1 cm,可见囊壁及囊内分隔,同时于盆腔见一囊状影,大小约9.7 cm×11.4 cm×8.7 cm,内见分隔;血清学检查结果显示囊虫抗体IgG弱阳性,包虫抗体IgG弱阳性,同时术前血常规结果显示嗜酸性粒细胞比例异常增高;病理学检查结果显示肝脏组织中呈现坏死粉染样的头节轮廓,头节内存在残留的小钩,依据上述结果诊断为患棘球蚴病。7月2日,行肝左外叶+肝右后叶+盆腔囊肿切除术。手术切除术后,予以杀虫治疗一疗程,恢复情况良好,于7月14日出院。后续两次因棘球蚴病术后入院,均予以杀虫治疗一疗程,病情好转后出院,居家进行阿苯达唑治疗。 展开更多
关键词 棘球蚴病 山东省 病例报告
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细粒棘球绦虫感染细胞自噬分子调控机制及治疗潜力研究进展
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作者 赵慧卿 于涛 +1 位作者 王利磊 王文倩 《中国病原生物学杂志》 北大核心 2025年第12期1662-1667,共6页
囊型棘球蚴病(Cystic echinococcosis,CE)(又称囊型包虫病)是一种全球性人畜共患病,是由动物源性寄生虫细粒棘球绦虫感染引起的,狗是其最适宜的终末宿主,也是该病的主要传染源,羊为主要中间宿主,牛、马、猪、骆驼等也能够感染此寄生虫,... 囊型棘球蚴病(Cystic echinococcosis,CE)(又称囊型包虫病)是一种全球性人畜共患病,是由动物源性寄生虫细粒棘球绦虫感染引起的,狗是其最适宜的终末宿主,也是该病的主要传染源,羊为主要中间宿主,牛、马、猪、骆驼等也能够感染此寄生虫,并成为传染源。人类感染者主要经过消化道误食虫卵或者与已经感染的动物密切接触而被感染,细粒棘球绦虫的虫体能够寄生于人体肝脏及全身各处,其慢性感染过程涉及宿主与寄生虫间复杂的免疫互作。细胞自噬(Autophagy)是真核生物中高度保守的细胞降解和循环过程,参与饥饿、细胞分化、细胞死亡等多种生理过程和疾病过程的调节。近年研究发现,细胞自噬作为宿主细胞内稳态的核心调控机制,在寄生虫的免疫逃逸、包囊存活及宿主组织损伤中发挥了双重作用。本文系统综述了自噬相关信号通路(如mTOR、AMPK、PI3K-AKT)、细胞自噬关键分子(如LC3、Beclin-1、p62)在囊型棘球蚴病的病理进程中的机制作用,探讨寄生虫来源的分子(如抗原B、EgTeg)对宿主自噬的调控机制,期望能够为靶向自噬的潜在治疗策略以及相关药物研发提供重要的理论依据。 展开更多
关键词 囊型棘球蚴病 细粒棘球绦虫 细胞自噬 寄生虫
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细粒棘球绦虫EgM123表面展示型酿酒酵母菌株的构建及免疫原性初步评价
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作者 贾新月 马静 +6 位作者 普娜 赵文卿 陈旭珂 张艳艳 孙艳 薄新文 王正荣 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第1期378-391,共14页
旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123... 旨在构建并制备细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株,并初步评价其免疫效果,以期为细粒棘球绦虫终末宿主酿酒酵母活载体口服疫苗的研发提供理论基础。克隆细粒棘球绦虫EgM123基因,构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。诱导培养表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123,并进行体外分析,通过免疫荧光分析以及BCA蛋白定量法对EgM123蛋白进行定位鉴定及定量分析。诱导表达表面展示型酿酒酵母EBY100/pYD1-EgM123菌株并免疫BALB/c小鼠。通过检测小鼠血清中抗体及细胞因子水平变化评价细粒棘球绦虫EgM123口服酵母活载体菌株的免疫效果。结果成功克隆了细粒棘球绦虫EgM123的ORF序列,长度为594 bp。PCR检测以及酶切鉴定结果表明,成功构建EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母菌株。免疫荧光结果显示,EBY100/pYD1-EgM123表面具有绿色荧光,BCA蛋白定量法测定50 OD_(600 nm)EBY100/pYD1-EgM123诱导72 h后蛋白的表达量为15.59μg,浓度为0.31μg/OD_(600 nm)。抗体水平检测结果表明,EBY100/pYD1-EgM123免疫组特异IgG、IgA、IgM抗体的分泌均高于PBS组、EBY100组及EBY100/pYD1组(P<0.05)。细胞因子检测发现,EBY100/pYD1-EgM123免疫组对小鼠细胞因子IL-17、IFN-γ的分泌量显著加强(P<0.001)。综上所述,通过对细粒棘球绦虫EBY100/pYD1-EgM123表面展示型酿酒酵母口服活载体菌株免疫效果的初步评价,发现该口服活载体菌株具有免疫原性,可以刺激小鼠产生特异性免疫应答,进一步说明其具有成为终末宿主抗囊型包虫候选疫苗的潜力。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 EgM123 表面展示型酿酒酵母 口服疫苗
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基于线粒体cox2基因的细粒棘球绦虫RPA-CRISPR/Cas12a检测方法的建立
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作者 周愉乐 唐文强 +5 位作者 李鑫 石斌 赵霞玲 马艳 炊文婷 黄福强 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第6期606-613,共8页
为建立灵敏、特异的细粒棘球绦虫即时核酸检测方法,本研究结合重组酶聚合酶扩增技术(RPA)和CRISPR/Cas12a系统,以细粒棘球绦虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基2(cox2)基因为靶标,设计5条RPA正向引物和5条反向引物,并根据确定的原间隔相邻基序... 为建立灵敏、特异的细粒棘球绦虫即时核酸检测方法,本研究结合重组酶聚合酶扩增技术(RPA)和CRISPR/Cas12a系统,以细粒棘球绦虫线粒体细胞色素c氧化酶亚基2(cox2)基因为靶标,设计5条RPA正向引物和5条反向引物,并根据确定的原间隔相邻基序(PAM)设计合成7条CRISPR RNA(crRNA:cox2-1/2/3/4/5/6/7),初步建立了细粒棘球绦虫RPA-CRISPR/Cas12a单管检测方法,并通过荧光结果筛选出最佳RPA扩增引物及最佳crRNA。利用建立的方法分别检测细粒棘球绦虫、多房棘球绦虫、带状泡尾绦虫、贝氏莫尼茨绦虫、犬复孔绦虫、犬弓首蛔虫和肝片吸虫共7种寄生虫DNA,评估该方法的特异性,结果显示,该方法仅可特异性检测细粒棘球绦虫DNA,其他寄生虫DNA检测结果均为阴性,且可在20 min内得到检测结果;将重组质粒标准品稀释至1000拷贝/μL、500拷贝/μL、100拷贝/μL、50拷贝/μL、10拷贝/μL、1拷贝/μL,分别作为模板经建立的方法检测,结果显示,该方法对重组质粒标准品的检测限可达50拷贝/μL;以检测限浓度的质粒标准品为模板,采用所建立的方法于不同时间检测,每次做两组平行对照,共做3次,评估该方法的重复性,结果显示,6组试验的荧光值差异较小。表明本研究建立的方法特异性强、敏感性高、重复性好。利用该方法对62份临床犬粪便样品检测,结果显示细粒棘球绦虫的阳性率约为0.16%(1/62),与qPCR的检测结果相符。本研究建立了RPA-CRISPR/Cas12a单管检测方法,并对次优PAM和次优结构的crRNA进行了优化,该方法可在短时间内完成特异、灵敏地检测,有望成为细粒棘球绦虫终末宿主现场筛查的新型替代检测工具。 展开更多
关键词 细粒棘球绦虫 核酸扩增检测 重组酶聚合酶扩增技术 CRISPR/Cas12a crRNA cox2基因
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2019-2023年西藏自治区人类囊型棘球蚴病流行特征及影响因素
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作者 艾佳佳 季笑遥 +5 位作者 白玛央金 郑晶莹 白杨 朱畅 次仁拉姆 贡桑曲珍 《中华疾病控制杂志》 北大核心 2025年第5期600-605,共6页
目的分析2019-2023年西藏自治区人类囊型棘球蚴病(cystic echinococcosis,CE)患病率及其影响因素,为制定更精准的防治策略提供科学依据。方法使用2检验和广义相加模型(generalized additive model,GAM),分析组间差异及各县(区)人类CE患... 目的分析2019-2023年西藏自治区人类囊型棘球蚴病(cystic echinococcosis,CE)患病率及其影响因素,为制定更精准的防治策略提供科学依据。方法使用2检验和广义相加模型(generalized additive model,GAM),分析组间差异及各县(区)人类CE患病率及影响因素。结果2019-2023年西藏自治区共筛查510063人,检出CE患者2214人,平均患病率为0.43%。女性(0.52%)、≥60岁年龄组(0.95%)、生活在牧业县(1.09%)以及阿里地区(0.95%)的人群CE患病率高,2019年人类CE患病率(0.29%)低于其他年份。单因素和多因素分析结果均显示,海拔和家犬感染率对人类CE患病率呈非线性关系(均P<0.001)。结论西藏自治区人类CE患病率受海拔、家犬感染率、家畜患病率和犬只数等多种因素影响。建议在未来的防治工作中,应加大对重点人群的防控力度,并采取相应的改进措施以提高防治效果。 展开更多
关键词 囊型棘球蚴病 细粒棘球绦虫 流行特征
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细粒棘球蚴原头蚴在体内外对小鼠肝癌影响的初步研究
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作者 蔡克丰 伍希雅 +5 位作者 崔杰 林芷伊 熊梓彤 吴正展 黄延鑫 张宏伟 《石河子大学学报(自然科学版)》 北大核心 2025年第4期414-422,共9页
目的基于体外、体内实验探讨细粒棘球蚴原头蚴对小鼠肝癌Hepa1-6细胞直接和间接作用。方法在体外实验中,使用不同数量单位的原头蚴干预肝癌细胞,采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况,Western-Blotting检测肝癌细胞Bax、Bcl-2、Casepase-3... 目的基于体外、体内实验探讨细粒棘球蚴原头蚴对小鼠肝癌Hepa1-6细胞直接和间接作用。方法在体外实验中,使用不同数量单位的原头蚴干预肝癌细胞,采用CCK-8法检测肝癌细胞增殖情况,Western-Blotting检测肝癌细胞Bax、Bcl-2、Casepase-3凋亡蛋白表达水平,通过划痕实验和Transwell实验观察肝癌细胞的迁移和侵袭能力。体内实验将小鼠随机分为Control组、CE组、Hepa1-6组和CE+Hepa1-6组。CE组及CE+Hepa1-6组小鼠于肝叶上接种原头蚴,30 d后Hepa1-6组于小鼠肝叶上注射Hepa1-6肿瘤细胞,CE+Hepa1-6组于包虫囊肿所在肝叶上注射Hepa1-6肿瘤细胞。20 d后处死小鼠,使用ELISA法检测血浆AFP水平,HE染色观察病理学变化,免疫组化分析CD4及CD8免疫细胞的分布情况。结果体外研究结果显示,CCK-8结果示48 h后1500个·mL-1组增殖能力显著高于空白组(P<0.01),72 h后1000、1500个·mL-1组增殖能力显著高于空白组(P<0.01),96 h后各干预组增殖能力均显著高于空白组(P<0.01)。Western-Blotting分析结果显示,1000个·mL-1、1500个·mL-1组的Bax/Bcl-2相对表达量和casepase-3的表达量均低于空白组(P<0.05)。划痕实验和Transwell实验示1000、1500个·mL-1组迁移能力和侵袭能力均显著高于空白组(P<0.01)。体内研究结果显示,CE+Hepa1-6组小鼠成瘤率显著低于Hepa1-6组成瘤率(P<0.01),ELISA法测得CE+Hepa1-6组的AFP表达量显著低于Hepa1-6组(P<0.01)。免疫组化分析结果显示,CD8主要分布在CE+Hepa1-6组和Hepa1-6组瘤实质内,少量分布在瘤周,CE+Hepa1-6组瘤组织CD8表达显著高于Hepa1-6组(P<0.01)。CD4主要分布在CE+Hepa1-6组瘤实质内,而在Hepa1-6组瘤内及瘤周表达极少,CE+Hepa1-6组瘤组织CD4表达显著高于Hepa1-6组(P<0.01),CE+Hepa1-6组CD4/CD8比值高于Hepa1-6组(P<0.01)。结论原头蚴能在体外促进肝癌细胞的增殖、迁移和侵袭,同时抑制其凋亡;在体内能显著抑制瘤体形成,且CD4和CD8阳性的相关免疫细胞参与了此过程。 展开更多
关键词 细粒棘球蚴 肝癌 增殖 凋亡 迁移 侵袭
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